检索结果-内蒙古大学图书馆

生物学杂志 2019年第6期36卷 12-16页

作者：陈林林周艳林晓晨杜静刘洋汪艺李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

研究轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白5(NSP5)在体外对RV复制的作用。以质粒pEGFP-N2为载体构建出可特异性表达重组蛋白NSP5的真核表达载体后,将重组质粒转染MA104细胞并分别通过免疫荧光和Western Blot检测NSP5在转染后不同时间的表... 详细信息

研究轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白5(NSP5)在体外对RV复制的作用。以质粒pEGFP-N2为载体构建出可特异性表达重组蛋白NSP5的真核表达载体后,将重组质粒转染MA104细胞并分别通过免疫荧光和Western Blot检测NSP5在转染后不同时间的表达差异。随后,重组质粒转染组及对照组细胞分别接种相同剂量的RV,一定时间后根据GFP分布来确认重组蛋白NSP5在细胞内的迁移变化情况,并比较实验组和对照组之间的RV复制能力差异。结果发现,NSP5蛋白在重组质粒转染细胞48 h后表达达到顶峰。此外,GFP也显示NSP5蛋白随RV的感染从弥散状转变为点状聚集,且转染该重组质粒的细胞内RV复制水平明显高于对照细胞。说明了轮状病毒NSP5对病毒的复制具有明显促进作用,这也为深入了解RV的感染、复制及致病机理提供理论基础。

关键词：轮状病毒 NSP5 真核表达载体病毒复制

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柯萨奇病毒A组16型G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学

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中国生物制品学杂志 2012年第8期25卷 963-966页

作者：刘尚允王丽春董承红赵恒杨二霞刘龙丁李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031

目的探讨柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学。方法常规培养Vero和人二倍体KMB-17细胞,待细胞长至单层,接种G20株病毒,进行病毒蚀斑试验,以0.1 MOI的感染复数分别感染此两种细胞,置不同... 详细信息

目的探讨柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)G20分离株在不同培养条件下的增殖动力学。方法常规培养Vero和人二倍体KMB-17细胞,待细胞长至单层,接种G20株病毒,进行病毒蚀斑试验,以0.1 MOI的感染复数分别感染此两种细胞,置不同温度和pH维持液中进行培养,每2 h收样1次至第24 h,以48 h收样作为对照样,微量滴定法检测病毒滴度,并绘制增殖动力学曲线。结果 G20株病毒在Vero及KMB-17细胞中传代适应后,均可导致细胞病变。G20株病毒在此两种细胞中培养,pH 6.0、pH 6.5时,不同培养温度下,病毒基本不增殖;pH 7.5与pH 7.0的病毒增殖基本一致,增殖速度随温度呈现37℃>35℃>33℃的趋势;在33℃～37℃、pH 7.0～8.0时,病毒均有不同程度的增殖;在41℃、各pH条件下,病毒增殖均明显受到限制。结论病毒在此两种细胞中,37℃,pH 7.5培养条件下,增殖速度及滴度均较理想。

关键词：柯萨奇病毒温度 pH 增殖动力学

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人用疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的鉴定

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中国生物制品学杂志 2018年第10期31卷 1135-1141页

作者：宋彩花任芳芳刘杰段男钱兴丽李娅娴杨晓蕾洪超中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的鉴定本所自主建立的人用疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的正确性。方法用染色体核型检查法和短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对本所疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17进行鉴定。将疫苗生产用KMB17细胞经秋水仙素处... 详细信息

目的鉴定本所自主建立的人用疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的正确性。方法用染色体核型检查法和短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因分型法对本所疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17进行鉴定。将疫苗生产用KMB17细胞经秋水仙素处理,积累中期相染色体后,低渗条件下释放出染色体,吉姆萨染料染色制片,镜检,观察染色体结构,精确计数100个细胞的染色体数目;选取人源细胞的20个STR位点对KMB17细胞进行DNA分型,并将获得的STR图谱与ATCC和DSMZ数据库进行比对分析。结果高倍镜下观察可见,样品细胞染色体组结构正常,无缺失和突变;精确计数100个细胞中,染色体数为46的细胞数有84个,无染色单体和染色体断裂细胞,无结构异常细胞,亚二倍体细胞14个,超二倍体细胞数2个。STR基因分型获得的特征性图谱清晰,未出现三单位基因,在ATCC和DSMZ数据库中均未找到与其细胞分型完全匹配的细胞株。结论本所自主建立的疫苗生产用人二倍体细胞株KMB17的细胞染色体结构和数目均正常,不存在污染和交叉污染,为正确细胞株。

关键词：人二倍体细胞KMB17 染色体核型短串联重复序列

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人用疫苗生产用工作细胞库Vero细胞的鉴别

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中国生物制品学杂志 2017年第10期30卷 1022-1027页

作者：钱兴丽宋彩花任芳芳赵勇段男李娅娴俞建昆洪超杨晓蕾中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的采用两种不同的方法进行人用疫苗生产用工作细胞库Vero细胞的鉴别,为提高人用疫苗生产用细胞的准确性及疫苗的安全性提供保障。方法采用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)-PCR基因分型法对本所疫苗生产用Vero细胞的8个STR位... 详细信息

目的采用两种不同的方法进行人用疫苗生产用工作细胞库Vero细胞的鉴别,为提高人用疫苗生产用细胞的准确性及疫苗的安全性提供保障。方法采用短串联重复序列(short tandem repeat,STR)-PCR基因分型法对本所疫苗生产用Vero细胞的8个STR位点(D8S1106、D1S518、D6S1017、D17S1304、D4S2408、D5S1467、D19S245和DYS389)进行测定,并与文献报道的结果进行比对分析;采用染色体核型检查法,将Vero细胞经Giemsa染料染色,于显微镜下精确计数100个细胞的染色体后,统计染色体数为58或60条的细胞所占比例。结果 STR基因分型得到的特征性图谱与文献报道的结果完全相同,未出现三单位基因,且STR的重复数完全相同;高倍镜下精确计数100个细胞染色体数为58或60条的细胞所占比例为79%。结论本所疫苗生产用工作细胞库Vero细胞为正确细胞株,不存在污染或交叉污染的情况,为本所人用疫苗的安全性和准确性提供了保障。

关键词：非洲绿猴肾细胞工作细胞库细胞鉴别 STR图谱染色体核型分析

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云南汉族人群内质网氨肽酶2基因多态性与非小细胞肺癌遗传易感性的相关性

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中华结核和呼吸杂志 2014年第12期37卷 909-914页

作者：周竞贤马千里郭晨史荔姚宇峰俞建昆张晓琳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学第三附属医院胸外科

目的探讨内质网氨肽酶2 （ERAP2）基因多态性与非小细胞肺癌（NSCLC）的相关性.方法收集云南地区汉族人群NSCLC患者223例,健康体检者205名.采用Taq Man探针基因分型方法对ERAP2基因单核苷酸多态性（SNP） rs2248374和rs2549782位点进... 详细信息

目的探讨内质网氨肽酶2 （ERAP2）基因多态性与非小细胞肺癌（NSCLC）的相关性.方法收集云南地区汉族人群NSCLC患者223例,健康体检者205名.采用Taq Man探针基因分型方法对ERAP2基因单核苷酸多态性（SNP） rs2248374和rs2549782位点进行基因分型,并构建单倍型,评估上述2个SNP位点及单倍型与NSCLC的相关性.结果病例组和对照组ERAP2基因rs2248374等位基因频率A和G分别为45.5％（203/446）、54.5％（243/446）和37.8％（155/410）、62.2％（255/410）,差异有统计学意义（x2=5.220,P＜0.05）,rs2549782位点GG、GT、TT基因型频率分别为21.5％（48/223）、48.9％（109/223）、29.6％（66/223）和11.7％（24/205）、49.8％（102/205）、38.5％（79/205）;等位基因频率G和T分别为46.0％（205/446）、54.0％（241/446）和36.6％（150/410）、63.4％（260/410）,差异有统计学意义（x2值为8.656和7.741,均P＜0.05）,由rs2248374和rs2549782位点构建的单倍型AG和GT的频率分别为44.6％（199/446）、36.1％（148/410）和53.1％（237/446）、61.7％（253/410）,差异有统计学意义（x2值为6.567,均P＜0.01）.病例组中吸烟和非吸烟患者rs2248374位点的等位基因频率A和G分别为52.9％（72/136）、47.1％（64/136）和42.3％（131/310）、57.7％（179/310）,rs2549782位点的等位基因频率G和T分别为54.4％（74/136）、45.6％（62/136）和42.3％（131/310）、57.7％（179/310）,差异有统计学意义（x2值为4.498和5.831,均P＜0.05）,而鳞癌和腺癌患者的rs2248374位点AA、AG、GG基因型频率分别为17.3％（24/139）、56.1％（78/139）、26.6％（37/139）和27.8％（22/79）、38.0％（30/79）、34.2％（27/79）,rs2549782位点GG、GT、TT的基因型频率分别为18.7％（26/139）、55.4％（77/139）、25.9％（36/139）和27.8％（22/79）、36.7％（29/79）、35.4％（28/79）,差异有统计学意义（x2值为6.999和7.093,均P＜0.05）.结论 ERAP2基因与NSCLC的发生及病理类型有关,rs2248374和rs2549782位点AG单倍型可能增加NSCLC的患病风险（OR=1.435,95％ CI为1.088 ～ 1.893）,而rs2248374和rs2549782位点GT单倍型可能降低NSCLC的患病风险（OR=0.697,95％ CI为0.528 ～0.919）.

关键词：癌,非小细胞肺多态性,单核苷酸内质网氨肽酶2

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靶向IL-4主动免疫抑制屋尘螨抽提物诱导的小鼠气道炎症反应

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中国细胞生物学学报 2019年第5期41卷 918-925页

作者：高瑞雨严皎袁明翠马雁冰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

以IL-4为主要驱动的Th2应答是过敏性哮喘的主要免疫病理特征,该文旨在探讨靶向IL-4主动免疫对屋尘螨过敏原刺激的小鼠气道炎症反应的干预作用及潜力。研究以重组制备的、呈现IL-4肽表位的乙肝核心抗原病毒样颗粒免疫BALB/c小鼠,并以屋... 详细信息

以IL-4为主要驱动的Th2应答是过敏性哮喘的主要免疫病理特征,该文旨在探讨靶向IL-4主动免疫对屋尘螨过敏原刺激的小鼠气道炎症反应的干预作用及潜力。研究以重组制备的、呈现IL-4肽表位的乙肝核心抗原病毒样颗粒免疫BALB/c小鼠,并以屋尘螨抽提物诱导气道过敏性炎症反应。结果显示,靶向IL-4的主动免疫激发了持续的IL-4特异IgG抗体高水平应答;显著减少气道浸润的总炎性细胞以及其中占主要的嗜酸性粒细胞数目;显著降低了支气管肺泡灌洗液中Th2细胞因子IL-4、IL-13和IL-5水平,而Th1的IFN-γ有升高趋势;显著下调了血清IgG1而上调IgG2a水平;此外,显著抑制了乙酰甲胆碱刺激的过敏小鼠气道高反应性。研究表明,靶向IL-4的主动免疫具有抑制过敏性气道炎症反应的潜力。

关键词：白细胞介素-4 病毒样颗粒屋尘螨抽提物哮喘

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分子排阻高效液相色谱法检测组分无细胞百白破联合疫苗的纯度

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中国疫苗和免疫 2019年第3期25卷 276-280页

作者：梁疆莉马艳顾琴高娜孙明波杨卉娟中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的建立组分无细胞百白破联合疫苗(DTaP)纯度分析的分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)方法,用于疫苗生产过程的质量检测指标。方法建立SE-HPLC法检测DTaP中破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、百日咳毒素(PT)、百日咳丝状血凝素(FHA)、百... 详细信息

目的建立组分无细胞百白破联合疫苗(DTaP)纯度分析的分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)方法,用于疫苗生产过程的质量检测指标。方法建立SE-HPLC法检测DTaP中破伤风类毒素(TT)、白喉类毒素(DT)、百日咳毒素(PT)、百日咳丝状血凝素(FHA)、百日咳黏附素(PRN)五种组分纯化液和TT脱毒液纯度的方法,同时用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法对各组分纯度进行对比检测和分析。结果选TSK-GEL G4000PWXL色谱柱,DTaP组分的SE-HPLC法纯度检测和分析显示,PT、FHA、PRN、DT纯化液的平均纯度分别为98.46%、91.88%、94.16%、90.11%;TT纯化液二聚体、单体的含量分别占74.50%、25.50%,TT脱毒液二聚体、单体的含量分别占57.22%、42.78%。上述结果与SDS-PAGE法的检测和分析结果相似。结论 SE-HPLC法可以用于DTaP五种纯化液的纯度分析,其与SDS-PAGE法都可以对DTaP生产过程中的纯度指标进行监控。

关键词：无细胞百白破疫苗分子排阻高效液相色谱法纯度

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云南省柯萨奇病毒A组6型全基因组特征分析

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中国生物制品学杂志 2022年第8期35卷 922-927页

作者：张名冯昌增刘红波王晓辉许丹菡丛山日何陆涛张光贤马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析2015年云南省4株柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)分离株的全基因组特征。方法取手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿粪便样本,制备悬液,接种至人横纹肌肉瘤细胞,CV-A6致细胞病变(CPE)后,收集病毒液,提取... 详细信息

目的分析2015年云南省4株柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)分离株的全基因组特征。方法取手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患儿粪便样本,制备悬液,接种至人横纹肌肉瘤细胞,CV-A6致细胞病变(CPE)后,收集病毒液,提取RNA,经RT-PCR分段扩增获得全基因组片段,并进行测序。采用Geneious 9.1.4和Mega 7.0、Simplot等生物学软件进行核苷酸和氨基酸序列比对、系统进化及重组分析,并构建系统进化树。结果4株CV-A6分离株之间核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.8%~97.9%和97.3%~98.4%,与近几年国内流行的CV-A6株核苷酸和氨基酸序列一致性分别为94.6%~97.9%和97.4%~99.1%;分离株在5′UTR、2A、2C、3A、3D、3′UTR区可能存在与毒力和临床表型相关的12个位点。结论4株云南分离株属于CV-A6血清型,为D3a基因亚型。

关键词：柯萨奇病毒A组6型全基因组序列分析

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1型单纯疱疹病毒疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2018年第4期31卷 445-448页

作者：徐兴丽李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染可导致口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎等症状,并可长期潜伏于神经系统。目前尚无干预手段能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒潜伏感染和复发性感染。疫苗依然被认为是控... 详细信息

1型单纯疱疹病毒(herpes simplex virus type 1,HSV-1)感染可导致口唇疱疹、生殖器疱疹、脑炎等症状,并可长期潜伏于神经系统。目前尚无干预手段能有效预防疱疹病毒原发感染以及控制疱疹病毒潜伏感染和复发性感染。疫苗依然被认为是控制病毒感染的理想方式。本文就HSV-1疫苗的研究进展作一综述。

关键词： 1型单纯疱疹病毒疫苗

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一株柯萨奇病毒A9分离株的VP1基因遗传特征分析

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中国生物制品学杂志 2016年第1期29卷 18-22页

作者：王晓辉张海浩俞泽煦杨舜乔朱艳菊白巍邵聪文马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析引起病毒性脑炎（viral encephalitis,VE）的一株柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）A9分离株（CVA9）的VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对VE患儿粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1全基因,并测序,采... 详细信息

目的分析引起病毒性脑炎（viral encephalitis,VE）的一株柯萨奇病毒（Coxsackievirus,CV）A9分离株（CVA9）的VP1基因遗传特征。方法采用KMB17细胞对VE患儿粪便标本进行病毒分离,利用RT-PCR法从分离的病毒中扩增VP1全基因,并测序,采用Mega 6.1和Geneious 5.6.5等软件分析其序列,并构建系统进化树。结果从5份VE患儿粪便中分离到一株人CVA9,命名为A108/YN/CHN/2009,其全长VP1基因的核苷酸长度与其他CVA9一致,均为906 bp。与中国其他分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.4%～98.2%和96.4%～99.3%,而与国外分离株的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.0%～96.0%和92.7%～99.0%。在进化树上与其他中国分离株属同一分支中不同两个亚分支,与JB141230009亲缘关系较近。结论 A108/YN/CHN/2009分离株为肠道病毒CVA9血清型,与其他中国分离株同属一个基因簇。

关键词：柯萨奇病毒A9 VP1基因遗传特征

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