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IL-18基因启动子区单核苷酸多态性在恶性血液病患者HLA匹配同胞供者异基因造血干细胞移植中的临床意义

中华血液学杂志 2014年第3期35卷 215-220页

作者：蔡小矜宋阿霞王华张平张桂新杨帆魏嘉璘马巧玲阎嶂松姜尔烈黄勇杨栋林王玫何祎韩明哲冯四洲中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究IL-18基因启动子区单核苷酸多态性（SNP）对恶性血液病患者HLA匹配同胞供者异基因造血干细胞移植（***）造血重建、并发症及生存的影响。方法93例恶性血液病患者纳人研究。采用序列特异性引物聚合酶链反应（***）法检测供受者IL... 详细信息

目的研究IL-18基因启动子区单核苷酸多态性（SNP）对恶性血液病患者HLA匹配同胞供者异基因造血干细胞移植（***）造血重建、并发症及生存的影响。方法93例恶性血液病患者纳人研究。采用序列特异性引物聚合酶链反应（***）法检测供受者IL．18基因SNP．607C／A和．137G／C，分析供受者IL．18不同基因型对患者造血重建速度、移植物抗宿主病（GVHD）发生率、感染发生率、移植相关死亡（TRM）和无病生存（DFS）率的影响。结果供者．137G／G与G／C＋C／C组比较，allo-HSCT后患者中位粒细胞重建时间较短[15（11～23）d对17（11-24）d，P=0．010]，中位血小板重建时间差异无统计学意义[20（11-46）d对20（7～38）d，P=0．844]，广泛型慢性GvHD（cGvHD）发生率较高（20．6％对3．3％，P=0．029）；供者．607C／C组广泛型cGVHD发生率高于-607C／A＋A／A组（31．6％对10．8％，P=0．024）；受者．607C／C组广泛型cGVHD发生率高于．607C／A＋A／A组（33．3％对10．7％，P=0.016）。不同供受者IL-18基因型组间复发率、TRM、DFS率差异均无统计学意义（P值均〉0．05）。结论选择IL-18．137G／G基因型供者有助于恶性血液病患者HLA匹配同胞供者allo—HSCT后粒细胞造血重建，但广泛型cGVHD发生率较高。

关键词：白细胞介素18 多态性单核苷酸造血干细胞移植移植物抗宿主病

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CD48表达可作为区分造血干细胞分裂方式的活性标志

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中国实验血液学杂志 2014年第3期22卷 573-579页

作者：杨鑫张宇彭路芸庞雅坤董芳纪庆许静程涛袁卫平高瀛岱中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

造血干细胞在细胞分裂时具有维持自我更新和产生定向分化的能力,其依赖于三种细胞分裂方式,一个干细胞产生两个新的干细胞(对称的更新分裂)、两个分化细胞(对称的分化分裂)或者一个干细胞和一个分化细胞(不对称分裂)。本研究旨在探索一... 详细信息

造血干细胞在细胞分裂时具有维持自我更新和产生定向分化的能力,其依赖于三种细胞分裂方式,一个干细胞产生两个新的干细胞(对称的更新分裂)、两个分化细胞(对称的分化分裂)或者一个干细胞和一个分化细胞(不对称分裂)。本研究旨在探索一种高效、稳定的区分造血干细胞分裂方式的方法。前期研究表明,Numb蛋白的分布情况可以作为许多细胞辨别分裂方式的标志,本研究利用免疫荧光技术检测Numb蛋白在小鼠分裂期CD48-CD150+LSK细胞中的分布情况,探索Numb蛋白与中心体的关系。由于CD48表达阳性标志着细胞失去了骨髓重建能力,因此本研究把CD48的表达作为区分造血干细胞自我更新或定向分化的一个活性标志。从小鼠全骨髓细胞中分选出CD48-CD150+LSK细胞,培养体系中加入自行制备的AF 488-conjugated anti-CD48抗体,培养3 d后共聚焦荧光显微镜观察及流式细胞分析是否存在AF488+细胞及其所占比例,然后二次分选AF488+和AF488-细胞进行细胞集落形成实验(colony forming cell assay,CFC)与细胞增殖能力比较。结果表明:Numb蛋白在处于分裂期的CD48-CD150+LSK细胞中对称或不对称分布在细胞分裂平面两侧,这提示Numb蛋白染色可以作为一种区分造血干细胞分裂方式的方法。此外,CD48-CD150+LSK细胞在含有自行制备的AF488-conjugated anti-CD48抗体的培养体系中培养3 d后产生约40%AF488+细胞,共聚焦荧光显微镜统计的阳性细胞比例与流式细胞分析检测结果一致。二次分选AF488+和AF488-细胞,AF488+细胞群的集落形成能力显著高于AF488-细胞群(P<0.05),AF488-细胞群的增殖能力显著高于AF488+细胞群(P<0.05)。结论:CD48表达作为细胞干性丢失的活性标志,可区分造血干细胞的分裂方式。该方法与Numb蛋白染色方法相比,具有用于活细胞的优势,它为后续的细胞培养与细胞移植等研究工作提供了更大的便利。

关键词：造血干细胞 CD48 细胞分裂

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重组人EPO治疗较低危骨髓增生异常综合征的临床疗效分析

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中华血液学杂志 2014年第1期35卷 18-23页

作者：张宏丽秦铁军徐泽锋方力维潘丽娟胡耐博曲士强张悦肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的初步探讨重组人EPO（rhEPO）±***治疗较低危（国际预后积分系统的低危和中危一1）骨髓增生异常综合征（MDS）患者的疗效及其影响因素。方法52例较低危原发MDS患者接受至少8周以上的rhEPO单独或联合rhG—CSF每日或隔日单次皮下... 详细信息

目的初步探讨重组人EPO（rhEPO）±***治疗较低危（国际预后积分系统的低危和中危一1）骨髓增生异常综合征（MDS）患者的疗效及其影响因素。方法52例较低危原发MDS患者接受至少8周以上的rhEPO单独或联合rhG—CSF每日或隔日单次皮下注射治疗，待红系达到最佳疗效且维持4周后rhEPO±***逐渐减量至停用或维持最佳疗效的最小剂量。回顾性分析患者的临床特征、疗效、生存情况及其影响因素。结果52例患者接受rhEPO±rhG—CSF治疗，中位治疗时间为8（2～45）个月。其中27例（51．9％）治疗有效（9例达完全缓解，18例出现红系反应），中位疗效持续时间为37（6-94）个月。10例患者复发，其中4例为疾病进展。中位随访时间为37（6～114）个月，中位生存时间为47（6～114）个月。多因素分析结果显示初诊时血清EPO（sEPO）水平〈500u／L（P=0．030）、红细胞爆式集落形成单位（BFU．E）计数≥25／10^5骨髓单个核细胞（BMMNc）（P=0．040）及接受中高剂量rhEPO±***治疗（P=-0．020）的患者治疗8周后MDS相关贫血容易获得改善；HGB水平（P=0．040）及染色体核型（P〈0．01）对疗效持续时间有显著影响；年龄〈60岁（P=-0．050）、染色体核型为预后良好或中等（P=0．03）和治疗有效（P=0．020）对患者生存时间有显著影响。结论中高剂量rhEPO±rhG—CSF能够有效改善较低危原发性MDS患者相关贫血症状，延长患者生存期。

关键词：骨髓增生异常综合征贫血治疗红细胞生成素

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Puma表达下调对人脐血CD34＋造血细胞抗放射作用的初步研究

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中国实验血液学杂志 2014年第2期22卷 412-420页

作者：赵蕾张鸿雁庞雅坤顾海慧许静袁卫平程涛中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

Puma属于BCL-2家族中BH3-only亚家族,动物和细胞研究发现其通过p53依赖和非依赖途径诱导细胞凋亡,并具有抗放射保护不增加肿瘤发生率的作用。本研究检测Puma基因敲降后对人脐血CD34+造血干祖细胞生物学功能的影响。应用RT-PCR、Western ... 详细信息

Puma属于BCL-2家族中BH3-only亚家族,动物和细胞研究发现其通过p53依赖和非依赖途径诱导细胞凋亡,并具有抗放射保护不增加肿瘤发生率的作用。本研究检测Puma基因敲降后对人脐血CD34+造血干祖细胞生物学功能的影响。应用RT-PCR、Western Blot检测Puma基因在辐射刺激条件下的表达,采用慢病毒感染人脐血CD34+细胞分选GFP+细胞,Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞术检测细胞凋亡,Ki67染色检测细胞周期,CCK-8、Brdu标记法检测细胞增殖能力,并进行集落形成实验(colony formig cell assay,CFC)。结果表明:Puma基因表达量随着射线强度的增加而增高,Puma基因表达下调抑制造血祖细胞体外集落形成能力和体外增殖能力。在辐射刺激条件下,抑制Puma基因表达可以减少人脐血CD34+细胞凋亡,维持细胞周期于G0期。结论:人脐血CD34+造血干细胞中Puma基因敲降具有一定的抗辐射作用,维持细胞于静息状态。

关键词： Puma基因造血干祖细胞脐血CD34+细胞慢病毒载体

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细胞遗传学指标在439例原发性骨髓纤维化患者预后评估中的价值

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中华血液学杂志 2014年第11期35卷 990-994页

作者：李冰徐俊卿徐泽锋李承文秦铁军方力维张宏丽胡耐博潘丽娟曲士强王静雅张悦张培红肖志坚中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的评价细胞遗传学指标对于中国原发性骨髓纤维化（PMF）患者的预后评估价值.方法回顾性分析439例PMF患者的临床资料,应用Kaplan-Meier、Log-rank、似然比检验和COX回归模型对动态国际预后积分系统（DIPSS）、DIPSS-plus和DIPSS-Chin... 详细信息

目的评价细胞遗传学指标对于中国原发性骨髓纤维化（PMF）患者的预后评估价值.方法回顾性分析439例PMF患者的临床资料,应用Kaplan-Meier、Log-rank、似然比检验和COX回归模型对动态国际预后积分系统（DIPSS）、DIPSS-plus和DIPSS-Chinese进行评估.结果 439例PMF患者中男298例,女141例,中位年龄56（8～83）岁.DIPSS-plus可对中国PMF患者进行准确的危险度分组和预后评估（P＜0.01）;DIPSS-plus较DIPSS有更准确的预测能力[-2 log似然比分别为989.5（DIPSS-plus）和1001.9（DIPSS）,P=0.006].单因素分析显示伴有正常核型、复杂非单体核型、单纯＋8和单纯平衡易位核型的患者预后较好,将染色体核型分为预后良好组（正常核型、复杂非单体核型、单纯＋8和单纯平衡易位）和预后不良组（其他核型异常）.经多因素分析提出了修订的DIPSS-Chinese预后积分系统,各参数赋值如下：DIPSS-Chinese低危组0分,中危组1分,高危组2.5分,不良染色体核型组0.5分,良好组0分.439例患者中低危组（0分）163例,中危-1组（0.5～1分）187例,中危-2组（1.5～2.5分）82例,高危组（3分）7例,各组中位生存期分别为74（95％ CI 42～106）、39（95％CI26～52）、12（95％CI1～25）个月,总生存差异具有统计学意义（P＜0.01）.结论在中国PMF患者中,DIPSS-plus较DIPSS有更好的预测价值,结合中国患者细胞遗传学特征修订的DIPSS-Chinese可望更好地指导PMF患者分组治疗策略的制定.

关键词：原发性骨髓纤维化预后细胞遗传学分析预后积分系统

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人骨髓来源间充质干细胞分泌外泌体特性研究

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中国实验血液学杂志 2014年第3期22卷 595-599页

作者：冯影卢士红王昕崔俊杰李雪杜文静王影李娟娟宋保全陈芳马凤霞池颖杨少光韩忠朝中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究旨在探讨正常人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)分泌的外泌体(exosome)免疫调节功能及支持血管形成能力。收集第4-6代BMMSC上清液提取外泌体,应用透射电镜观察其形态,蛋白印迹法检测其表面特异标志CD... 详细信息

本研究旨在探讨正常人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)分泌的外泌体(exosome)免疫调节功能及支持血管形成能力。收集第4-6代BMMSC上清液提取外泌体,应用透射电镜观察其形态,蛋白印迹法检测其表面特异标志CD9,bicinchoninic acid(BCA)方法定量检测外泌体分泌量;与正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMNC)作用72 h后用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PBMNC分泌的γ-干扰素(IFN-γ);实时定量PCR检测外泌体内免疫相关microRNA表达;共聚焦显微镜观察外泌体与人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的作用方式,与HUVEC共培养后观察其网状结构形成;应用裸鼠体内试验检测外泌体对血管形成能力的作用。结果表明,正常人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体近似圆形,直径在40-160 nm之间,表达表面标志CD9,其分泌量与接种细胞数呈线性关系,可抑制PBMNC分泌IFN-γ(P<0.01),内含有免疫相关microRNA如miR301、miR22和miR-let-7a等,能促进HUVEC网状结构形成和血管形成(P<0.01)。结论:BMMSC分泌外泌体具有免疫调节功能与支持血管形成作用。

关键词：骨髓间充质干细胞外泌体免疫调节血管形成

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ASXL1突变在髓系疾病中的研究进展

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中国实验血液学杂志 2014年第4期22卷 1183-1187页

作者：盛梦瑶周圆许明江杨逢春中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

ASXL1是Trithorax和Polycomb家族的增强子,在维持基因表达稳态中发挥着重要作用。近年来,在多种髓系肿瘤患者的造血细胞中都发现了ASXL1突变,包括慢性粒单核细胞白血病(43%)、骨髓增生异常综合征(14%)、骨髓增殖性肿瘤(10%)和急性髓系... 详细信息

ASXL1是Trithorax和Polycomb家族的增强子,在维持基因表达稳态中发挥着重要作用。近年来,在多种髓系肿瘤患者的造血细胞中都发现了ASXL1突变,包括慢性粒单核细胞白血病(43%)、骨髓增生异常综合征(14%)、骨髓增殖性肿瘤(10%)和急性髓系白血病(20%)等。ASXL1突变主要以移码突变和无义突变为主。ASXL1突变的广泛性表明它可能在髓系肿瘤的发病机制和恶性转化中发挥着重要作用,但是ASXL1突变在髓系疾病发生及体内正常造血中的作用及机制尚不完全清楚。本文对ASXL1的结构与功能特点,ASXL1突变与患者临床特征和疾病进展的关系,ASXL1突变与其它基因突变的关系,及敲除或沉默ASXL1的体内外模型进行了综述。

关键词： ASXL1突变表观遗传髓系肿瘤

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抗小鼠CD122抗体促进脐血CD34^＋细胞在NOD/SCID小鼠体内的重建

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中国实验血液学杂志 2014年第6期22卷 1673-1677页

作者：盛梦瑶石慧邢文汪文君司晓慧白洁袁卫平周圆杨逢春中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究旨在探讨抗小鼠CD122抗体促进人脐血CD34+造血干细胞在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内的重建能力。对NOD/SCID小鼠进行半致死剂量γ射线照射,照射后腹腔注射200μg同型对照抗体或者抗小鼠CD122抗体,6-8 h后经... 详细信息

本研究旨在探讨抗小鼠CD122抗体促进人脐血CD34+造血干细胞在非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内的重建能力。对NOD/SCID小鼠进行半致死剂量γ射线照射,照射后腹腔注射200μg同型对照抗体或者抗小鼠CD122抗体,6-8 h后经尾静脉注射人脐血CD34+细胞或者注入PBS作为对照。处理后第2、3、4周取仅注射抗小鼠CD122抗体或同型对照抗体的小鼠外周血,动态监测小鼠NK细胞比例变化。在经过脐血CD34+细胞移植的小鼠中,利用流式细胞术对移植后小鼠骨髓中人CD45+比例以及CD45+细胞亚群中人CD34,CD19和CD33比例进行分析,观察抗小鼠CD122抗体对人造血干细胞在小鼠体内重建能力的影响。结果表明,用抗CD122抗体处理后2周和3周时,小鼠外周血中NK细胞比例分别为(4.6±0.6)%和(5.7±1.7)%,与注射同型对照抗体的NOD/SCID小鼠(12.2±1.4)%和(13.3±1.2)%相比下降约60%。在移植了人脐血CD34+细胞的小鼠中,同时用CD122抗体处理组在移植后6周和8周时小鼠骨髓中h CD45+比例分别为(63.0±12.2)%和(53.2±16.3)%,明显高于同型对照抗体组中h CD45+比例(7.7±3.6)%和(6.1±2.4)%。此外,经过抗CD122抗体处理组的小鼠移植8周后骨髓中仍能够明显的检测到人CD34+细胞的存在。结论:抗小鼠CD122抗体通过降低NOD/SCID小鼠的NK细胞的比例,大大促进了人脐血CD34+造血干细胞在免疫缺陷小鼠体内的重建能力。

关键词：造血干细胞 NK细胞造血重建 NOD/SCID小鼠

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沉默Sam68基因对Jurkat细胞增殖影响的研究

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中国实验血液学杂志 2014年第4期22卷 894-898页

作者：王迟鹃许华张海瑞王建蔺亚妮庞天翔李庆华中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究探讨Sam68基因对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响。针对Sam68 mRNA 531-552靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性真核干扰载体,制备慢病毒并感染Jurkat细胞;应用强力霉素(Doxycycline)诱导干扰载体表达,用Real... 详细信息

本研究探讨Sam68基因对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响。针对Sam68 mRNA 531-552靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性真核干扰载体,制备慢病毒并感染Jurkat细胞;应用强力霉素(Doxycycline)诱导干扰载体表达,用Real-time PCR和Western blot验证干扰效率,用改良MTT法检测沉默Sam68基因对Jurkat细胞活力的影响,用体外细胞集落形成实验观察沉默Sam68基因对细胞集落形成能力的影响,用流式细胞术分析沉默Sam68前后细胞周期的变化。结果表明:与对照组相比,实验组Sam68基因的表达被有效抑制(P<0.05);沉默Sam68基因降低了Jurkat细胞活力,抑制了细胞的集落形成能力并且导致S期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低(P<0.05)。结论:利用shRNA靶向干扰Sam68基因的表达可以有效抑制人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖。

关键词： Sam68基因 Jurkat细胞 shRNA干扰细胞增殖

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CIAPIN1基因对K562细胞增殖能力的影响

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中国实验血液学杂志 2014年第3期22卷 671-674页

作者：蔺亚妮王建李庆华许华张海瑞庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究旨在探讨CIAPIN1基因对慢性髓系白血病(CML)细胞系K562细胞增殖能力的影响。针对CIAPIN1基因构建shRNA真核表达载体并稳定转染K562细胞,用real-time PCR和Western blot技术验证干扰效率,采用MTT法检测K562细胞的增殖活性的改变,... 详细信息

本研究旨在探讨CIAPIN1基因对慢性髓系白血病(CML)细胞系K562细胞增殖能力的影响。针对CIAPIN1基因构建shRNA真核表达载体并稳定转染K562细胞,用real-time PCR和Western blot技术验证干扰效率,采用MTT法检测K562细胞的增殖活性的改变,利用甲基纤维素集落形成实验观察K562细胞集落形成大小和数量的变化,通过体内实验观察K562细胞在小鼠体内的成瘤能力。结果表明,与对照组相比,K562细胞的CIAPIN1基因表达被有效抑制;干扰CIAPIN1基因后K562细胞的增殖活性明显下降,集落形成数量减少和集落大小显著减小,小鼠体内成瘤能力明显降低。结论:干扰CIAPIN1基因表达能抑制K562细胞在体内及体外的增殖能力。

关键词： CIAPIN1基因 K562细胞细胞增殖

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