检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2025年第2期45卷 183-188页

作者：罗钰蓓黄建军杨文秀张军红李静赵春华豆晓伟贵州医科大学附属医院病理科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院乳腺外科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床医学研究中心贵州贵阳550004 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心干细胞新药研发及临床转化研究北京市重点实验室(BZ0381)北京100005

目的从患者的肿瘤组织建立可以传代的乳腺癌原代细胞系,为基础研究提供新的细胞模型。方法经穿刺取材的患者乳腺癌组织经过Ⅱ型胶原酶消化后培养在BCMI培养基中。当细胞快速增殖时,更换为DMEM培养基。检测STR基因分型确定4种乳腺癌原代... 详细信息

目的从患者的肿瘤组织建立可以传代的乳腺癌原代细胞系,为基础研究提供新的细胞模型。方法经穿刺取材的患者乳腺癌组织经过Ⅱ型胶原酶消化后培养在BCMI培养基中。当细胞快速增殖时,更换为DMEM培养基。检测STR基因分型确定4种乳腺癌原代细胞的特异遗传标记。集落形成实验和球形成实验分析乳腺癌原代细胞系致瘤性。Real-time PCR和Western blot实验分析乳腺癌原代细胞上皮间充质转换分子。转移实验和侵袭实验分析乳腺癌原代细胞的转移能力。结果培养了4种乳腺癌原代细胞系BC25#,BC51#,BC56#和BC57#。这些乳腺癌细胞系培养基是DMEM培养基,可以传代,具有清楚的临床背景。STR基因分型确定了4种乳腺癌原代细胞系特异的遗传标记。集落形成实验和成球实验发现4种乳腺癌原代细胞系比传统的乳腺癌细胞T-47D有更强的形成肿瘤能力。Real-time PCR和Western blot实验发现,与传统的乳腺癌细胞T-47D相比,4种乳腺癌原代细胞系E-cadherin表达降低,vimentin表达升高。迁移实验和侵袭实验发现原代细胞系BC25#比传统的乳腺癌细胞T-47D有更强的转移能力。结论培养了4种可以传代的乳腺癌原代细胞系BC25#、BC51#、BC56#和BC57#,为乳腺癌基础研究提供了新的肿瘤细胞模型。

关键词：乳腺癌原代细胞系基础研究新肿瘤细胞模型

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敲降人组织特异性lncRNA MEK6-AS1改善衰老间充质干细胞成骨分化能力

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基础医学与临床 2025年第5期45卷 568-574页

作者：陈运华李迪赵晓妍陈明李红凌赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心北京100005

目的旨在探讨一条新发现的人组织特异性长链非编码RNA(lncRNA)MEK6-AS1在改善人间充质干细胞(hMSCs)衰老后的成骨分化能力中的作用及分子机制。方法建立体外hMSCs复制性衰老细胞模型,利用RT-qPCR检测MEK6-AS1在衰老过程中的表达差异;采... 详细信息

目的旨在探讨一条新发现的人组织特异性长链非编码RNA(lncRNA)MEK6-AS1在改善人间充质干细胞(hMSCs)衰老后的成骨分化能力中的作用及分子机制。方法建立体外hMSCs复制性衰老细胞模型,利用RT-qPCR检测MEK6-AS1在衰老过程中的表达差异;采用慢病毒敲降技术抑制MEK6-AS1的表达,利用转录组测序技术分析MEK6-AS1对成骨相关转录组的影响;通过诱导细胞中成骨分化标志物的mRNA及蛋白质表达水平以及碱性磷酸酶(ALP)染色检测ALP活性,评估验证以MEK6-AS1为干预靶点对人衰老间充质干细胞成骨分化能力的改善效果。结果随着衰老的进展,hMSCs的成骨分化能力明显下降,MEK6-AS1的表达显著上调(P<0.0001)。在成骨诱导过程中,与衰老的对照组细胞相比,敲降MEK6-AS1的衰老细胞中成骨标志物的表达更高,诱导细胞的ALP活性更强(P<0.001)。结论敲降人组织特异性lncRNA MEK6-AS1可提升衰老MSCs的成骨分化能力,lncRNA MEK6-AS1可作为衰老相关骨质疏松防治的新靶点。

关键词：间充质干细胞(MSCs) 衰老成骨分化长链非编码RNA(lncRNA) MEK6-AS1

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非病毒诱导体系高效诱导脐带来源间充质干细胞向胰岛细胞分化

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中国医学科学院学报 2011年第6期33卷 675-678,I0017页

作者：李晶朱莉赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的探讨非病毒法诱导脐带来源间充质干细胞(UC-MSC)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,为胰岛细胞移植治疗糖尿病提供临床移植数量级的细胞。方法从人脐带分离间充质干细胞,体外分阶段诱导分化为胰岛细胞。采用RT-PCR方法比较胰岛细胞分化... 详细信息

目的探讨非病毒法诱导脐带来源间充质干细胞(UC-MSC)向胰岛素分泌细胞分化的可行性,为胰岛细胞移植治疗糖尿病提供临床移植数量级的细胞。方法从人脐带分离间充质干细胞,体外分阶段诱导分化为胰岛细胞。采用RT-PCR方法比较胰岛细胞分化过程中转录因子foxa2、sox17、pdx1、ngn3、pax4、insulin和glut-2在诱导组和非诱导组中的表达水平;免疫荧光染色方法检测胰岛素和C-肽在诱导终末阶段细胞中的表达定位;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测胰岛素及C-肽的分泌以及细胞对葡萄糖刺激的反应性。结果诱导第1阶段末,诱导后细胞foxa2和sox17的表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05);诱导第2阶段末,诱导细胞pdx1、ngn3和pax4的表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05);诱导第3阶段末,诱导细胞的insulin和glut-2表达明显高于未诱导细胞(P均<0.05)。免疫荧光染色结果显示,胰岛素和C-肽均表达于诱导终末分化阶段的细胞,效率可达90%以上。ELISA检测结果显示,诱导第3阶段末细胞胰岛素总量为(346.3 739±32.5 149)μU/ml,明显高于未诱导细胞的(17.69±1.46)μU/ml(P<0.01);诱导后细胞置于5.5 mmol/L葡萄糖环境检测到的基础C-肽释放量为(195.10±8.88)pmol/L/h(P<0.01),细胞置于22 mmol/L葡萄糖环境测定葡萄糖刺激C-肽释放量达到(340.99±7.91)pmol/L/h(P<0.01)。结论以UC-MSC作为种子细胞,采用体外非病毒诱导体系获得的分化终末阶段细胞是具有胰岛素分泌功能的成熟胰岛细胞。

关键词：脐带间充质干细胞胰岛细胞转录因子

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成骨诱导或干扰素γ预处理对胎儿骨髓源Flk-1^+间充质干细胞免疫活性的调节

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第43期12卷 8529-8534页

作者：张斌刘瑞朱希山豆晓伟刘星霞陈媛赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程研究中心北京市100005

背景:骨髓间充质干细胞在修复异基因组织最终分化为特定细胞后,理论上会因MHC及共刺激分子上调而引起组织排斥,但实际上并没有发生排斥反应。推测骨髓间充质干细胞在异基因组织分化诱导及炎性因子微环境作用下,有可能分化成一种仍具有... 详细信息

背景:骨髓间充质干细胞在修复异基因组织最终分化为特定细胞后,理论上会因MHC及共刺激分子上调而引起组织排斥,但实际上并没有发生排斥反应。推测骨髓间充质干细胞在异基因组织分化诱导及炎性因子微环境作用下,有可能分化成一种仍具有免疫调节活性的终末细胞,不被机体的免疫识别系统清除掉。目的:在体外运用成骨诱导及干扰素γ预处理来模拟体内组织分化及炎性因子微环境,观察在此作用下胎儿骨髓源Flk-1+间充质干细胞是否能够保持其在自然条件下所呈现的免疫学活性。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-09/2008-05在北京协和医学院基础学院完成。材料:2例骨髓样品取自流产胎儿,由北京回龙冠妇产医院提供。外周血样品取自15~35岁健康志愿者,由北京三○七医院提供。地塞米松等诱导因子和干扰素γ为美国Sigma公司产品。方法:Ficoll法分离胎儿骨髓单个核细胞,取白环层以上细胞,以1×106/cm2密度接种,贴壁法纯化,采用阴性分选法去除CD45+、GlyA+和CD34+细胞,分离扩增得到Flk-1+骨髓间充质干细胞。以淋巴细胞分离液梯度离心分离外周血单个核细胞,用于混合淋巴细胞培养实验及有丝分裂原刺激的淋巴细胞增殖实验。主要观察指标:流式细胞仪鉴定细胞表型,用成骨、成脂、成软骨和成内皮诱导液检测其分化潜能,成骨诱导或干扰素γ预处理后细胞表面抗原表达、对淋巴细胞增殖及活化抗原CD69、CD25表达的影响,对白细胞介素10和转化生长因子β分泌水平的影响。结果:光镜下骨髓来源的间充质干细胞为成纤维细胞样贴壁生长,均高表达Flk-1,同时高表达黏附分子CD29、CD44、CD105,造血细胞标志CD34、CD45呈阴性;可向成骨、成脂肪、成软骨和成内皮方向分化;低表达MHC-Ⅰ类分子,不表达MHC-Ⅱ类分子,成骨诱导能上调MHC-Ⅰ表达,干扰素γ预处理可上调MHC-Ⅱ表达。骨髓源Flk-1+间充质干细胞经成骨诱导7d或干扰素γ预处理48h后,仍呈低免疫原性,不激发异基因淋巴细胞增殖,抑制植物血凝素刺激的淋巴细胞增殖效果明显增强(t=2.57,P<0.05),可进一步抑制CD69和CD25的表达,ELISA检测显示其培养上清分泌白细胞介素10水平增强(t=2.66,P<0.05),但分泌转化生长因子β水平经成骨诱导后无明显变化,干扰素γ预处理后则明显升高。结论:经成骨诱导或干扰素γ预处理后,骨髓源Flk-1+间充质干细胞仍能保持低免疫原性,且免疫调节活性进一步提高。

关键词：骨髓间充质干细胞成骨干扰素γ 免疫调节活性

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microRNA-21可调控Flk1+间充质干细胞的迁移

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基础医学与临床 2011年第4期31卷 355-359页

作者：王世华黄姗边春景赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的用microRNA-21抑制剂转染Flk1+间充质干细胞(MSC),探讨microRNA-21对Flk1+MSC(MSC)迁移的影响。方法在脂质体介导下用microRNA-21抑制剂瞬时转染Flk1+MSC,用Transwell技术检测细胞迁移,用Real-time PCR技术检测micro-RNA的表达。结果与对照组相比,实验组中microRNA-21表达明显下调,实验组细胞在12、16和20 h迁移率分别是对照组的77.5%、71.3%和69.8%。结论 microRNA-21可调控Flk1+MSC的迁移。

关键词： microRNA-21 间充质干细胞迁移

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MR1 siRNA抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖

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基础医学与临床 2009年第1期29卷 1-5页

作者：王金华边春景赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的研究MR1基因对肝癌细胞增殖的影响及机制。方法化学合成MR1 siRNA,用脂质体lipofectamine2000转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,RT-PCR检测MR1 siRNA基因沉默效果。用SRB法、集落形成法和生长曲线法检测MR1 siRNA对BEL-7402细胞增殖的影... 详细信息

目的研究MR1基因对肝癌细胞增殖的影响及机制。方法化学合成MR1 siRNA,用脂质体lipofectamine2000转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,RT-PCR检测MR1 siRNA基因沉默效果。用SRB法、集落形成法和生长曲线法检测MR1 siRNA对BEL-7402细胞增殖的影响。流式细胞术检测BEL-7402细胞周期,用细胞同步化的方法,即与G2期阻滞药物噻氨酯哒唑(nocodazole)联合应用,以间接反映MR1 siRNA对肿瘤细胞周期的影响。Western blot法检测Cyclin D1蛋白。结果(1)300 nmol/LMR1 siRNA处理BEL-7402细胞24 h后,MR1基因的mRNA水平明显降低。(2)经siRNA处理后,BEL-7402细胞存活细胞数明显下降,细胞生长速度明显减慢,集落形成率显著下降,Cyclin D1表达水平明显降低。(3)MR1 siRNA与nocodazole联合处理BEL-7402细胞后,G2期细胞比例显著减少,而G1期细胞明显增多。结论MR1基因与人肝癌BEL-7402细胞增殖相关,抑制MR1表达,能够引起细胞的增殖抑制,其作用机制与诱导细胞的G1期阻滞有关。

关键词：肌纤基因调节因子 siRNA 细胞周期细胞增殖 BEL-7402细胞

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全身照射引起间充质干/祖细胞池缩小及成骨潜能改变

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中国实验血液学杂志 2007年第2期15卷 313-318页

作者：马杰陈斌王宏兰李静史明霞李炳宗胡建立赵春华中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院组织工程研究中心北京100005

为了研究辐射对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)数量及成骨分化潜能的影响,探讨BMMSC在辐射损伤中的反应及其与照射后造血和骨骼系统长期损伤的关系,用全身照射(total body irradiation,TBI)小鼠模型观察TB... 详细信息

为了研究辐射对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)数量及成骨分化潜能的影响,探讨BMMSC在辐射损伤中的反应及其与照射后造血和骨骼系统长期损伤的关系,用全身照射(total body irradiation,TBI)小鼠模型观察TBI前后不同时间点小鼠骨髓纤维母细胞集落形成单位(colony-forming unit-fibroblast,CFU-F)的改变及BMMSC细胞周期分布情况;用Von Kossa染色法测定钙盐沉积,实时定量RT-PCR检测成骨分化相关基因及成骨转录共刺激因子TAZ(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif)的表达变化。结果显示:TBI后骨髓CFU-F数量明显减少;TBI后3天较多的BMMSC进入细胞周期并且其成骨潜能明显增强,随后细胞周期分布恢复正常,但成骨潜能明显降低,同时伴有TAZ表达改变。结论:TBI能导致小鼠骨髓间充质干/祖细胞池的显著缩小并改变BMMSC的成骨分化潜能,TAZ表达的变化可能在其成骨潜能的改变中发挥一定作用。

关键词：全身照射骨髓间充质干细胞成骨潜能 TAZ

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低氧对间充质干细胞的影响

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中国实验血液学杂志 2007年第2期15卷 433-436页

作者：何觅春李静赵春华中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院组织工程研究中心北京100005

氧对于几乎所有的生命都是必需的,它维持能量代谢及细胞的功能,但机体多种细胞是处于生理或病理性低氧状态中,而体外细胞实验一般是在20%氧浓度下进行,并不符合生理状态。直到最近,关于低氧对于间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC... 详细信息

氧对于几乎所有的生命都是必需的,它维持能量代谢及细胞的功能,但机体多种细胞是处于生理或病理性低氧状态中,而体外细胞实验一般是在20%氧浓度下进行,并不符合生理状态。直到最近,关于低氧对于间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的影响有了一系列的研究。体外实验表明,适度低氧下MSC的生长和存活能力更好,氧浓度可以影响MSC向成骨、成软骨、成脂的分化倾向,低氧能提高特异性受体和配体相结合所介导的迁移。低氧可影响胚胎干细胞、造血干细胞、神经干细胞的生理学特性也是一证据。干细胞对缺氧反应的分子机制主要涉及低氧诱导因子-1(hypoxic inducible factor-1,HIF-1)信号通路。本文综述了低氧对MSC的存活、增殖、分化和迁移的影响,以及涉及HIF-1等的分子机制。

关键词：低氧间充质干细胞细胞增殖细胞分化细胞迁移

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骨髓间充质干细胞治疗ConA诱导的小鼠急性肝损伤的有效性研究

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中国实验血液学杂志 2009年第5期17卷 1289-1293页

作者：马杰曹莹胡建立孙慧刘林湘赵春华郑州大学第一附属医院血液科郑州450052 中国医学科学院、北京协和医学院、基础医学研究所/基础医学院组织工程研究中心北京100005

为了探讨骨髓原间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)治疗急性肝损伤的可行性及有效性,本研究分离培养小鼠MSC,并建立刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导的小鼠急性肝损伤模型。在ConA静脉注射后立即给予MSC静脉输注,24小时后进... 详细信息

为了探讨骨髓原间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)治疗急性肝损伤的可行性及有效性,本研究分离培养小鼠MSC,并建立刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导的小鼠急性肝损伤模型。在ConA静脉注射后立即给予MSC静脉输注,24小时后进行小鼠血清转氨酶、肝脏组织病理学和原位细胞凋亡检测,并用实时定量RT-PCR的方法检测小鼠肝脏组织内炎症介质表达变化。结果显示,ConA静脉注射后立即给予MSC静脉输注,小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平降低(p<0.05),肝脏坏死和肝细胞凋亡减轻,肝脏组织内TNF-α、IFN-γ的水平明显降低(p<0.05),iNOS、IL-2和IL-10的表达水平基本不受影响(p>0.05)。结论:静脉输注MSC能减轻ConA诱导的小鼠急性肝损伤。

关键词：骨髓间充质干细胞刀豆蛋白A 急性肝损伤

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人羊膜上皮细胞移植改善AD样病变模型大鼠学习记忆能力

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中国病理生理杂志 2015年第11期31卷 2039-2046页

作者：董世桃方宁胡龙淼陈代雄赵春华遵义医学院附属医院细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100005

目的:观察人羊膜上皮细胞(h AECs)对阿尔茨海默病(AD)样病变大鼠模型的治疗效应。方法:采用胰蛋白酶消化法分离h AECs,流式细胞术分析表型。48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、培养基组和h AECs移植组,每组12只。采用双侧脑室注... 详细信息

目的:观察人羊膜上皮细胞(h AECs)对阿尔茨海默病(AD)样病变大鼠模型的治疗效应。方法:采用胰蛋白酶消化法分离h AECs,流式细胞术分析表型。48只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、培养基组和h AECs移植组,每组12只。采用双侧脑室注入脂多糖(LPS)复制AD样病变大鼠模型。AD样病变大鼠海马区移植5×105个h AECs。细胞移植后2周,Morris水迷宫试验观察行为学变化,HE和硫磺素S染色观察海马病理变化,免疫组化染色检测β-淀粉样蛋白42(Aβ42)、Tau蛋白和乙酰胆碱(ACh)的变化,流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群的变化,流式微球阵列捕获技术(cytometric bead array,CBA)检测血清细胞因子含量,免疫荧光染色检测海马区人细胞核抗原阳性细胞及其神经元特异性核蛋白(Neu N)的表达。结果:与模型组和培养基组比较,h AECs移植组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),跨域平台次数明显增加(P<0.05);海马神经元病损减轻,Aβ沉积减轻(P<0.05),磷酸化Tau蛋白水平下降(P<0.05),ACh增加(P<0.05);外周血Th1和Th17细胞百分比下降(P<0.05),而Th2和Treg细胞升高(P<0.05);IL-2和IFN-γ水平下调(P<0.05),而IL-4上调(P<0.05);移植区可见h AECs,并表达Neu N。结论:h AECs可明显改善AD样病变模型大鼠空间辨别性学习记忆能力,减轻海马病理损伤,其免疫调节效应可能发挥重要作用。

关键词：阿尔茨海默病人羊膜上皮细胞 β-淀粉样蛋白学习记忆障碍

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