检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2018年第1期31卷 14-17,23页

作者：李嘉祺李洪哲郑惠文宁若彤范海涛杨泽宁胡雅洁刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组R... 详细信息

目的构建柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)c DNA感染性克隆。方法提取CA16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长c DNA,插入至TOPO-XL-PCR载体,获得CA16全长c DNA克隆。采用T7聚合酶系统将线性基因组c DNA体外转录出病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得拯救病毒。通过RT-PCR、基因测序及免疫荧光法对拯救病毒进行鉴定,并对拯救病毒与母本病毒的增殖特性进行比较。结果病毒基因组RNA转染Vero细胞后48 h,可见典型的肠道病毒致细胞病变。拯救病毒经RT-PCR、基因测序和免疫荧光鉴定为CA16,且与母本野生型病毒增殖特性基本一致。结论成功构建了具有感染性的CA16全长c DNA克隆,为研究CA16基因功能和研发CA16新型疫苗奠定了基础。

关键词：柯萨奇病毒A组16型感染性克隆病毒拯救

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肺炎支原体生物学及其疫苗研究状况

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中国生物制品学杂志 2016年第11期29卷 1221-1224页

作者：李泽华廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

急性呼吸道感染的死亡率仅次于心血管疾病,成为威胁人类健康的公共卫生问题。已有多种肺炎相关病原体疫苗上市或研发,但针对支原体引发肺炎的有效疫苗却鲜有报道,加之其特殊的结构特点,使用常规药物很难进行有效治疗,导致发病率逐年增... 详细信息

急性呼吸道感染的死亡率仅次于心血管疾病,成为威胁人类健康的公共卫生问题。已有多种肺炎相关病原体疫苗上市或研发,但针对支原体引发肺炎的有效疫苗却鲜有报道,加之其特殊的结构特点,使用常规药物很难进行有效治疗,导致发病率逐年增加。对支原体引发肺炎的相关机制、预防及治疗手段的研究逐渐成为热点,通过对相关疫苗的研发降低其危险性愈发重要。

关键词：呼吸道感染肺炎支原体疫苗

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宿主遗传因素对疫苗接种后免疫反应的影响

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中国生物制品学杂志 2015年第2期28卷 199-203页

作者：李莹姚宇峰史荔中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

疫苗是当今世界预防感染性疾病的主要手段,在降低传染病的发病率和死亡率方面,几乎没有其他干预方式能够达到疫苗的效果。众所周知,机体对疫苗的反应与很多因素有关,包括年龄、性别、种族、身体质量指数、疫苗的质量、注射剂量以及注射... 详细信息

疫苗是当今世界预防感染性疾病的主要手段,在降低传染病的发病率和死亡率方面,几乎没有其他干预方式能够达到疫苗的效果。众所周知,机体对疫苗的反应与很多因素有关,包括年龄、性别、种族、身体质量指数、疫苗的质量、注射剂量以及注射方式等。但就同一种疫苗而言,机体的遗传因素在免疫应答中发挥着重要作用。研究表明,直接或间接参与免疫反应的各种基因,例如,宿主细胞膜上的病毒受体基因、先天Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)基因、细胞因子及其受体基因、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)基因等,其单个变异或多个的变异均可能与疫苗所引起的免疫应答水平相关。本文就人群遗传因素与免疫反应的相关性作一综述。

关键词：宿主遗传因素 HLA 免疫反应

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一种改进型基于荧光蛋白重定位系统的丙型肝炎病毒滴度检测方法的建立

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中国生物制品学杂志 2018年第2期31卷 181-187页

作者：毕研伟李智华龙琼张辉陈晨李亚东李育中寸韡中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素β启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulator-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位氨基酸... 详细信息

目的建立一种简单、快速检测丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染的荧光细胞系检测系统,并用其检测HCV滴度。方法通过RT-PCR法获得干扰素β启动刺激因子-1(interferon beta promoter stimulator-1,IPS-1)蛋白C-端第462-540位氨基酸(C462-540)的基因序列及含有SV40核定位信号的IPS-1(C462-540)基因序列,插入经同样酶切的慢病毒表达载体LV-CAG--EGFP-WPRE、LV-CAG—mCherry(RFP)-WPRE,构建表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-NLS-IPS-1(C462-540)的慢病毒重组表达质粒;在此基础上构建含有IPS-1(C462-540)-2A-EGFP-puro、IPS-1(C462-540)-IRES-EGFP-puro的慢病毒重组表达质粒;利用293T细胞包装含有IPS-1(C462-540)蛋白的重组慢病毒;感染Huh7.5细胞,流式细胞仪筛选稳定表达增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)、红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)的Huh7.5细胞,或用puromycin筛选稳定表达EGFP的Huh7.5细胞;利用10倍系列稀释的HCV感染上述细胞,检测HCV的滴度。结果测序表明4种慢病毒表达质粒构建正确;收获的慢病毒感染Huh7.5细胞48 h后,可见EGFP或RFP表达,经流式细胞仪分选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462-540)、RFP-IPS-1(C462-540)的细胞系,经puromycin筛选获得了稳定表达EGFP-IPS-1(C462-540)的细胞系;经10倍系列稀释的HCV感染后,弥散在细胞质中的点状EGFP、RFP会扩散到整个细胞或定位到细胞核中,在甲基纤维素的限制下形成明显的荧光噬斑点,通过计算荧光噬斑点数得到用Huh7.5-EGFP-IPS-1(462-540)-IRES-PURO、Huh7.5两种细胞检测的HCV滴度分别为(5.6±0.2)×10~5和(5.5±0.2)×10~5 PFU/mL,二者无显著差异。结论成功构建了含有绿色荧光或红色荧光报告系统的细胞系,建立了一种简单、快速检测HCV滴度的新方法。

关键词：干扰素β启动刺激因子-l 丙型肝炎病毒病毒滴度慢病毒荧光蛋白 Huh7.5细胞

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柯萨奇病毒A组16型免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析

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中国生物制品学杂志 2013年第10期26卷 1366-1370,1375页

作者：谢振锋普晶黄泓泰刘正玲董承红刘龙丁王丽春中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所病毒免疫室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus groups A type 16,CoxA16)4个毒株进行免疫原性及毒株间交叉保护能力的比较分析。方法提取CoxA16 G20、KM/M08、MY08和KM208病毒RNA,PCR扩增VP1基因,并进行测序;利用MEGA4.0软件中Bootstrap Test of phylogeny→Neighbor-joining方法对13株CoxA16基于VP1基因全序列构建CoxA16种系进化树并进行基因分型,使用DNAMAN软件对4个毒株VP1核苷酸序列的同源性及其蛋白质氨基酸序列差异位点进行分析。分别用纯化灭活后的4株CoxA16免疫BALB/c小鼠,于初次免疫和二次免疫后的第14、28天采血,分离血清,Western blot法检测G20毒株免疫的小鼠血清中抗体的的特异性;微量中和试验法检测血清中和抗体效价并进行交叉中和试验。结果 G20、MY08和KM208毒株属于B2b基因型,而KM/M08毒株属于B2a基因型;4个毒株间VP1基因核苷酸序列的同源性为91.8%～99.0%;MY08与其他3个毒株相比,在VP1的第102位(N→D)、241位(E→K)和248位(T→A)上存在3个差异氨基酸位点。G20毒株的抗血清可特异识别CoxA16的VP1和VP2蛋白,具有良好的免疫原性;各实验组二次免疫后第28天中和抗体效价均高于其他检测时期,其中MY08组中和抗体效价明显低于其他3组,差异有统计学意义(P﹤0.01);G20、KM/M08、和KM208毒株间的交叉保护能力优于MY08毒株对G20、KM/M08和KM208毒株的交叉保护能力,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4株CoxA16灭活后均能诱导机体产生相应的中和抗体和交叉保护能力,其中G20、KM/M08和KM208毒株在灭活后,显示了更好的免疫原性和毒株间交叉保护能力。

关键词：柯萨奇病毒免疫原性交叉保护序列分析

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树突状细胞疫苗的研究进展

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中国生物制品学杂志 2022年第10期35卷 1242-1248页

作者：李兴航(综述) 李琦涵(审校) 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类强大的抗原提呈细胞,也是适应性免疫应答的关键步骤,对于诱导T、B细胞介导的细胞免疫和体液免疫是必需的。由于其特殊的免疫学功能,在DC疫苗的研究中备受关注。目前已有一种基于DC的疫苗Sipuleucel-... 详细信息

树突状细胞(dendritic cell,DC)是一类强大的抗原提呈细胞,也是适应性免疫应答的关键步骤,对于诱导T、B细胞介导的细胞免疫和体液免疫是必需的。由于其特殊的免疫学功能,在DC疫苗的研究中备受关注。目前已有一种基于DC的疫苗Sipuleucel-T获批上市,还有多项DC疫苗正在临床试验阶段。本文对DC的生物学特征和功能、DC疫苗的类型以及DC疫苗面临的挑战和前景作一综述。

关键词：树突状细胞疫苗肿瘤预防治疗

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一株引起病毒性脑炎的埃可病毒30型分离株的VP1基因序列特征分析

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中国生物制品学杂志 2014年第2期27卷 163-167页

作者：陈俊英潘玥吉玛张云昆朱云朱艳菊邵聪文马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析2009年昆明市病毒性脑炎患儿粪便中分离获得的埃可病毒30型（Echovirus30,Echo30）分离株A363/KM/2009全长VP1基因序列特征。方法从疑似病毒性脑膜炎患儿粪便样本中分离Echo30,提取病毒RNA,采用RT-PCR法扩增病毒VP1基因,并进行... 详细信息

目的分析2009年昆明市病毒性脑炎患儿粪便中分离获得的埃可病毒30型（Echovirus30,Echo30）分离株A363/KM/2009全长VP1基因序列特征。方法从疑似病毒性脑膜炎患儿粪便样本中分离Echo30,提取病毒RNA,采用RT-PCR法扩增病毒VP1基因,并进行测序。采用NCBI BLAST软件对所测定的序列进行数据库比对;采用Geneious软件对Echo30分离株全长VP1基因的核苷酸及氨基酸同源性进行分析;采用Mega 5.1软件对A363/KM/2009分离株进行VP1基因分析,并与20个参考株的VP1序列进行比较。结果分离株为A363/KM/2009,其VP1基因的核苷酸长度与其他Echo30一致,均为867 bp;与其他Echo30分离株核苷酸同源性在76.9%-95.7%之间,氨基酸同源性在88.7%-99.7%之间;与中国株的核苷酸和氨基酸的同源性分别为84.5%-95.7%和96.9%-99.7%,其中与中国浙江分离株Echo30/zhejiang/10/4的同源性最高,为95.7%;与广西分离株GX10/15的同源性最低,为84.5%。氨基酸序列分析显示,与其他中国株包括脑脊液分离株相比,未见特异的突变位点;与国外分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为76.9%-86.3%和88.7%-97.3%;基因进化树分析显示,与其他中国株分属不同的两个分支,而与Echo30/zhejiang/10/4和Echo30/zhejiang/4/04（CSF）株亲缘关系较近。结论 A363/KM/2009分离株为肠道病毒Echo30,属于中国两个分支中的一支。

关键词：病毒性脑炎埃可病毒30型 VP1基因序列分析

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CXCL4基因敲除小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定

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中国生物制品学杂志 2016年第5期29卷 519-522,527页

作者：宋杰胡云光胡雅洁王艳翠李嘉祺刘龙丁中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的饲养、繁殖并鉴定CXC趋化因子配体4[chemokine(C-X-C motif)ligand 4,CXCL4]基因敲除小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定基础。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,剪取繁殖成功的子代小鼠耳朵,提取其基因组DNA,采用PCR法鉴... 详细信息

目的饲养、繁殖并鉴定CXC趋化因子配体4[chemokine(C-X-C motif)ligand 4,CXCL4]基因敲除小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定基础。方法将引进的杂合子小鼠进行饲养并繁殖,剪取繁殖成功的子代小鼠耳朵,提取其基因组DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型;比较野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的体重变化及结直肠的长度,通过HE染色观察野生型小鼠和CXCL4敲除的纯合子小鼠的结直肠形态结构;采用ELISA法验证CXCL4野生型和纯合子小鼠血清中CXCL4的表达。结果繁殖成功的子代小鼠有3种基因型:野生型、杂合子及纯合子;4、10周龄雌性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠(P<0.05),6、10周龄雄性纯合子小鼠体重明显重于同龄的野生型小鼠(P<0.05);6周龄雌性纯合子小鼠结直肠长度明显长于同周龄的野生型小鼠(P<0.05),但结直肠的形态结构无显著改变;纯合子小鼠血清中CXCL4的表达量明显低于WT小鼠(P<0.05)。结论成功获得了CXCL4基因敲除纯合子小鼠,为深入研究CXCL4的生物学功能奠定了基础。

关键词： CXCL4 基因敲除小鼠基因型

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信号素4D影响直肠癌裸鼠移植瘤的血管新生

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中国肿瘤临床 2014年第14期41卷 885-889页

作者：丁晓洁李多黄新伟付娟娟潘玥陈俊英孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子流行病学联合实验室昆明市650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的:本文利用慢病毒介导的RNA干扰,在结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型中研究信号素4D(Sema4D)对血管新生的影响。方法:包装制备对照慢病毒和Sema4D shRNA干扰慢病毒,感染直肠癌细胞HCT-116。Transwell迁移实验检测对照组和干扰组诱导内皮... 详细信息

目的:本文利用慢病毒介导的RNA干扰,在结直肠癌裸鼠皮下移植瘤模型中研究信号素4D(Sema4D)对血管新生的影响。方法:包装制备对照慢病毒和Sema4D shRNA干扰慢病毒,感染直肠癌细胞HCT-116。Transwell迁移实验检测对照组和干扰组诱导内皮细胞迁移的能力。对照组和干扰组分别接种于裸鼠双侧腋窝皮下。观察记录肿瘤生长,收获移植瘤做免疫组化和免疫荧光检测。结果:研究发现干扰Sema4D的表达能减弱癌细胞诱导内皮细胞迁移的能力,显著减缓移植瘤生长速度并降低瘤内血管密度。结论:由于Sema4D在诱导血管新生中的作用,干扰其信号通路将可能通过抑制血管新生来阻止肿瘤生长或转移,因此Sema4D有可能成为肿瘤抗血管新生疗法中有价值的治疗靶点。

关键词：结直肠癌信号素4D 血管新生移植瘤模型 RNA干扰

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HCV抗原ABS-ELISA检测方法的建立及初步评价

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现代预防医学 2012年第21期39卷 5617-5619页

作者：谢忠平龙润乡杨蓉李华白惠珠蒋蕊鞠易红昆董承红中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研究重点实验室

目的建立新的HCV抗原生物素-亲和素-酶联免疫检测方法(ABS-ELISA)。方法将生物素-亲和素系统与酶联免疫技术相结合,建立用于丙型肝炎病毒抗原检测的方法,分析检测方法的灵敏度、特异度、稳定性及精确度等主要技术指标,并对应用效果进行... 详细信息

目的建立新的HCV抗原生物素-亲和素-酶联免疫检测方法(ABS-ELISA)。方法将生物素-亲和素系统与酶联免疫技术相结合,建立用于丙型肝炎病毒抗原检测的方法,分析检测方法的灵敏度、特异度、稳定性及精确度等主要技术指标,并对应用效果进行评价。结果建立的检测方法,对40余种肠道病毒样品均无交叉反应,在第二代HCV-RNA国家标准品的10份阴性标准品中,未检出HCV-Ag阳性样品,在10份HCV-RNA阳性标准品中,检出6份HCV-Ag阳性的样品,表现出良好的特异性;检测试剂CV平均值为6.28%,精密性好;在90份HCV抗体阳性样品中检测出HCV-RNA样品67份(74.44%),检出HCV游离抗原阳性样品30份(33.33%)、HCV总抗原阳性样品68份(75.56%),HCV游离抗原与HCV-RNA两个指标检出率差异有统计学意义(χ2=22.443,P﹤0.01),但HCV总抗原与HCV-RNA检测结果之间差异无统计学意义(χ2=0.037,P﹥0.05);以HCV-RNA检测试剂为金标准,所建立的ABS-HCV抗原检测试剂总抗原检测结果的一致性、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为98.03%、80.60%、98.93%、79.41%、99.00%。结论新建立的HCV抗原ABS-ELISA检测方法特异性好,其灵敏度与荧光定量PCR相近。

关键词：丙型肝炎病毒抗原酶联免疫吸附生物素亲和素

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