检索结果-内蒙古大学图书馆

遵义医科大学学报 2014年第5期37卷 463-469页

作者：赵春华毛晓晶韩钦中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心

干细胞具有自我更新能力和多谱系细胞分化能力,在基础医学和临床应用中有极大研究意义。以胚胎干细胞为模型,近年来干细胞分化的表观遗传调控已成为研究热点。染色质结构的表观遗传调控,比如DNA甲基化、翻译后组蛋白修饰,对于胚胎发育... 详细信息

干细胞具有自我更新能力和多谱系细胞分化能力,在基础医学和临床应用中有极大研究意义。以胚胎干细胞为模型,近年来干细胞分化的表观遗传调控已成为研究热点。染色质结构的表观遗传调控,比如DNA甲基化、翻译后组蛋白修饰,对于胚胎发育时基因的激活和抑制非常关键。本文综述了干细胞多潜能性维持和干细胞分化的表观遗传机制及其一些表观遗传修饰之间的联系。

关键词：干细胞细胞分化表观遗传

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骨髓间充质干细胞抑制CD4^+初始T细胞体外分化为Th17细胞

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基础医学与临床 2014年第9期34卷 1179-1183页

作者：曲学彬刘星霞韩晶晶姚瑞芹赵春华徐州医学院基础学院生物学系江苏徐州221009 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005 徐州医学院临床学院神经内科江苏徐州221002

目的探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对辅助T细胞17(Th17)体外分化的免疫调控作用。方法小鼠CD4+初始T(nave T)细胞与小鼠BM-MSCs共培养,诱导分化3 d后流式细胞术检测CD4+IL-17+Th17的生成比率,ELISA法检测培养上清中IL-17的浓度,qRT-... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对辅助T细胞17(Th17)体外分化的免疫调控作用。方法小鼠CD4+初始T(nave T)细胞与小鼠BM-MSCs共培养,诱导分化3 d后流式细胞术检测CD4+IL-17+Th17的生成比率,ELISA法检测培养上清中IL-17的浓度,qRT-PCR及Western blot检测Th17特异转录因子Rorγt的表达水平。共培养体系中加入IL-10和PGE2中和抗体后检测Th17的分化率。结果小鼠BM-MSCs分泌高水平细胞因子TGF-β和IL-6。共培养组CD4+IL-17+Th17的生成率(2.5%±1.5%)和IL-17浓度(23±3 ng/L)均显著低于无BM-MSCs对照组(分别为17.8%±4.2%和268±27 ng/L,P<0.05),且转录因子Rorγt的表达量也明显降低。共培养组IL-10和PGE2浓度随诱导天数的增加而逐渐上升,显著高于同期对照组(P<0.05)。共培养体系中加入IL-10或PGE2中和抗体后,显著提升CD4+IL-17+Th17的生成率(从2.0%±0.5%提高到11.8%±2.5%,P<0.05),提高IL-17分泌水平(从24±4 ng/L上升到123±25 ng/L,P<0.05),增强Rorγt的表达量。联合使用两种中和抗体能进一步提高Th17的分化生成率。结论虽然BM-MSCs分泌高水平的Th17分化所需的细胞因子TGF-β和IL-6,但BM-MSCs却抑制Th17的体外分化,其抑制机制可能与IL-10和PGE2有关。

关键词：骨髓间充质干细胞初始T细胞辅助T细胞17

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间充质干细胞系统：解析机体免疫调控和代谢平衡

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中国实验血液学杂志 2013年第2期21卷 263-267页

作者：赵春华北京协和医学院、中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心协和医院北京100000

间充质干细胞由于其独特的生物学特性和临床应用潜能,一直是干细胞研究的热点。这里,我首次提出间充质干细胞系统新概念:自胚胎发育早期,经历整个生长发育全过程的不同胚层、多个发育阶段,将亚全能间充质干细胞到不同等级分化潜能间充质... 详细信息

间充质干细胞由于其独特的生物学特性和临床应用潜能,一直是干细胞研究的热点。这里,我首次提出间充质干细胞系统新概念:自胚胎发育早期,经历整个生长发育全过程的不同胚层、多个发育阶段,将亚全能间充质干细胞到不同等级分化潜能间充质干/祖细胞群体统称为MSC系统。MSC系统的确立具有重要意义:(1)赋予了MSC三大重要生物学特征,即干细胞自身特性、组织微环境功能及免疫调控功能;(2)平衡机体免疫与组织代谢;(3)提供高效转化为临床安全有效的组织特异性干细胞。总之,该系统很好的解释了间充质干细胞的异质性,同时丰富了我们之前提出的亚全能干细胞理论,为研究人员更好的理解间充质干细胞提供了深厚的理论平台。

关键词：干细胞间充质干细胞间充质干细胞系统

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乳腺干细胞培养基的建立及有效性验证

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中国组织工程研究 2014年第10期18卷 1585-1590页

作者：张军红杨晶豆晓伟王春华李青赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心细胞生物学系北京市100051 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所病理科河北省邢台市054000 河北医科大学生理学教研室河北省石家庄市050017 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所耳鼻喉科河北省邢台市054000 贵阳医学院附属医院骨科贵州省贵阳市550004

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选... 详细信息

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用Sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞Sca-1和vimentin的表达。筛选出MaECM培养基,培养乳腺细胞6 d后,免疫磁珠筛选Sca-1+和Sca-1-细胞群,流式细胞术分析Sca-1阳性细胞的纯度,1×104 Sca-1+或Sca-1-细胞种植在4只鼠双侧乳腺脂肪垫上,6-8周后取出乳腺脂肪垫,以卡红整体染色和苏木精-伊红染色分析长出乳腺的结构数量。结果与结论:乳腺器官样小体用BM培养基培养6 d后,检测到大量Sca-1和vimentin阳性的成纤维细胞,说明BM培养基不适合分离Sca-1+乳腺干细胞。筛选出的MaECM培养基能够抑制成纤维的生长。磁珠筛选后,流式细胞术检测Sca-1+细胞在Sca-1+和Sca-1-细胞群的纯度分别是92%和5%。移植实验显示在8个种植Sca-1+细胞的脂肪垫生长出6个乳腺结构;而在8个种植Sca-1-细胞的脂肪垫中除1只鼠死亡,其余脂肪垫中均未长出乳腺结构。提示MaECM培养基适用于培养鼠乳腺干细胞。

关键词：干细胞培养乳腺干细胞成纤维细胞 Sca-1 乳腺干细胞培养基国家重大科学研究计划(973)资助项目 863项目

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人羊膜上皮细胞治疗大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的效应及免疫调节作用

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中国免疫学杂志 2013年第10期29卷 1011-1016,1032页

作者：李丹方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的:观察人羊膜上皮细胞(hAECs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法:分离、培养hAECs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;EAE大鼠经双侧侧... 详细信息

目的:观察人羊膜上皮细胞(hAECs)对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型的治疗效应和免疫调节作用。方法:分离、培养hAECs,流式细胞术(FCM)检测其免疫表型;用豚鼠脊髓匀浆+完全弗氏佐剂+百日咳毒素复制大鼠EAE模型;EAE大鼠经双侧侧脑室移植5×105个hAECs;采用kono评分动态观察行为学变化;采用HE染色、免疫荧光染色观察脑和脊髓病理改变,以及hAECs在脑和脊髓内的分布;采用FCM检测外周血淋巴细胞亚群,采用流式微球芯片捕获技术(CBA)检测血浆细胞因子的含量。结果:hAECs治疗后EAE大鼠行为学评分逐渐减低(P<0.01),神经功能明显改善,体重稳定,脑和脊髓炎性细胞浸润减轻。hAECs移植后3周,宿主脑和脊髓组织中均有较多人细胞核抗原阳性细胞即hAECs存活;与对照组相比,hAECs治疗组FoxP3+Treg、Th2、CTL、NKT、B淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.05),而Th17细胞显著减少(P<0.01);Th2型细胞因子IL-4和IL-10含量升高(P<0.05或P<0.01),而Th1型细胞因子IL-2和IFN-γ含量降低(P<0.05或P<0.01)。结论:hAECs能改善大鼠EAE的神经功能,减轻神经组织的免疫损伤,其机制可能主要与上调FoxP3+Treg和下调Th17细胞有关。

关键词：人羊膜上皮细胞实验性自身免疫性脑脊髓炎免疫调节大鼠

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人羊膜间充质干细胞对大鼠胶原性关节炎的疗效及免疫调节作用

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免疫学杂志 2013年第6期29卷 461-466页

作者：肖瑶方宁陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室 563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京10005

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠胶原性性关节炎(CIA)的疗效和免疫调节作用。方法从人羊膜分离培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)分析其表型;用牛Ⅱ型胶原和弗氏佐剂诱导大鼠CIA模型;动物随机分为正常对照组、CIA模型组、hAMSCs治... 详细信息

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)对大鼠胶原性性关节炎(CIA)的疗效和免疫调节作用。方法从人羊膜分离培养hAMSCs,流式细胞术(FCM)分析其表型;用牛Ⅱ型胶原和弗氏佐剂诱导大鼠CIA模型;动物随机分为正常对照组、CIA模型组、hAMSCs治疗组、培养基对照组和氨甲蝶呤(MTX)治疗组,每组6只。hAMSCs治疗组经双踝关节腔注射2×106hAMSCs。观察关节炎指数(AI)、足趾容积、关节影像和病理变化以评价疗效;流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞中淋巴细胞亚群百分比。结果与模型组和培养基组比较,hAMSCs治疗组和MTX治疗组AI和足趾容积均明显下降(P<0.05),踝关节关节骨质破坏和炎症反应减轻;Th1、Th2、Th17、CTL1、CTL2和NKT亚群百分比明显下降,而Foxp3+Treg细胞显著上调(P<0.01)。hAMSCs治疗组和MTX治疗组比较,淋巴细胞亚群的变化相似,但后者Foxp3+Treg细胞上调幅度不及前者(P<0.01)。结论 hAMSCs可能通过调节Foxp3+Treg和Th17细胞发挥对大鼠CIA的治疗作用。

关键词：人羊膜间充质干细胞胶原性关节炎免疫调节大鼠

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静脉移植人羊膜间充质干细胞改善大鼠心肌梗死后心功能

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基础医学与临床 2013年第12期33卷 1516-1522页

作者：方宁王钰莹陈代雄余丽梅章涛赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假... 详细信息

目的探讨人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)静脉移植能否改善心肌梗死(MI)后心功能、减轻心肌纤维化和分化成心肌细胞。方法用流式细胞术和免疫组化染色对分离的hAMSCs进行表型分析和鉴定。结扎大鼠左冠状动脉前降支以建立MI模型,随机分为假手术组、模型组对照组和hAMSCs移植组,每组12只。成模后1周,移植组经舌下静脉注射2×106BrdU标记的hAMSCs。用超声心动图检查心功能,用HE和Masson染色观察心肌组织病理,用免疫荧光双染色检测hAMSCs在MI区的存活及向心肌细胞分化的标志物。结果 1)移植后1、4和6周,hAMSCs组射血分数和左室短轴缩短率均显著高于模型组(P<0.01);舒张期左室前壁厚度和收缩期左室前壁厚度也都明显大于模型组(P<0.01,P<0.05);2)hAMSCs移植后6周,纤维化面积明显少于模型组(P<0.01);3)hAMSCs移植后6周,MI区BrdU阳性细胞表达心肌特异蛋白连接蛋白-43、α-辅肌动蛋白和结蛋白。结论 hAMSCs静脉移植能改善心肌梗死后心功能和心室重构,在心肌梗死原位可分化为心肌细胞。

关键词：人羊膜间充质干细胞心肌梗死移植分化心功能

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骨髓Sca-1^+间充质干细胞移植减轻小鼠迟发型超敏反应

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基础医学与临床 2012年第2期32卷 133-137页

作者：曲学彬曾洋刘星霞赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背... 详细信息

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背部皮下与足跖注射C57BL/6小鼠脾细胞。24 h后用千分尺测量小鼠足跖的肿胀,ELISA法测外周血细胞因子及FACS法测脾脏免疫细胞比例。结果注射组小鼠足跖的肿胀程度[(0.368±0.126)mm]显著轻于对照组[(0.731±0.111)mm,P<0.01]。注射组外周血中IL-10和TGF-β含量显著高于对照组(P<0.05);而IL-12和TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05)。注射组小鼠脾脏调节型T细胞和树突细胞的比例均明显高于对照组(P<0.05)。结论 BMSC通过上调抑炎因子和调节型免疫细胞的数量而减轻DTH小鼠的免疫反应。

关键词：间充质干细胞迟发型超敏反应免疫反应

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体外诱导人羊膜上皮细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究

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中国应用生理学杂志 2012年第2期28卷 139-143,I0002页

作者：赵玉洁方宁陈代雄余丽梅喻皇飞赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力。方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定。取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培... 详细信息

目的:通过体外诱导分化实验,探讨人羊膜上皮细胞(hAECs)向胰岛素分泌细胞(ISCs)分化的能力。方法:采用胰蛋白酶消化法从人羊膜组织分离提取hAECs,用流式细胞仪和免疫细胞化学法进行鉴定。取第3代hAECs在含尼克酰胺和N2补充物的无血清培养基中诱导培养,分别于诱导不同时间采用免疫细胞化学法检测胰岛素和β2微球蛋白的表达,采用放射免疫法检测上清液中胰岛素含量,采用RT-PCR检测胰岛素mRNA和胰十二指肠同源异型盒因子-1(PDX-1)mRNA的表达。结果:①hAECs高表达CD29、CD73、CD166和CK19;②hAECs诱导组第7、142、1天胰岛素阳性细胞百分率分别为74.00%±1.73%、75.33%±1.15%和75.67%±0.58%,而对照组未见胰岛素阳性细胞;③hAECs诱导组第7、14、21天培养物上清液中胰岛素含量分别达(328.47±3.22)μIU/ml、(332.26±1.22)μIU/ml和(329.68±2.57)μIU/ml,均显著高于对照组(P均<0.01);④hAECs诱导前后均有PDX-1 mRNA和β2微球蛋白表达,胰岛素mRNA表达仅见于诱导组。结论:hAECs能分化为ISCs,在Ⅰ型糖尿病细胞移植治疗方面具有潜在应用前景。

关键词：人羊膜上皮细胞胰岛素分泌细胞诱导分化

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人羊膜上皮细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞

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基础医学与临床 2012年第9期32卷 998-1003页

作者：宫黎明方宁陈代雄万卫红章涛余丽梅赵春华遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室贵州遵义563003 中国医学科学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为... 详细信息

目的探讨人羊膜上皮细胞在大鼠损伤肝原位植活及向肝细胞分化。方法用胰蛋白酶消化法从羊膜组织中分离人羊膜上皮细胞(hAECs),用流式细胞术和免疫荧光染色进行表型分析和细胞鉴定。腹腔注射D-氨基半乳糖溶液建立大鼠肝损伤模型,随机分为hAECs移植组和对照组,每组20只。造模后24 h用微量注射器于肝左、中、右叶3点分别移植L-DMEM悬浮的hAECs悬液50μL(约1×106个细胞),对照组注射等量L-DMEM。于移植后48 h、1、2和4周处死各实验组5只大鼠,取肝脏制备冰冻切片,用免疫荧光双染色检查hAECs在受损肝原位的植活、分布及其向肝细胞分化的标志物表达。结果 1)FCM分析和免疫荧光染色结果显示,所分离的hAECs表达CD29、CD166及CK19,几乎不表达CD44、CD80、CD86、HLA-DR及波形蛋白;2)免疫荧光双染色结果显示,hAECs移植后1周主要定植于肝小叶且表达AFP,至2周表达CK18,至4周表达Alb。结论 hAECs在大鼠受损肝组织中能被植活且可分化为肝细胞,提示hAECs移植在临床肝病的治疗方面可能具有潜在应用价值。

关键词：人羊膜上皮细胞移植分化肝细胞肝损伤

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