检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 101-109页

作者：张恒肖红剑李海巍杨耀云段金梅李智华中国医学科学院医学生物学研究所病原体感染防控教育部重点实验室(北京协和医学院)昆明650031

目的通过基因序列设计及优化,构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV)PreF蛋白,对其免疫原性进行评价。方法分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列,并添加到RSV F蛋白序列后,将上述质粒转染Expi293F细胞进... 详细信息

目的通过基因序列设计及优化,构建质粒并表达纯化出4种呼吸道合胞病毒(RSV)PreF蛋白,对其免疫原性进行评价。方法分别用Human和CHO密码子优化Coronin-1A和T4三聚体蛋白基因序列,并添加到RSV F蛋白序列后,将上述质粒转染Expi293F细胞进行蛋白质表达,收获上清经镍柱纯化后,制备出4种三聚体蛋白,并进行SDS-PAGE分析及Western blot鉴定。于0周和3周免疫动物,采血后进行结合抗体和中和抗体活性检测。结果SDS-PAGE分析及Western blot鉴定结果表明,制备及表达的4种蛋白质具有稳定的三聚体结构;抗原抗体亲和力试验表明,4种三聚体蛋白与RSV特异性单抗8897、D25、Motavizumab、AM14和Palivizumab的亲和力均很强;免疫血清的结合抗体效价和中和抗体效价结果表明,初次免疫后,两种T4三聚体蛋白诱导的抗体水平更高,再次免疫后,Human密码子优化的三聚体蛋白抗体增长幅度较高。结论两种不同的异源三聚体基序添加均可产生有效的三聚体PreF蛋白,并能在小鼠体内诱导出有效的结合抗体和中和抗体。

关键词：呼吸道合胞病毒 PreF三聚体蛋白抗体效价

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呼吸道合胞病毒PreF和PostF重组蛋白疫苗的免疫原性评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第2期44卷 110-119页

作者：陈佳敏肖红剑杨耀云张恒李智华李倩倩中国医学科学院医学生物学研究所病原体感染防控教育部重点实验室(北京协和医学院)昆明650031 云南大学生命科学学院昆明650091

目的对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达,使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力,用PreF和PostF免疫小鼠,检测免疫血清的结合... 详细信息

目的对比呼吸道合胞病毒(RSV)融合前F蛋白(PreF)和融合后F蛋白(PostF)的免疫原性差异。方法通过SDS-PAGE及Western blot鉴定PreF和PostF的表达,使用Octet仪器检测F蛋白与特异性抗体的亲和力,用PreF和PostF免疫小鼠,检测免疫血清的结合抗体与中和抗体差异。结果PreF经改造后以稳定的三聚体形式存在,与单抗D25、8897、AM14、Palivizumab以及Motavizumab均具有很高的亲和力,但PostF缺乏表位Ø构象,并呈现单体构象,与D25、8897、AM14并无明显结合。PreF和PostF免疫小鼠的研究发现,AS01佐剂比铝佐剂更能诱导出高滴度结合抗体和针对RSV Long株的中和抗体。PreF与PostF免疫后诱导的结合抗体与PreF的结合能力相当,PostF免疫后诱导的结合抗体与PostF的结合水平显著高于PreF。结论PreF拥有更多的抗体结合表位,改造后稳定的PreF三聚体重组蛋白能够诱导更强的中和抗体。同时,AS01佐剂免疫效果优于铝佐剂。因此,基于PreF稳定的三聚体结构改造及佐剂的研发对于RSV疫苗的发展至关重要。

关键词：呼吸道合胞病毒重组F蛋白融合前构象佐剂免疫评价

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人偏肺病毒融合蛋白疫苗研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第7期44卷 608-613页

作者：王怡丹李智华毕研伟李倩倩中国医学科学院医学生物学研究所病原体感染防控教育部重点实验室(北京协和医学院)昆明650031 云南大学生命科学学院昆明650091

人偏肺病毒是一种常见的呼吸道病毒,属肺炎病毒科偏肺病毒属,2001年首次发现于荷兰,全球广泛分布,能够反复感染婴幼儿、老年人及免疫功能低下者,并引起急性呼吸道感染。目前,尚无有效的预防性疫苗批准上市。本文主要概述人偏肺病毒的病... 详细信息

人偏肺病毒是一种常见的呼吸道病毒,属肺炎病毒科偏肺病毒属,2001年首次发现于荷兰,全球广泛分布,能够反复感染婴幼儿、老年人及免疫功能低下者,并引起急性呼吸道感染。目前,尚无有效的预防性疫苗批准上市。本文主要概述人偏肺病毒的病毒学和流行病学特征,介绍其潜在疫苗关键免疫原融合蛋白的结构和抗原位点,以及基于融合蛋白设计的亚单位疫苗、减毒活疫苗和核酸疫苗研究的最新进展。

关键词：人偏肺病毒疫苗融合蛋白抗原设计

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雌性恒河猴月经周期异常与肠道微生物的相关性研究

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中国现代医生 2024年第17期62卷 1-6,12页

作者：谢明学赵宸颜宇宸彭正华李娇春谭银珍王学付张朝武杨武赵远中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所生产处云南昆明650118 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所实验动物部云南昆明650118

目的以健康雌性育龄期恒河猴为研究对象,采用16S rRNA宏基因组方法探讨雌性恒河猴月经周期异常与肠道微生物组成的相关性。方法将27只健康雌性恒河猴分为月经规律和不规律两组,分别采集两组实验猴卵泡期(follicular phase,FP)、排卵期(o... 详细信息

目的以健康雌性育龄期恒河猴为研究对象,采用16S rRNA宏基因组方法探讨雌性恒河猴月经周期异常与肠道微生物组成的相关性。方法将27只健康雌性恒河猴分为月经规律和不规律两组,分别采集两组实验猴卵泡期(follicular phase,FP)、排卵期(ovulatoryperiod,OP)和黄体期(lutealphase,LP)粪便样品,对16SrRNA基因的V3~V4高变区测序,分析比较两组实验猴月经周期肠道菌群结构及多样性。结果在门水平,规律组和不规律组猕猴在卵泡期、黄体期和排卵期3个不同时期均以厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes)为主要菌群,占比总和超过98%;在属水平以普雷沃菌属_9(Prevotella_9)、瘤胃球菌(Ruminococcaceae_UCG-002)、乳杆菌属(Lactobacillus)、普雷沃菌属_2(Prevotella_2)、考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)、瘤胃球菌_UCG-005(Ruminococcaceae_UCG-005)、链球菌属(Streptococcus)、布劳特菌属(Blautia)、普雷沃菌属_NK3B31(Prevotellaceae_NK3B31_group)、理研菌属(Rikenellaceae_RC9_gut_group)为主;在黄体期规律组厚壁菌门(Firmicutes)占比高于不规律组,而拟杆菌门(Bacteroidetes)刚好相反。规律组3个阶段,螺旋体门(Spirochaetes)均高于不规律组(P<0.05)。结论月经周期规律与月经周期不规律的两组猕猴肠道微生物组成存在一定差异,为研究肠道细菌与排卵障碍提供一定的参考依据。

关键词：恒河猴月经周期肠道微生物宏基因组

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基于实验猴国家标准对野外救护猴病毒血清学检测分析

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野生动物学报 2023年第2期44卷 266-272页

作者：李世宗李艳艳金志堃李中员杨凤梅靳玮华唐洁陈丽雄刘权孙文亭邓自君赵远和占龙云南森林自然中心昆明650224 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所国家非人灵长类实验动物资源库云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 西双版纳州野生动植物保护管理站景洪666100

为了调查分析云南省内野外救护猴病毒血清状况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)对来源于云南省范围内救护的野生熊猴(Macaca assamensis)、北豚尾猴(***)、猕猴(***)和短尾猴(***)的猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)、猴T细胞趋向性病毒Ⅰ型(STLV-1)、... 详细信息

为了调查分析云南省内野外救护猴病毒血清状况,采用酶联免疫吸附法(ELISA)对来源于云南省范围内救护的野生熊猴(Macaca assamensis)、北豚尾猴(***)、猕猴(***)和短尾猴(***)的猕猴疱疹病毒Ⅰ型(BV)、猴T细胞趋向性病毒Ⅰ型(STLV-1)、猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转D型病毒(SRV)和猴痘病毒(SPV)血清抗体水平进行检测。结果表明:野生猴BV、STLV-1和SRV抗体阳性率分别为15.96%、1.06%和3.19%,SIV和SPV抗体未检出。熊猴、北豚尾猴、猕猴和短尾猴的BV抗体阳性率分别为6.98%、0、26.47%和75.00%;熊猴和北豚尾猴SRV抗体阳性率为2.33%和15.38%;仅有猕猴检测到STLV-1抗体,阳性率为2.94%;混合感染率为0。经Fisher确切概率检验法比较,雌性和雄性抗体阳性率无显著差异(p>0.05);熊猴与猕猴、熊猴与短尾猴BV抗体阳性率均具有显著性差异(p<0.05)。老年猴BV及SRV阳性率较高。野生猴病毒抗体阳性率与性别无关,随年龄增长感染率增加,不同物种间部分病毒血清抗体阳性率存在差异。研究结果可为野生动物救护治疗及野生猴疫源疫病监测提供参考。

关键词：野生猴病毒血清抗体国家标准

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Vero细胞生物反应器微载体无血清培养甲型流感病毒

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中国生物制品学杂志 2022年第11期35卷 1388-1391页

作者：钏鸿云阮朝列莫明和王静王多义朱莲海刘云璨廖国阳周健中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南大学省部共建云南生物资源与利用国家重点实验室云南昆明650091

目的采用Vero细胞生物反应器微载体无血清培养甲型流感病毒。方法将Vero细胞分别采用无血清和有血清培养基于生物反应器(pH 7.2,温度37℃,溶氧量50%,转数60 r/min)中培养24 h,均用无血清培养基进行灌流培养至7 d,进行计数,并按MOI=0.1接... 详细信息

目的采用Vero细胞生物反应器微载体无血清培养甲型流感病毒。方法将Vero细胞分别采用无血清和有血清培养基于生物反应器(pH 7.2,温度37℃,溶氧量50%,转数60 r/min)中培养24 h,均用无血清培养基进行灌流培养至7 d,进行计数,并按MOI=0.1接种H1N1型流感病毒,加入终浓度为1μg/mL的TPCK-胰酶,于生物反应器(pH 7.8,温度33.0℃,溶氧量25%,转数60 r/min)中培养18、22、42、48、66 h,取样,检测血凝效价。结果Vero细胞经无血清和有血清培养基培养7 d的细胞数分别为(133.4±2.0)×104和(193.8±1.3)×104个/mL,接种H1N1流感病毒66 h后血凝效价几何平均数分别为1∶388和1∶675,前者细胞数及病毒血凝效价几何平均数均显著低于后者(t分别为7.068和4.332,P均<0.05)。结论采用Vero细胞通过生物反应器微载体无血清培养H1N1型流感病毒的血凝效价可满足流感病毒裂解疫苗制备的要求。

关键词：流感病毒无血清培养微载体 Vero细胞

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1株悬浮培养的Vero细胞驯化及其生物学特性研究

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昆明医科大学学报 2024年第6期45卷 7-14页

作者：付兰博阮朝列陈昶旭高羽鲍晓琳刘伯川周健李卫东中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南大学生态与环境学院&省部共建云南生物资源保护与利用国家重点实验室云南昆明650091

目的将贴壁培养的Vero细胞驯化成悬浮培养细胞,并对其生物学特性进行研究。方法采用无血清培养和“摇床适应法”对细胞进行培养优化,对其进行成瘤性、短串联重复序列(short tandem repeat,STR)分析、透射电子显微镜形态,以及对流感病... 详细信息

目的将贴壁培养的Vero细胞驯化成悬浮培养细胞,并对其生物学特性进行研究。方法采用无血清培养和“摇床适应法”对细胞进行培养优化,对其进行成瘤性、短串联重复序列(short tandem repeat,STR)分析、透射电子显微镜形态,以及对流感病毒敏感性检测。结果成功建立悬浮细胞系Vero-S,Vero-S细胞生长期在24~72 h,平台期在108~144h之间,衰退期在144h以后,细胞PDT为36 h,细胞密度在14.01~14.88×10^(8)个/L之间,细胞平均圆度在0.73~0.75之间,细胞直径在12.12~14.44μm之间。Vero-S细胞在裸鼠皮下形成肿瘤,而悬浮培养前的Vero细胞不具有成瘤性;STR显示为猴源细胞系;电镜下细胞结构完整;Vero-S细胞对流感病毒感染不敏感。结论悬浮细胞系Vero-S细胞的生长经历与贴壁细胞类似的生长期、平台期、衰退期,且细胞大小均一,建立的悬浮培养基能够支持Vero-S细胞高密度生长。STR结果表明悬浮Vero细胞具有完全的遗传稳定性,透射电镜下与贴壁Vero细胞无明显区别。为细胞悬浮驯化培养技术提供参考价值,并可用于细胞致肿瘤的机理研究。

关键词： Vero细胞细胞悬浮驯化技术成瘤性病毒敏感性

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血清ALP检测在犬肿瘤预后诊断的应用研究

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养殖与饲料 2024年第5期23卷 7-11页

作者：陈丽玲陈丽雄郭艳姚璐徐彦琼刘汝文昆明医科大学临床技能中心昆明655000 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 曲靖市廖廓动物医院云南曲靖650500 昆明医科大学实验动物学部昆明650118

[目的]探讨血清中ALP测定对犬肿瘤性质的诊断价值研究。[方法]选取2020年6月—2023年6月收集的犬肿瘤病例共20例,分病患(试验组)与正常(对照组),根据视诊、触诊,采用微纳芯全自动动物生化仪测定数据,并进行回顾性分析,再结合X射线透视... 详细信息

[目的]探讨血清中ALP测定对犬肿瘤性质的诊断价值研究。[方法]选取2020年6月—2023年6月收集的犬肿瘤病例共20例,分病患(试验组)与正常(对照组),根据视诊、触诊,采用微纳芯全自动动物生化仪测定数据,并进行回顾性分析,再结合X射线透视图分析肿瘤部位和游离状态。[结果]试验组血清ALP的含量比对照组高4~5倍,明显高于对照组(P<0.01);X射线透视图显示游离程度不高,粘黏深度不清,肿瘤转移严重,疑似恶性肿瘤,并且预后不良。[结论]犬肿瘤患者的预后判断中,血清ALP的检测有较强的诊断价值,可在小动物临床上进一步推广与应用。

关键词：碱性磷酸酶ALP 肿瘤宠物犬预后诊断

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1例猫天疱疮的诊治

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养殖与饲料 2023年第7期22卷 82-84页

作者：陈丽玲陈丽雄王俊斌郭艳刘汝文昆明医科大学临床技能中心昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650032 昆明医科大学实验动物学部昆明620500

猫天疱疮(Pemphigus)是猫的皮肤病之一,多为免疫机制紊乱引起。本文介绍了1例3岁患猫出现痂皮、溃烂、疱状、角化症状,通过临床检查、实验室血液检查、组织病理学检查确诊为猫的天疱疮。根据病症及药敏试验,通过使用免疫抑制剂、激素、... 详细信息

猫天疱疮(Pemphigus)是猫的皮肤病之一,多为免疫机制紊乱引起。本文介绍了1例3岁患猫出现痂皮、溃烂、疱状、角化症状,通过临床检查、实验室血液检查、组织病理学检查确诊为猫的天疱疮。根据病症及药敏试验,通过使用免疫抑制剂、激素、抗生素,还利用瞬感实时检测血糖仪监测血糖,控制血糖升高,4个月治疗取得满意效果。

关键词：猫天疱疮皮肤病免疫抑制

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甲基苯丙胺半抗原设计与抗体间接ELISA检测方法的优化

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中国药物依赖性杂志 2021年第1期30卷 30-34页

作者：郑鹏朱喆刘翠秀赵文嵩曾发明李映波中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省公安厅毒品分析及禁毒技术公安部重点实验室昆明650228

目的:提供一种有效的甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)半抗原设计,并对MA抗体ELISA检测方法进行优化。方法:将合成的MA半抗原与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分别偶联(TT/BSA-SMA)作为免疫... 详细信息

目的:提供一种有效的甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)半抗原设计,并对MA抗体ELISA检测方法进行优化。方法:将合成的MA半抗原与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)和牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分别偶联(TT/BSA-SMA)作为免疫抗原和包被抗原,通过梯度稀释法优化ELISA反应体系中抗原最佳包被浓度和最佳酶标抗体浓度(1∶2000-1∶6000)等工作条件,并进行方法的稳定性、特异性验证。结果:优化后最佳的包被缓冲液为磷酸缓冲液(phosphate buffer solution,PBS),2μg·ml-1的包被抗原在37℃2 h后4℃包被过夜为最佳包被反应条件,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉封闭120 min,最佳酶标抗体稀释度为1∶3000(1.33μg·ml-1),最佳孵育时间为60 min,最佳底物显示时间为15 min。该方法重复性实验变异系数均在5%以内,并且只能检测出MA抗体,特异性良好。结论:本研究中的半抗原结构能诱导MA抗体的产生,并成功建立间接ELISA检测MA抗体的最佳工作条件,可为MA疫苗临床前研究奠定基础。

关键词：甲基苯丙胺半抗原抗体 ELISA

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