检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2008年第6期30卷 690-695页

作者：陈凤郭雅彬刘士廉郑德先刘彦信中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所北京肿瘤分子生物学实验室北京100142

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳... 详细信息

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。

关键词：抗死亡受体5嵌合抗体中国仓鼠卵巢细胞人IgG轻链人IgG重链

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NSPc1相互作用蛋白的筛查及其与组蛋白乙酰化酶HBO1相互作用的验证

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基础医学与临床 2008年第6期28卷 529-534页

作者：龚燕华石磊吴旭东强伯勤彭小忠袁建刚中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的寻找多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1的体内可能的相互作用蛋白。方法通过酵母双杂交实验筛选与NSPc1相互作用的蛋白。使用Pull-down实验,Co-IP实验以及细胞内荧光共定位实验进一步证实双杂交中发现的相互作用。结果分别以NSPc1... 详细信息

目的寻找多梳家族(polycomb group)蛋白NSPc1的体内可能的相互作用蛋白。方法通过酵母双杂交实验筛选与NSPc1相互作用的蛋白。使用Pull-down实验,Co-IP实验以及细胞内荧光共定位实验进一步证实双杂交中发现的相互作用。结果分别以NSPc1蛋白的全长、N端和C端作为诱饵筛查人3月胎脑cDNA文库,发现N端诱饵可以与组蛋白乙酰化转移酶HBO1相互作用,该相互作用在体内外实验中都得到了验证。结论组蛋白乙酰化酶HBO1是NSPc1的相互作用蛋白之一,该相互作用可能参与NSPc1对靶基因转录的表观抑制活性的发挥。

关键词：多梳家族神经系统多梳蛋白1 酵母双杂交蛋白质相互作用组蛋白乙酰化酶

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人造血增效因子C末端结构与其趋化活性的关系

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基础医学与临床 2008年第2期28卷 144-148页

作者：罗丝杨克恭刘长征邓艳春苏林孔燕陈松森中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在***21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯... 详细信息

目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在***21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。结论hHSF C末端结构,特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。

关键词：人造血增效因子 C末端缺失变异体趋化活性

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小鼠胸腺雄激素受体的定位及其与新分子Rwdd1的关系

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基础医学与临床 2008年第7期28卷 696-701页

作者：陈岱康宁汤龙刘庆丰胡愉崔莲仙何维中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究雄激素受体(AR)在胸腺萎缩中的作用机制。方法用免疫组化和RT-PCR观察AR在小鼠胸腺内的分布;用刀豆蛋白A(ConA)诱导胸腺细胞增殖,观察睾酮对细胞增殖的影响;构建AR和Rwdd1的真核表达载体pcDNA3.1-AR和pcDNA3.1-Rwdd1-V5,共转染2... 详细信息

目的研究雄激素受体(AR)在胸腺萎缩中的作用机制。方法用免疫组化和RT-PCR观察AR在小鼠胸腺内的分布;用刀豆蛋白A(ConA)诱导胸腺细胞增殖,观察睾酮对细胞增殖的影响;构建AR和Rwdd1的真核表达载体pcDNA3.1-AR和pcDNA3.1-Rwdd1-V5,共转染293T细胞,通过免疫共沉淀(CoIP)法观察二者之间在细胞内是否存在相互作用。结果AR广泛分布在胸腺皮质和髓质,且主要定位于胞核。在不同胸腺细胞亚群中均有AR表达,其中以CD4-CD8-(DN)细胞表达水平最高。3种胸腺上皮细胞系中仅皮质来源的427.1细胞系存在AR表达。胸腺细胞中存在功能性AR。AR与Rwdd1之间不存在直接相互作用。结论小鼠胸腺细胞中存在AR的表达,目前尚不能证明AR与Rwdd1存在直接的相互作用。

关键词：雄激素受体胸腺 Rwdd1

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小鼠脾脏来源的调节性表型γδT细胞的存在和体外诱导

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中国免疫学杂志 2008年第6期24卷 488-491页

作者：杨静琳康宁汤龙陈兴明刘庆丰崔莲仙胡云章何维北京协和医学院医学生物研究院中国医学科学院医学生物研究所疫苗室昆明650118 北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京101005 北京协和医院耳鼻喉科北京101005

目的:研究初始γδT细胞是否存在具有调节细胞表型的亚群,同时是否能够像CD4+CD25-T细胞一样可以在体外诱导产生具有调节表型的γδT细胞。方法:采用流式分选或磁珠分选的方法分离纯化脾淋巴细胞中γδT细胞,通过反转录聚合酶链反应(RT-... 详细信息

目的:研究初始γδT细胞是否存在具有调节细胞表型的亚群,同时是否能够像CD4+CD25-T细胞一样可以在体外诱导产生具有调节表型的γδT细胞。方法:采用流式分选或磁珠分选的方法分离纯化脾淋巴细胞中γδT细胞,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时定量PCR(Real-time PCR)和免疫荧光染色分析初始的γδT细胞以及TGFβ-(5ng/ml)诱导后的γδT细胞中Foxp3及部分调节性T细胞表面分子和细胞因子的表达情况。结果:与CD4+CD25+T细胞相比,初始的γδT细胞Foxp3表达量很低;活化的γδT细胞经过TGFβ-诱导后Foxp3表达量明显增加,同时与免疫调节相关的表面分子如GITR、CTLA-4和细胞因子TGFβ-、IL-10的表达量也相应增加,IFNγ-的表达有所降低。结论:初始的γδT细胞低表达Foxp3,在体外可经TGFβ-诱导产生具有调节性T细胞表型的亚群。

关键词： γδT细胞调节性T细胞 Foxp3 免疫调节

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血管紧张肽转化酶2与肾素-血管紧张肽系统的研究进展

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生命的化学 2008年第5期28卷 625-628页

作者：魏斌张艳丽武警北京市总队第三医院北京100039 医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院基础医学研究所、北京协和医学院基础学院北京100005

肾素-血管紧张肽系统(RAS)在维持血压稳态、水盐平衡,及局部组织器官的正常功能等方面具有重要的作用。局部RAS的失衡将导致这些器官的疾病。血管紧张肽转化酶2(ACE2)是ACE的同源物,作为RAS的重要负调节因子,平衡血管紧张肽Ⅱ的产生,维... 详细信息

肾素-血管紧张肽系统(RAS)在维持血压稳态、水盐平衡,及局部组织器官的正常功能等方面具有重要的作用。局部RAS的失衡将导致这些器官的疾病。血管紧张肽转化酶2(ACE2)是ACE的同源物,作为RAS的重要负调节因子,平衡血管紧张肽Ⅱ的产生,维持循环系统和局部组织中RAS的稳态。本文综述了在心血管、肺、肾、肝等器官的多种急、慢性疾病患者或动物模型中,RAS与ACE2所发挥的重要作用。

关键词：血管紧张肽转化酶2 血管紧张肽Ⅱ 肾素-血管紧张肽系统局部组织RAS

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载脂蛋白A-I结构及其功能

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生命的化学 2008年第3期28卷 279-282页

作者：王云龙卢恕来陈保生中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院国家医学分子生物学重点实验室北京100005 青岛市市立医院口腔科青岛266011

载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-1,ApoA-I)是高密度脂蛋白的重要组成成分,高密度脂蛋白对于冠心病有重要的保护作用。盘状高密度脂蛋白或者ApoA-I是体内胆固醇逆向转运过程的关键因子,而游离的ApoA-I是胆固醇和磷脂的受体,因此,了解其结... 详细信息

载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-1,ApoA-I)是高密度脂蛋白的重要组成成分,高密度脂蛋白对于冠心病有重要的保护作用。盘状高密度脂蛋白或者ApoA-I是体内胆固醇逆向转运过程的关键因子,而游离的ApoA-I是胆固醇和磷脂的受体,因此,了解其结构对于研究其功能显得尤其重要。本文对ApoA-I单体的结构、未结合脂质,以及结合磷脂后的构象及其相关功能作了综述。

关键词：载脂蛋白A-I 结合磷脂盘状高密度脂蛋白

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糖皮质激素受体基因ER22/23EK多态性与新疆维吾尔族人自然长寿的关系及与汉族人群的比较

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基础医学与临床 2008年第2期28卷 113-118页

作者：姜文锡程祖亨牛文全邱长春新疆医科大学新疆乌鲁木齐830054 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨糖皮质激素受体基因（GR）第2外显子ER22／23EK多态性与维吾尔族人自然长寿的关系及种族差异。方法选择新疆维吾尔族191名年龄〉90岁的健康个体为长寿组，另选53名年龄（65-70岁）、性别、地域相匹配已自然死亡的正常个体为对... 详细信息

目的探讨糖皮质激素受体基因（GR）第2外显子ER22／23EK多态性与维吾尔族人自然长寿的关系及种族差异。方法选择新疆维吾尔族191名年龄〉90岁的健康个体为长寿组，另选53名年龄（65-70岁）、性别、地域相匹配已自然死亡的正常个体为对照组；同时随机调查移居新疆和田地区30年以上的（65-70岁）汉族老年人82人。采用序列特异引物PCR（PCR-SSP）、PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RELP）和PCR-直接测序（PCR-sequeneing）等技术对GR基因进行分型。结果191名自然长寿老人和53名对照组中，ER22／23EK的等位基因和基因型频率无差异。新疆汉族老人GR基因ER22／23EK携带者显著高于维吾尔族老人，其WM、MM基因型（P〈0．001）和M等位基因频率（P〈0．0001）均显著高于维吾尔族老人，而册基因型和形等位基因频率则显著降低。结论ER22／23EK的等位基因和基因型频率可能与维吾尔族自然长寿无关联，但有显著的种族差异。

关键词：糖皮质激素受体基因自然长寿维吾尔族汉族

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内皮抑素和血管生成抑素融合基因的裂解病毒对C6胶质瘤的实验研究

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中华神经外科杂志 2008年第1期24卷 69-72页

作者：王建交杨立庄刘福生金贵善柴奇彭小忠(点评) 北京市神经外科研究所首都医科大学附属北京天坛医院100050 哈尔滨医科大学附属第二医院神经外科中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨重组单纯疱疹病毒介导的内皮抑素和血管生成抑素（Endo-Angio）融合基因对C6胶质瘤的疗效。方法构建含有Endo-Angio融合基因的重组单纯疱疹病毒，四唑蓝比色法（MTT法）体外观察其C6细胞的裂解作用；Western-blot观察Endo—Angi... 详细信息

目的探讨重组单纯疱疹病毒介导的内皮抑素和血管生成抑素（Endo-Angio）融合基因对C6胶质瘤的疗效。方法构建含有Endo-Angio融合基因的重组单纯疱疹病毒，四唑蓝比色法（MTT法）体外观察其C6细胞的裂解作用；Western-blot观察Endo—Angio融合蛋白的表达。建立大鼠C6模型，当肿瘤体积≥2mm^3时，治疗组瘤腔内注射10^7pfu（10μl）病毒，对照组注射等剂量生理盐水。MRI动态观察肿瘤体积变化，组织病理行微血管计数，并记录荷瘤鼠生存时间。结果体外实验示：当感染率（MOI）=1000时，99％的C6细胞死亡；头部MRI发现治疗组胶质瘤生长减慢；荷瘤鼠存活期：对照组（20．3±0．45）d，治疗组（38．3±0．96）d，中位生存期延长（P〈0．01）；HE染色见瘤细胞分散，体积较小，无出血坏死；病理染色示：治疗组和对照组新生血管均值分别为（5．3±1．7）／HP和（15．6±2．8）／HP（P〈0．01）。结论重组单纯疱疹病毒介导的Endo-Angio融合基因不仅通过抑制肿瘤的新生血管生成，而且通过裂解肿瘤细胞双重作用治疗颅内胶质瘤。

关键词：内皮抑素血管生成抑素血管生成 C6胶质瘤病毒-基因治疗

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颗粒酶B抑制剂的研究进展

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国际免疫学杂志 2008年第3期31卷 197-200页

作者：李一叶卢圣栋(审校) 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院分子生物学国家重点实验室北京100005

颗粒酶B是细胞毒淋巴细胞发挥免疫杀伤作用的重要效应因子，不仅在靶细胞内快速诱导凋亡及其它细胞毒作用，还具有重要的胞外生物学功能。颗粒酶B在机体内的自稳调节主要通过与丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员相互作用而实现。这种内源抑... 详细信息

颗粒酶B是细胞毒淋巴细胞发挥免疫杀伤作用的重要效应因子，不仅在靶细胞内快速诱导凋亡及其它细胞毒作用，还具有重要的胞外生物学功能。颗粒酶B在机体内的自稳调节主要通过与丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员相互作用而实现。这种内源抑制剂是细胞毒淋巴细胞及某些抗原递呈细胞保持其免疫内稳态的重要调控者，在临床上还能缓解与颗粒酶B死亡路径相关的自身免疫性疾病及移植排斥反应。多种肿瘤细胞已被发现有颗粒酶B抑制剂的表达，可能与其逃避促凋亡作用有关。为抵制抗感染效应，各种病毒亦进化产生了不同作用机制的颗粒酶B抑制剂。研究各种天然及人工合成的颗粒酶B抑制剂有助于在对抗人类自身免疫性疾病及癌症方面提供基于选择性调控的新型治疗方法，在抗病毒药物研制方面也具有潜在的临床应用价值。

关键词：颗粒酶B 丝氨酸蛋白酶抑制剂淋巴细胞生物学

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