检索结果-内蒙古大学图书馆

生物医学工程学杂志 2009年第2期26卷 351-355页

作者：何朝辉邢建民孔桦许海燕北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所北京100005

载药纳米粒的制备与应用是纳米生物医学研究中的重要方向之一,要获得释药性能稳定的载药纳米粒,需要解决的一个关键问题是确定重要工艺参数和进行制备工艺的优化。我们运用SPSS软件对复乳法制备载硫酸庆大霉素聚乳酸纳米粒(GS-PLLA-NPs... 详细信息

载药纳米粒的制备与应用是纳米生物医学研究中的重要方向之一,要获得释药性能稳定的载药纳米粒,需要解决的一个关键问题是确定重要工艺参数和进行制备工艺的优化。我们运用SPSS软件对复乳法制备载硫酸庆大霉素聚乳酸纳米粒(GS-PLLA-NPs)的工艺条件进行了正交设计优化,通过紫外-可见分光光谱对其体外释放行为进行了测定和分析。实验结果表明,PLLA的浓度与PLLA的分子量是影响GS-PLLA-NPs粒径分布均一性的关键因素,油水相之比对药物的释放行为有显著影响。在优化条件下制备的GS-PLLA-NPs粒径均匀,有较为理想的药物缓释效果,在抗骨术后感染、骨缺损修复等方面具有重要的应用价值。

关键词：纳米粒正交设计聚乳酸硫酸庆大霉素复乳法

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应用聚合酶链式反应鉴定实验细胞的来源种属

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基础医学与临床 2009年第4期29卷 423-430页

作者：卞晓翠刘玉琴王春景苏小玲赵晓梅顾蓓张宏中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所细胞中心北京100005

目的应用聚合酶链式反应(PCR)鉴定常见细胞的种属来源,以判断培养细胞是否存在种间的交叉污染。方法根据文献报道和NCBI数据库我们得到了32对种属特异性引物,并分别针对10种常见的细胞种属,对这些引物进行特异性和敏感性的筛选;以待检... 详细信息

目的应用聚合酶链式反应(PCR)鉴定常见细胞的种属来源,以判断培养细胞是否存在种间的交叉污染。方法根据文献报道和NCBI数据库我们得到了32对种属特异性引物,并分别针对10种常见的细胞种属,对这些引物进行特异性和敏感性的筛选;以待检测细胞的基因组DNA为模板进行PCR及后续的琼脂糖凝胶电泳;以不同种属来源细胞的DNA混合物作为阳性对照模板,以水作为阴性对照模板。结果针对上述10种常见细胞来源的种属分别得到了1对特异性和敏感性均较好的引物,经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳后可以准确鉴定待检测细胞的种属来源,并判断该细胞是否存在种间污染。结论应用聚合酶链式反应可以简便、快速地鉴定实验细胞的种属,并判断该细胞是否存在种间的交叉污染。

关键词：聚合酶链式反应细胞培养种属鉴定

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改良消化复合植块法培养新生大鼠雪旺细胞

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中国医学科学院学报 2016年第4期38卷 388-392页

作者：刘頔梁晓春张宏中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院中医科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所细胞中心北京100005

目的探讨改良的单酶消化法与组织贴块法相结合的培养雪旺细胞（SCs）的方法,并与经典植块法和普通消化复合植块法进行比较。方法取新生3～5 d的SD大鼠双侧坐骨神经和臂丛神经,分别采用经典植块法、普通消化复合植块法、改良消化复合植... 详细信息

目的探讨改良的单酶消化法与组织贴块法相结合的培养雪旺细胞（SCs）的方法,并与经典植块法和普通消化复合植块法进行比较。方法取新生3～5 d的SD大鼠双侧坐骨神经和臂丛神经,分别采用经典植块法、普通消化复合植块法、改良消化复合植块法培养SCs。培养7 d后进行细胞消化和传代,在显微镜下计数并计算细胞总量。用S-100免疫荧光染色法检测所获细胞的纯度。结果改良消化复合植块法培养的SCs生长增殖速度最快,可获取（1.85±0.13）×10^6个细胞;普通消化复合植块法次之,可获取（1.10±0.10）×10^6个细胞;经典植块法所获SCs的生长增殖速度最慢,可获取（0.77±0.03）×10^6个细胞,3种方法比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。S-100免疫荧光染色结果显示,改良消化复合植块法细胞纯度为（95.73±1.51）%,普通消化复合植块法为（84.66±2.68）%,经典植块法为（74.50±4.23）%,3种方法比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论改良消化复合植块法可以在短时间内获得大量高纯度的SCs,为研究周围神经修复再生奠定良好的基础。

关键词：雪旺细胞细胞培养植块法消化法

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反相C18固相萃取小柱用于蛋白质组分析中少量样品预处理

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生物工程学报 2015年第11期31卷 1643-1650页

作者：王丹琪孙伟邹丽莉王曌中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所中心实验室北京100005

针对少量且复杂蛋白质组样品,开发一种耗时短、操作简便的分离方法。以人的脑海马组织蛋白样品为研究对象,采用反相C18固相萃取小柱,采用不同乙腈浓度对酶切后样品进行梯度洗脱,与反相高效液相色谱法对比分离效果。通过比较不同乙腈梯... 详细信息

针对少量且复杂蛋白质组样品,开发一种耗时短、操作简便的分离方法。以人的脑海马组织蛋白样品为研究对象,采用反相C18固相萃取小柱,采用不同乙腈浓度对酶切后样品进行梯度洗脱,与反相高效液相色谱法对比分离效果。通过比较不同乙腈梯度洗脱方案所鉴定到的谱图数、非冗余多肽数、蛋白数和各洗脱组分间重复率分析,确定一种样品量少、简单易行、分离效果好的实验方案。虽然反相C18固相萃取小柱法鉴定蛋白总数占高效液相色谱法的85.5%,但其操作简单,耗时少。通过4种不同乙腈浓度方案比较,确定乙腈洗脱浓度优化为5%、15%、20%和90%时,分离30μg人的海马多肽混合物可以得到较优的分离效果。其蛋白鉴定数为反相液相色谱法的67.0%,且重复性良好。该结果证实反相C18固相萃取小柱分离效果比反相高效液相色谱法稍差,但此方法可以分离少量复杂蛋白质组样品。该方法分离样品充分,操作易行,耗时短,是进行蛋白质组学分析中少量样品的一个简便预处理方法。

关键词：反相色谱 C18固相萃取小柱乙腈浓度多肽分离蛋白鉴定

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天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷对阿尔茨海默病模型小鼠脑内β-淀粉样多肽表达的影响及其机制

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中华病理学杂志 2016年第11期45卷 780-785页

作者：周楠楠朱燃赵雪梅梁平中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的：观察天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷3种中药成分对5XFAD阿尔茨海默病（ AD）模型小鼠脑内β-淀粉样多肽（ Aβ）斑块及学习记忆和认知能力的影响。方法1.5个月龄5XFAD AD模型小鼠70只分为天麻素高、低剂量组（天麻素-H、天麻素-L）... 详细信息

目的：观察天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷3种中药成分对5XFAD阿尔茨海默病（ AD）模型小鼠脑内β-淀粉样多肽（ Aβ）斑块及学习记忆和认知能力的影响。方法1.5个月龄5XFAD AD模型小鼠70只分为天麻素高、低剂量组（天麻素-H、天麻素-L），黄芪总皂苷高、低剂量组（黄芪总皂苷-H、黄芪总皂苷-L）及芍药苷高、低剂量组（芍药苷-H、芍药苷-L），阳性对照组，每组10只；另取同窝阴性小鼠10只作为阴性对照组。药物干预4个月后，观察各组小鼠行为学变化及脑部病理学变化情况，并用模型细胞探讨其相关的作用机制。结果与阳性对照组相比，在行为学水迷宫试验中，天麻素-H、黄芪总皂苷-H和芍药苷-H组隐形平台寻找时间分别缩短，平台撤后在原目标象限停留时间分别延长（ P＜0.01）；在病理形态学检测中，天麻素-H、黄芪总皂苷-H和芍药苷-H组海马区Aβ斑块阳性面积分别降低70.1％、62.4％和57.6％（ P＜0.01），皮层区Aβ斑块阳性面积分别降低81.0％、69.6％和66.6％（ P＜0.01）；各干预组小鼠行为学改善和脑部Aβ斑块减少呈药物剂量依赖性；各干预组小鼠脑匀浆中及模型细胞培养上清液中Aβ水平均有降低；分泌酶表达结果显示，天麻素降低模型细胞β分泌酶基因转录水平达32.9％（ P＜0.01），降低β分泌酶蛋白表达水平达47.9％（ P＜0.01），黄芪总皂苷和芍药苷对β分泌酶在转录和蛋白表达水平无影响。结论天麻素、黄芪总皂苷和芍药苷均可明显改善5XFAD模型小鼠的学习认知及记忆能力，且均可明显抑制小鼠脑内Aβ斑块及脑组织中Aβ多肽，其中天麻素-H作用效果最好；天麻素抑制Aβ斑块可能与抑制β分泌酶进而减少Aβ的产生有关，而黄芪总皂苷和芍药苷未观察到对β分泌酶的影响。

关键词：阿尔茨海默病淀粉样β蛋白前体天麻属黄芪芍药属大脑皮质海马

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针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠双侧脑组织白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α表达的影响

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针刺研究 2012年第6期37卷 470-475页

作者：陈素辉孙华徐虹张亚敏高扬李沙中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院中医科北京100730 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所北京100005

目的:探讨脑缺血再灌注损伤大鼠双侧脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化及针刺的干预作用。方法:以右侧大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型,将大鼠随机分为模型组、假手术组和针刺组,每组再... 详细信息

目的:探讨脑缺血再灌注损伤大鼠双侧脑组织白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达变化及针刺的干预作用。方法:以右侧大脑中动脉线栓法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型,将大鼠随机分为模型组、假手术组和针刺组,每组再按照再灌注后时间分12、24、48、72、96、144h6个时间点,每个时间点6只大鼠,另设正常组6只。针刺组电针刺激"百会"和"足三里"穴,每日1次,每次20min。应用免疫组化法检测大鼠双侧脑组织IL-1β及TNF-α的表达量。结果:IL-1β在脑缺血大鼠患侧脑区呈双峰表达,模型组峰值时间为48h和96h,针刺组为72h,针刺组IL-1β表达量显著低于模型组,但高于假手术组和正常组(均P<0.05);IL-1β在脑缺血大鼠健侧脑区表达高于假手术组和正常组,除72h组外,针刺组各个时间点的表达低于模型组(均P<0.05)。TNF-α在患侧脑区呈单峰表达,模型组和针刺组峰值时间均为72h,针刺组表达量显著低于模型组,但高于假手术组和正常组(均P<0.05);TNF-α在脑缺血大鼠健侧脑区表达高于假手术组和正常组(均P<0.05)。结论:针刺可通过调节脑缺血大鼠双侧脑组织IL-1β及TNF-α的表达,干预脑缺血再灌注损伤大鼠的炎性反应。

关键词：针刺脑缺血再灌注损伤白细胞介素-1β 肿瘤坏死因子-α

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移植P选择素糖蛋白配体1过表达内皮祖细胞促进裸鼠缺血组织新生血管形成

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中华病理学杂志 2010年第9期39卷 621-626页

作者：李玲黄丽杨浩尹洪超中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的探讨细胞黏附的重要分子P选择素糖蛋白配体1（PSGL-1）在内皮祖细胞过表达对内皮祖细胞黏附能力以及促新生血管形成的影响.方法将人PSGL-1 cDNA亚克隆至穿梭质粒,包装扩增病毒.用所产病毒转染大鼠内皮祖细胞,用逆转录聚合酶链反应... 详细信息

目的探讨细胞黏附的重要分子P选择素糖蛋白配体1（PSGL-1）在内皮祖细胞过表达对内皮祖细胞黏附能力以及促新生血管形成的影响.方法将人PSGL-1 cDNA亚克隆至穿梭质粒,包装扩增病毒.用所产病毒转染大鼠内皮祖细胞,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot等方法检测PSGL-1在内皮祖细胞中的表达,用黏附实验检测PSGL-1的功能.将过表达PSGL-1的内皮祖细胞（实验组）移植裸鼠下肢缺血模型,同时设置对照组（转染空载体的内皮祖细胞移植组）和空白组（注射PBS组）,用免疫组织化学方法检测缺血部位新生毛细血管的形成,用激光多普勒检测缺血部位的血流恢复情况.结果 PSGL-1基因重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度可达3.1×1011 pfu/ml.该重组腺病毒转染内皮祖细胞后,PSGL-1表达显著增加,内皮祖细胞的黏附活性增高;细胞移植至裸鼠缺血下肢后,缺血部位实验组新生毛细血管数量为[（41.0±2.2）个/高倍视野]较对照组[（21.0±2.5）个/高倍视野]及空白组[（10.0±1.6）个/高倍视野]显著增加（P＜0.01）;缺血部位的血流恢复也明显增加[实验组（119.1%±7.0%）、对照组（93.3%±3.0%）、空白组（76.3%±12.0%）,P＜0.01].结论转染PSGL-1可增加内皮祖细胞的黏附活性,移植高表达PSGL-1的内皮祖细胞能促进缺血组织新生血管形成,为改善移植内皮祖细胞治疗缺血性疾病提供了实验依据.

关键词：内皮细胞干细胞 P选择素新生血管化生理性

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荧光标记肿瘤转移体内模型的建立

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中华病理学杂志 2009年第2期38卷 110-116页

作者：冯海凉刘玉琴顾蓓卞晓翠杨振丽杨丽娟中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的建立一种带荧光标记的肿瘤转移模型并探讨其应用价值。方法人胃癌MGC-803细胞和小鼠宫颈癌U14细胞进行体外传代培养，转染pEGFP—N1质粒，24h检测转染效率，用无限稀释法筛选稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的单克隆细胞株MGC．803-GFP... 详细信息

目的建立一种带荧光标记的肿瘤转移模型并探讨其应用价值。方法人胃癌MGC-803细胞和小鼠宫颈癌U14细胞进行体外传代培养，转染pEGFP—N1质粒，24h检测转染效率，用无限稀释法筛选稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的单克隆细胞株MGC．803-GFP和***。分别体内移植于BALB／c—nu裸鼠和C57BL／6J小鼠，观察成瘤潜伏期，绘制体内生长曲线，利用活体荧光成像系统活体连续观察GFP在体内的表达，观察肺部和淋巴结的转移情况，计算转移率。免疫组织化学检测与转移相关的分子CD44和E—cadherin在移植瘤中的表达。结果MGC-803细胞和U14细胞pEGFP—N1转染24h后的转染效率分别为30％和60％。获得了GFP（＋）的单克隆MGC-803-GFP细胞株和U14-GFP细胞株。MGC-803-GFP在BALB／c—nu裸鼠和***在C57BL／6J小鼠移植成瘤的潜伏期分别是3～5d和2～4d，成瘤率均为100％。利用活体荧光成像系统连续观察，可以清楚直观地观察表达GFP的MGC-803-GFP移植瘤在体内的生长，接种后第60天处死全部荷瘤鼠，解剖后仅有1只可见同侧腋窝下淋巴结的转移。接种U14-GFP后，分别在第28、37和52天观察了荷瘤小鼠肿瘤转移的发展过程。在U14-GFP原发瘤体积达到≥5cm^3时，肺部和淋巴结转移率分别为67％和100％。在MGC-803-GFP和U14-GFP的移植瘤中都可以检测到CD44的表达，而无E—cadherin的表达。结论成功建立了表达绿色荧光蛋白单克隆细胞株MGC-803-GFP和U14-GFP，体内移植建立了荧光标记的肿瘤转移模型。该模型可用于可视化肿瘤体内的研究。

关键词：肿瘤转移绿色荧光蛋白质类模型动物

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GDC-0941联合AZD6244对KRAS突变非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用

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中华病理学杂志 2013年第5期42卷 330-335页

作者：李占稳杨振丽冯海凉卞晓翠刘艳艳刘玉琴中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的探讨选择性P13K抑制剂联合MEK抑制剂对携带KRAS／VI＇EN双突变的非小细胞肺癌细胞系NCI-H157的生长增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法常规培养NCI-H157细胞并分别用不同浓度的P13K抑制剂GDC-0941和MEK抑制剂AZD6244单独或联合... 详细信息

目的探讨选择性P13K抑制剂联合MEK抑制剂对携带KRAS／VI＇EN双突变的非小细胞肺癌细胞系NCI-H157的生长增殖和凋亡的影响及相关分子机制。方法常规培养NCI-H157细胞并分别用不同浓度的P13K抑制剂GDC-0941和MEK抑制剂AZD6244单独或联合作用，四甲基偶氮唑盐（MTT）法初步观察对细胞生长增殖的影响。根据观察结果确定联合给药的浓度。然后分为无药对照组、P13K抑制剂单独用药组（GDC-0941，0．5和5．0μmol／L）、联合I组（0．5μmol／LAZD6244＋0．5μmol／LGDC-0941）及联合Ⅱ组（5．0μmol／LAZD6244＋5．0μmol／LGDC-0941）。细胞经过不同的作用后，MTT法绘制增殖抑制曲线；平板集落形成法检测集落形成能力的改变；流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布；Westernblot检测不同组中抑制剂靶点下游周期及凋亡相关蛋白表达的差异。结果抑制剂单独作用于NCI-H157细胞可抑制其生长增殖。联合用药组与P13K抑制剂单独用药组相比，细胞的生长增殖抑制作用增强，联合I组表现为两药协同作用，联合Ⅱ组表现为两药相加作用；集落形成能力下降[（77．20±1．54）个／孔比（61．50±2．12）个／孔。P〈0．01]和[（51．004-4．00）个／孔比（22．50±3．53）个／孔，P〈0．01]；凋亡率增加[（18．30±0．82）％比（21．32±0．56）％，P〈0．01]和[（27．14±1．58）％比（42．45±4．42）％，P〈0．01]；细胞周期发生改变，联合用药组G0／G1期细胞增加，S期细胞减少（P〈0．05）。Westernblot显示，联合用药组与P13K单独用药组相比，eyelinD1、eyelinB1表达量减少，p21表达量和PARP剪切增加，bel-2／bax的比值下降。结论P13K抑制（AZD6244）可协同MEK抑制（GDC-0941）诱导NCI-H157细胞发生生长增殖抑制和凋亡，但联合用药效果受到药物剂量的影响。

关键词：癌非小细胞肺肿瘤细胞培养的协同用药

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抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体基因的真核载体构建和表达

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中华病理学杂志 2010年第8期39卷 542-547页

作者：常德张建华赵雪梅梁平中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系 100005

目的通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽（Aβ）人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增鼠... 详细信息

目的通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽（Aβ）人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增鼠源性抗体全长基因,并通过Blast对其序列进行分析;利用重组PCR技术拼接重轻链可变区及人IgG1的恒定区基因,并对重链Fc段进行定点突变以降低排斥反应;分别构建人-鼠嵌合基因重轻链表达载体,用脂质体法将其同时导入COS-7细胞中表达,并利用ELISA和免疫组织化学（SP法）对分泌的抗体功能和性质进行初步鉴定.结果 Blast比对分析结果显示克隆的基因序列符合小鼠抗体基因序列,将可变区基因与人IgG1的恒定区基因拼接以及Fc定点突变后,成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达;ELISA和免疫组织化学方法证实了所分泌抗体的人源性和与Aβ的结合特异性.结论成功地构建和表达了抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体,为其在阿尔茨海默病的临床诊治中应用和进一步改造奠定了基础.

关键词：阿尔茨海默病抗体,单克隆淀粉样β蛋白

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