检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学遗传学杂志 2017年第6期34卷 909-914页

作者：张新文严志凌史荔杨宏英洪超俞建昆李传印姚宇峰中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学第三附属医院妇科 650118

目的探讨云南汉族人群中HSPA1A基因多态性与宫颈癌发生和发展的相关性。方法选取宫颈癌患者以及444例癌前病变（CINⅢ期）患者130例，健康正常对照548例。用TaqMan探针基因分型方法对HSPAIA基因的4个SNP位点[rs12190359（C〉T）、rs562... 详细信息

目的探讨云南汉族人群中HSPA1A基因多态性与宫颈癌发生和发展的相关性。方法选取宫颈癌患者以及444例癌前病变（CINⅢ期）患者130例，健康正常对照548例。用TaqMan探针基因分型方法对HSPAIA基因的4个SNP位点[rs12190359（C〉T）、rs562047（C〉G）、rsl008438（G〉T）和rsl043618（G〉c）]进行基因分型，研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在CINUI期患者、宫颈癌患者和健康对照人群中分布频率的差异。结果rs1008438位点等位基因G和T在CINⅢ期组和对照组、癌症组和对照组（P=0．022和0．030）中的分布频率的差异具有统计学意义，而在CINⅢ期组和癌症组中的分布频率差异无统计学意义（P〉0．05）；rs1008438位点基因型GG、GT和TT仅在CINⅢ期组和对照组中分布频率差异具有统计学意义（P=0．047），而在CINⅢ期组和癌症组之间、癌症组和对照组之间的分布频率差异无统计学意义（P〉0．05）。rs12190359、rs562047和rs1043618位点的等位基因和基因型在病例组和对照组中的分布频率的差异均无统计学意义（P〉0．05）。根据连锁不平衡的分析结果，对rs562047、rs1008438和rs1043618三个位点构建的单倍型进行分析，结果未显示有单倍型在各组间分布频率的差异有统计学意义（P〉0．05）。结论HSPA1A基因rs1008438位点等位基因G可能是云南汉族人群宫颈癌发生的保护性因素（OR=0．797；95％CI：0．674-0．943）。

关键词：宫颈癌 HSPA1A基因单核苷酸多态性相关性

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不同途径免疫不同动物制备的F基因型腮腺炎病毒抗血清的比较

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中国生物制品学杂志 2020年第11期33卷 1307-1311页

作者：王微邱恒杨振清王雯慧胡云光李琦涵王晶晶中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的利用F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液,经不同途径免疫动物制备抗腮腺炎病毒血清。方法将F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液与弗氏佐剂混合后,经皮下注射、肌肉注射及皮下+肌肉注射的三种途径免疫雌性家兔和雌性豚鼠,均于0、7、14、2... 详细信息

目的利用F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液,经不同途径免疫动物制备抗腮腺炎病毒血清。方法将F基因型腮腺炎病毒浓缩后疫苗原液与弗氏佐剂混合后,经皮下注射、肌肉注射及皮下+肌肉注射的三种途径免疫雌性家兔和雌性豚鼠,均于0、7、14、28和35 d免疫,每次7.5 lgCCID50/mL,于每次免疫后7 d采用微量滴定法检测血清抗体效价。利用抗体效价较高血清对麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒进行干扰试验。结果不同免疫途径均可诱导动物产生抗体,皮下+肌肉注射的免疫方式产生的血清抗体效价高于单独皮下及肌肉注射的免疫方式,差异有统计学意义(P<0.05);在同等免疫剂量下,家兔产生的抗血清效价明显高于豚鼠。家兔抗腮腺炎病毒血清对麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒的滴度均无干扰。结论经皮下和肌肉注射结合的途径免疫家兔,可获得高效价血清抗体,对制备高效价F基因型腮腺炎病毒血清抗体提供了依据。

关键词：腮腺炎病毒 F基因型中和抗体效价免疫途径

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表达甲型H1N1流感病毒血凝素重组腺病毒的构建及免疫学评价

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现代免疫学 2012年第4期32卷 308-314页

作者：严敏孙茂盛谢天宏王文举岳磊李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

构建表达甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)的重组腺病毒,探讨其经滴鼻和肌肉注射免疫小鼠后诱导机体产生特异性免疫应答的能力。通过人工合成HA基因,克隆其至穿梭质粒pShuttle-CMV中,经同源重组获得重组腺病毒质粒,转染Ad-293... 详细信息

构建表达甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)的重组腺病毒,探讨其经滴鼻和肌肉注射免疫小鼠后诱导机体产生特异性免疫应答的能力。通过人工合成HA基因,克隆其至穿梭质粒pShuttle-CMV中,经同源重组获得重组腺病毒质粒,转染Ad-293细胞,包装携带H1N1HA基因的重组腺病毒Ad-HA。RT-PCR和免疫荧光检测HA基因在Vero细胞中成功的转录和表达。CsCl密度梯度离心纯化重组腺病毒,通过鼻腔免疫和肌肉注射免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠血清中抗HA抗体滴度。结果显示Ad-HA通过鼻腔免疫和肌肉注射两种途径均能刺激小鼠产生抗HA的抗体,鼻腔免疫能在初次免疫后两周刺激机体产生抗体,最高抗体效价可达1∶103.4,而肌肉注射初次免疫两周后未出现明显的免疫应答,加强免疫后抗体水平出现明显的上升,最高抗体效价可达1∶104。结果表明表达甲型H1N1流感病毒HA蛋白的重组腺病毒通过肌肉注射和滴鼻免疫两种途径均能刺激小鼠产生针对HA的IgG抗体。

关键词：甲型H1N1流感病毒血凝素重组腺病毒免疫原性

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表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白受体结合域和N蛋白的重组腺病毒的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2023年第9期36卷 1025-1031页

作者：宋泽鑫周艳林晓晨赵永美施鹏王学付张朝武李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory symptom coronavirus 2,SARS-CoV-2)Delta突变株S蛋白受体结合域(receptor binding domain,RBD)和N蛋白的重组腺病毒,并进行鉴定。方法将SARSCoV-2 RBD和N基因片段分别克隆至pcDNA3.0BA载体上,构建重组质粒pcDNA3.0BA-RBD-N,PCR扩增RBD-CMVN片段,连接至穿梭载体pShuttle-CMV上,将穿梭质粒pShuttle-RBD-N与pAdeasy-1进行同源重组,获得重组质粒pAdeasy-1-RBD-N,转染HEK293细胞进行重组腺病毒Ad-RBD-N包装,RT-PCR法检测重组腺病毒中RBD和N基因在HEK293细胞中的转录,Western blot和免疫荧光法检测重组腺病毒中RBD和N蛋白的表达。将Ad-RBD-N通过肌肉注射免疫12只雌性BALB/c小鼠,免疫剂量为5×10^(9)copies/只,免疫后14 d经尾静脉采血,ELISA法检测血清抗体效价。结果重组腺病毒RBD和N基因能在HEK293细胞中正常转录,RBD和N蛋白能在MA104细胞中正常表达。免疫重组腺病毒的小鼠可产生针对RBD和N蛋白的特异性IgG抗体。结论成功构建了表达SARS-CoV-2 Delta突变株S蛋白RBD和N蛋白的重组腺病毒,为Delta突变株疫苗的后续研究奠定了基础。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 S蛋白受体结合域 N蛋白腺病毒

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一株引起病毒性脑炎的柯萨奇B3病毒的生物学特性分析

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中国病原生物学杂志 2014年第4期9卷 293-298页

作者：李华杨卉娟王东宝柯华昕王玺沈冬王庆玲马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的通过分析分离自病毒性脑炎病人的一株柯萨奇病毒B3株KMA103-09生物学特性,研究其致病机理。方法将KMA103-09病毒分别按一定量接种至KMB17细胞、RD细胞、VERO细胞、Hep-2细胞、Hela细胞及MRC-5细胞进行培养,观察细胞的生长情况,并采... 详细信息

目的通过分析分离自病毒性脑炎病人的一株柯萨奇病毒B3株KMA103-09生物学特性,研究其致病机理。方法将KMA103-09病毒分别按一定量接种至KMB17细胞、RD细胞、VERO细胞、Hep-2细胞、Hela细胞及MRC-5细胞进行培养,观察细胞的生长情况,并采用微滴法检测病毒在不同时间、不同细胞中的病毒感染滴度;将一定量KMA103-09病毒注射乳鼠和成鼠脑内,观察病毒的致病性,并检查鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-r、TNF、IL-17A、IL-10含量。结果该病毒株在6种细胞上皆能适应生长,并产生明显的细胞病变效应。病毒在Hela细胞上生长繁殖最快,42h时细胞全部发生病变,感染性滴度达8.625lgCCID50/ml;在MRC-5细胞上病毒的感染性滴度最低,120h才全部发生病变,感染性滴度为5.50lgCCID50/ml。该病毒对一日龄乳鼠致死并在脑、肺和心脏等组织产生病理改变,实验乳鼠血清IL-6、IL-10、TNF含量分别为4.71pg/ml、21.08pg/ml和36.79pg/ml,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其余4种皆无表达。该病毒对成鼠不致病,脑、肺、心脏病理检查无异常。结论 KMA103-09病毒在Hela细胞生长适应性良好,对乳鼠致病而对成鼠不致病。

关键词：柯萨奇病毒B3 致病性生物学特性

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肠道菌群对疫苗有效性影响的研究进展

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中国疫苗和免疫 2017年第6期23卷 705-710页

作者：江文文孙明波中国医学科学院、北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

机体与肠道菌群间的共生关系对于维持机体健康包括对免疫系统发育、增强上皮屏障和营养的吸收功能至关重要。越来越多的研究表明,肠道菌群影响机体免疫系统的发生与发展。这些发现表明肠道菌群的结构组成最终可能影响疫苗的有效性。虽... 详细信息

机体与肠道菌群间的共生关系对于维持机体健康包括对免疫系统发育、增强上皮屏障和营养的吸收功能至关重要。越来越多的研究表明,肠道菌群影响机体免疫系统的发生与发展。这些发现表明肠道菌群的结构组成最终可能影响疫苗的有效性。虽然目前关于表明肠道菌群改变疫苗有效性的证据比较少,但是进一步了解机体免疫系统与肠道菌群的相互作用有助于开发佐剂及疫苗,从而用于疾病预防与治疗。本文对近年来国内外关于肠道菌群对免疫系统的作用、肠道菌群和益生菌对疫苗免疫应答的影响进行概述,以期为疫苗的研究提供更多的理论参考。

关键词：肠道菌群免疫疫苗益生菌

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人类单纯疱疹病毒流行情况分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第12期39卷 937-950页

作者：冯敏高杨杨亚丽李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省第二人民医院病理科昆明650021

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)通常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖道疱疹亦越来越多,且与阿尔茨海默病的发生密切相关。HSV-1和HSV-2已经成为全球感染率最高的性传播疾病之一,并显著增加罹患艾滋病及其他生... 详细信息

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)通常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖道疱疹亦越来越多,且与阿尔茨海默病的发生密切相关。HSV-1和HSV-2已经成为全球感染率最高的性传播疾病之一,并显著增加罹患艾滋病及其他生殖道疾病的风险,这些新的流行病学资料改变了过去对HSV的忽视,促使各个国家迫切开始重视针对HSV感染情况的数据收集和开发新的疫苗设计策略。基于全球对HSV感染的新认识和举措,本文将从不同角度分别对世界和国内HSV流行情况作一综述,以期了解HSV近年的感染趋势和传播特点。

关键词：单纯疱疹病毒诊断和检测方法流行病学分析

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被动免疫轮状病毒NSP4&VP7双抗原重组腺病毒对感染乳鼠的排毒保护作用

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病毒学报 2021年第6期37卷 1341-1347页

作者：谢力曾韦锟贾静句红萍唐丽媛秦林才吴晋元李鸿钧孙茂盛昆明学院医学院昆明650214 中国医学科学院医学生物学研究所北京协和医学院云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650214

为建立小鼠轮状病毒(Rotavirus,RV)感染动物模型,研究可同时表达轮状病毒NSP4(Nonstructural protein4)和VP7(Viral protein 7)的重组腺病毒疫苗免疫孕鼠后对新生乳鼠感染RV的被动保护作用。新生乳鼠口服异源株轮状病毒Wa、ZTR-68或SA1... 详细信息

为建立小鼠轮状病毒(Rotavirus,RV)感染动物模型,研究可同时表达轮状病毒NSP4(Nonstructural protein4)和VP7(Viral protein 7)的重组腺病毒疫苗免疫孕鼠后对新生乳鼠感染RV的被动保护作用。新生乳鼠口服异源株轮状病毒Wa、ZTR-68或SA11株后(分2次给予,每次含5×10^(4)CCID_(50)的RV),观察乳鼠是否有腹泻症状、肠道病理变化,检测乳鼠粪便排毒百分率;另以重组腺病毒rAd-NSP4-VP7免疫孕鼠后,检测母鼠血清抗体产生情况,并对比乳鼠粪便中RV抗原检出率初步评价疫苗的被动免疫保护作用。发现口服异源株RV的乳鼠未出现类似人类婴幼儿感染后的明显腹泻症状,但在粪便中可检测到RV抗原的存在(Wa、ZTR-68攻毒组均超过80%)。经rAd-NSP4-VP7被动免疫的乳鼠接受Wa和ZTR-68攻毒后其粪便中的RV检出率比未受到被动免疫保护的对照组降低(P<0.05)。rAd-NSP4-VP7重组腺病毒免疫母鼠可显示出对孕鼠感染RV的被动免疫保护作用。

关键词：轮状病毒(RV) NSP4 VP7 重组腺病毒乳鼠被动免疫

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表达轮状病毒nsp4基因重组腺病毒的构建与免疫评价

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中国生物工程杂志 2014年第2期34卷 1-6页

作者：谢力王晓囡李杨严敏曹颖李鸿钧孙茂盛中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明学院医学院昆明650214

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-... 详细信息

目的:应用非复制腺病毒表达系统构建表达人轮状病毒非结构蛋白4(NSP4)的重组腺病毒,初步评价其免疫保护效果。方法:构建含野生轮状病毒NSP4基因的穿梭质粒pshuttle-NSP4,与腺病毒骨架质粒pAdeasy经同源重组后在Ad-293细胞中包装获得pAd-NSP4重组腺病毒颗粒。电镜、RT-PCR、免疫荧光等方法鉴定病毒特征及在体外细胞中的表达。肌肉注射及滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清抗体效价及其中和保护效果。结果:获得了滴度为108.25CCID50/ml的重组腺病毒pAd-NSP4,免疫荧光检测到特异性目的蛋白的表达。二次免疫后肌肉注射和滴鼻小鼠的ELISA血清平均效价分别为1∶320和1∶1436.8;中和抗体效价1∶45.3和1∶71.8。结论:表达轮状病毒NSP4蛋白的非复制型重组腺病毒颗粒具有良好的免疫原性。滴鼻途径比肌肉注射可更加有效地诱导小鼠的免疫应答。

关键词：轮状病毒 NSP4 重组腺病毒 NSP4

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登革病毒Ⅰ型拷贝数标准质粒和检测体系的建立及其应用

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中国生物制品学杂志 2019年第1期32卷 76-79页

作者：林垚洪珊文送娇席珏敏王晓丹陈俊英潘玥叶超管娇琼孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的建立登革病毒Ⅰ型(dengue virus-Ⅰ,DENV-Ⅰ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将DENV-Ⅰ的前膜蛋白基因克隆至pMD19-T载体,建立DENV-Ⅰ标准质粒,采用实时荧光定量PCR法进行扩增,获得Ct值与病毒拷贝数的关系,绘制标准曲线,得到相应... 详细信息

目的建立登革病毒Ⅰ型(dengue virus-Ⅰ,DENV-Ⅰ)拷贝数标准质粒及其检测体系。方法将DENV-Ⅰ的前膜蛋白基因克隆至pMD19-T载体,建立DENV-Ⅰ标准质粒,采用实时荧光定量PCR法进行扩增,获得Ct值与病毒拷贝数的关系,绘制标准曲线,得到相应的标准曲线方程。采用建立的标准质粒及检测体系对3份2017年云南西双版纳DENV-Ⅰ患者的血清进行检测。结果经双酶切及测序鉴定,DENV-Ⅰ拷贝数标准质粒构建正确。实时荧光定量PCR得到的标准曲线方程为y=-0. 300 5 x+12. 133,R^2=0. 991 9。3份血清样品原液的病毒拷贝数分别为9 417 703. 12、21 949 591. 01及19 027 096. 91 copies/μL。结论成功建立了DENV-Ⅰ拷贝数标准质粒及其检测体系,且准确性较好,灵敏度较高,可用于血清样品中DENV-Ⅰ拷贝数的检测。

关键词：登革病毒Ⅰ型病毒拷贝数标准质粒

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