检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2014年第2期27卷 177-179,184页

作者：戴素萍潘玥邵聪文吉玛朱艳菊张云昆朱云马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析2011年昆明市手足口病患儿粪便中分离获得的人鼻病毒（human rhinovirus,HRV）A22型分离株KM4/2011全长VP1基因的遗传特征。方法采用KMB17细胞对手足口病患儿粪便样本中筛查出的1株HRV样品进行病毒分离,应用RT-PCR法扩增病毒VP... 详细信息

目的分析2011年昆明市手足口病患儿粪便中分离获得的人鼻病毒（human rhinovirus,HRV）A22型分离株KM4/2011全长VP1基因的遗传特征。方法采用KMB17细胞对手足口病患儿粪便样本中筛查出的1株HRV样品进行病毒分离,应用RT-PCR法扩增病毒VP1基因,并进行测序,采用BLAST软件对所测定的节段序列进行数据库比对;采用Geneious basic 5.6.5软件进行核苷酸和氨基酸同源性比对;采用Mega 5.05软件将HRV A22及部分HRV A、B和C群全长VP1基因构建系统进化树。结果分离株为KM4/2011,经扩增、测序和序列拼接获得长度为867 bp的VP1基因;KM4/2011株与其他HRV分离株核苷酸和氨基酸的同源性分别为48.1%-91.0%和38.2%-97.6%,其中与HRV A22分离株的核苷酸和氨基酸同源性较高,分别为90.8%-91.0%和97.3%-97.6%;基因进化树分析显示,KM4/2011株与HRV A22基因型属于同一个进化分枝。结论 KM4/2011分离株为HRV A22型,存在地域差异。

关键词：鼻病毒A22型 VP1基因序列分析

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登革病毒感染C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞CPE的比较及病毒检测

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中国生物制品学杂志 2017年第4期30卷 362-365,371页

作者：杨佳佳姜黎明罗佳叶超文送娇孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的比较感染登革病毒(dengue virus,DV)的C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞的CPE情况,并进行病毒检测。方法将分离自云南西双版纳的Ⅲ型DV中国株D13053和广东省疾病预防控制中心惠赠的Ⅱ型中国株D10156,以5 MOI感染C6/36、Vero、BHK-21... 详细信息

目的比较感染登革病毒(dengue virus,DV)的C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞的CPE情况,并进行病毒检测。方法将分离自云南西双版纳的Ⅲ型DV中国株D13053和广东省疾病预防控制中心惠赠的Ⅱ型中国株D10156,以5 MOI感染C6/36、Vero、BHK-21和THP-1细胞,同时将Vero和C6/36细胞来源的DV,分别以5 MOI感染C6/36细胞,连续观察CPE至第10天,并利用DV通用引物,RT-PCR法鉴定细胞培养上清中的病毒。结果C6/36细胞对DV最敏感并有明显的病变,细胞几乎100%聚集、破碎并呈网格状;Vero、BHK-21细胞至第5天出现脱落、破碎和悬浮等病变,对DV有一定的敏感性;THP-1细胞至第10天未出现CPE。PCR核酸检测发现,感染DV的C6/36、THP-1、BHK和Vero细胞培养上清中可检测到DV,而Vero细胞来源DV感染的C6/36细胞未检测到DV。结论 DV对不同细胞系的感染能力和感染DV后CPE的表现形式存在较大差异。

关键词：登革病毒细胞病变 C6/36细胞 Vero细胞 BHK-21细胞 THP-1细胞

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重组人成纤维细胞生长因子21慢病毒质粒的构建及鉴定

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中国生物制品学杂志 2015年第7期28卷 677-681页

作者：陈瑜徐丽兰杨建波马开利和占龙马进李鸿钧吴正存鲁帅尧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的构建人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重组慢病毒质粒,并进行包装和鉴定。方法 PCR扩增人FGF21 ORF序列,经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,连接至慢病毒载体PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,构建重组慢病毒质粒... 详细信息

目的构建人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重组慢病毒质粒,并进行包装和鉴定。方法 PCR扩增人FGF21 ORF序列,经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,连接至慢病毒载体PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,构建重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21,经293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,并感染KMB17靶细胞。荧光显微镜观察293T细胞中报告基因EGFP的绿色荧光,判断重组慢病毒的感染效率;RT-PCR法检测KMB17靶细胞中h FGF21基因m RNA的转录;免疫荧光和Western blot法检测KMB17靶细胞中h FGF21蛋白的表达。结果重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21经双酶切及测序鉴定,证明构建正确,在包装细胞中获得较高的转染效率,重组慢病毒感染KMB17靶细胞72 h后,荧光显微镜下可见EGFP绿色荧光。感染组KMB17靶细胞中存在h FGF21基因m RNA的转录和蛋白的表达。结论成功构建了重组慢病毒质粒PLV-EF1aEGFP[2A]Puro-h FGF21,并于KMB17靶细胞中表达,为FGF21功能与特性的相关研究及基因工程药物的探索和研发奠定了基础。

关键词：人成纤维细胞生长因子21 慢病毒质粒 KMB17细胞

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CpG ODN佐剂序列IMB-AC5的体外免疫刺激活性分析

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中国生物制品学杂志 2017年第1期30卷 34-37页

作者：赵玉娇蔡路奎王晓丹席珏敏陈俊英潘玥邱丽娟姜黎明孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对CpG ODN候选佐剂IMB-AC5进行体外免疫刺激活性分析。方法以目前国外进入临床研究的两种CpG ODN佐剂序列(Coley 7909和Dynavax ISS1018)为对照,采用~3H-TDR法检测IMB-AC5刺激人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBLs)的增殖活性;流式细胞术分析CD19+B活化细胞表面CD69表达水平;ELISA法检测刺激后GEN细胞产生的IL-6和IFNα水平。结果 3种CpG ODN佐剂均能明显刺激人PBLs的增生,IMB-AC5刺激增生能力优于Dynavax ISS1018,略低于Coley 7909;IMB-AC5活化CD19+B细胞表面CD69表达水平与Coley7909相似,Dynavax ISS1018活化效果略低于前二者;3种CpG ODN佐剂体外活化树突状细胞水平差异较大,且呈明显的剂量依赖,IMB-AC5的最佳活化浓度范围为0.15~1.5μmol/L,Coley 7909的最佳活化浓度范围为<0.25μmol/L,活化效果均优于Dynavax ISS1018。结论 IMB-AC5可作为有效的疫苗候选佐剂,且不低于国外同类佐剂的体外免疫刺激活性。

关键词： CpG ODN 佐剂免疫刺激活性

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妊娠期接种百白破联合疫苗安全性的Meta分析

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中国生物制品学杂志 2021年第4期34卷 432-436,441页

作者：张学左伟伦中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析妊娠期接种百白破联合疫苗(tetanus toxoid,reduced diphtheria toxoid,and acellular pertussis combined vaccine,TdaP)的安全性。方法检索中国知网(China National Knowledge Infrastruture,CNKI)、中国生物医学文献数据库(China Biology Medicine Disc,CBM)、万方数据库(WanFang Database,WF)、PubMed、EMbase、Cochrane Library,时间为建库至2020年4月公开发表关于妊娠期接种TdaP疫苗安全性的随机对照试验(random contralled trial,RCT),同时辅以手工检索及追溯纳入文献的参考文献。应用RevMan 5.3统计分析软件进行Meta分析。结果共纳入6篇RCT文献。Meta分析显示,TdaP试验组与对照组相比,发生疼痛、肿胀、红斑、发热、头疼、乏力、肌肉酸疼、早产、严重不良反应、新生儿先天异常和畸形、新生儿严重不良反应的合并风险比(risk ratio,RR)分别为3.74(95%CI:1.43~9.76)、6.69(95%CI:3.92~12.34)、2.20(95%CI:1.60~3.02)、1.55(95%CI:0.45~5.30)、1.09(95%CI:0.84~1.41)、0.93(95%CI:0.52~1.67)、1.11(95%CI:0.20~6.61)、1.48(95%CI:0.74~2.98)、0.98(95%CI:0.71~1.34)、0.74(95%CI:0.37~1.50)、0.83(95%CI:0.51~1.35)。结论妊娠期接种TdaP疫苗后,局部疼痛、红斑、肿胀的发生率略增高,但不会增加其他不良反应的风险。

关键词：妊娠期百白破联合疫苗安全性 Meta分析随机对照试验

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miRNAs在甲基苯丙胺成瘾中的作用研究进展

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中国药理学通报 2017年第8期33卷 1056-1060页

作者：何永旺李娟周一卿赵祥月杨根梦张柠曾晓锋李桢昆明医科大学法医学院云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)成瘾是机体长期接触METH后,中枢神经系统在分子、细胞、神经环路功能和脑结构等层次发生的代偿性适应,该过程有多种途径和多种机制共同参与。miRNAs作为一种新型基因转录后调控分子和突触的调节因子,... 详细信息

甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)成瘾是机体长期接触METH后,中枢神经系统在分子、细胞、神经环路功能和脑结构等层次发生的代偿性适应,该过程有多种途径和多种机制共同参与。miRNAs作为一种新型基因转录后调控分子和突触的调节因子,大量存在于中枢神经系统,对中枢神经系统具有重要的调控作用。研究表明,miRNAs在METH成瘾中发挥着重要的调控作用。该文对miRNAs在METH成瘾机制中的表达特征及调控作用进行综述,并将与METH成瘾相关的miRNAs分子以及各miRNAs分子在不同组织器官中的差异性表达部位进行归纳整理,为进一步研究miRNAs分子在METH成瘾中的作用及发现新的药物作用靶点提供参考。

关键词：法医毒理学 microRNAs 甲基苯丙胺成瘾机制调控作用差异性表达研究进展

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不同灭活剂对柯萨奇病毒A组16型免疫原性的影响

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中国生物制品学杂志 2020年第11期33卷 1217-1222,1229页

作者：李华岳磊张也杨婷谢天宏何鑫高微捷卫星辰龙润乡杨蓉罗芳宇谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价甲醛及β-丙内酯对纯化柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)灭活效果及免疫原性的影响。方法将制备的CV-A16-168病毒液经浓缩、纯化后,用不同浓度甲醛(1∶400、1∶2000、1∶4000、1∶8000)及β-丙内酯(1∶1000、1∶2... 详细信息

目的评价甲醛及β-丙内酯对纯化柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)灭活效果及免疫原性的影响。方法将制备的CV-A16-168病毒液经浓缩、纯化后,用不同浓度甲醛(1∶400、1∶2000、1∶4000、1∶8000)及β-丙内酯(1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000)灭活,CV-A16抗原ELISA检测试剂盒检测抗原含量,确定最适灭活浓度。用1∶4000甲醛及1∶2000β-丙内酯灭活CV-A16-168,按抗原含量分别制备为640和320 U/mL,加入Al(OH)3佐剂,制备灭活CV-A16-168实验疫苗,免疫BALB/c小鼠2次,间隔28 d,于首次免疫后28、35 d采血分离血清,采用体外微量中和试验检测小鼠血清中和抗体效价,流式细胞术检测血清细胞因子水平。将甲醛灭活和β-丙内酯灭活实验疫苗分别腹腔注射5只BALB/c雌鼠和雄鼠2次,间隔28 d,初免后7 d,雌雄小鼠合笼,怀孕后取出单独饲养,待乳鼠出生48 h内,分别用CV-A16-G10株(原型株,A基因型)、CV-A16-154株(B基因型)及CVA16-G20株(B基因型)进行1000 LD50的病毒株颅内注射,观察21 d乳鼠的临床症状及生存情况。结果1∶4000甲醛37℃3 d及1∶2000β-丙内酯4℃24 h均可完全灭活CV-A16-168。小鼠经灭活CV-A16-168实验疫苗免疫后,血清中和抗体阳转率均达到100%,甲醛灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶7131.55和1∶5042.77,平均增长42.2和45.3倍;β-丙内酯灭活抗原含量640和320 U/mL组抗体GMT分别为1∶10085.54和1∶6208.38,平均增长42.2和48.5倍;不同灭活剂处理的相同抗原含量间抗体GMT差异无统计学意义(P均>0.05),但组内二次免疫间的抗体GMT差异有统计学意义(P<0.001);甲醛和β-丙内酯灭活实验疫苗免疫小鼠后均诱导产生IFNγ,抗原含量640与320 U/mL组比较,有显著升高(P<0.001)。乳鼠经CV-A16不同基因型毒株攻毒,观察21 d后,全部存活,母传抗体可对不同基因型毒株颅内注射攻毒的乳鼠产生100%的保护。结论1∶4000甲醛及1∶2000β-丙内酯均可完全灭活CV-A16,灭活后的免疫原性无显著差异,为CV-A16灭活疫苗的开发及研究奠定了基础。

关键词：柯萨奇病毒A组16型甲醛 β-丙内酯灭活免疫原性

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不同肠道病毒71型病毒分离株3C^(pro)序列特征与病毒增殖特性分析

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中国生物制品学杂志 2014年第10期27卷 1248-1252页

作者：施海晶李海巍王晶晶陈俊英潘玥孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的探讨不同肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株3Cpro中可能存在的部分位点差异与病毒毒力之间的关系。方法将采集自云南昆明的的18名手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)患者的12份咽拭子和6份粪便样本接种Vero细胞,根... 详细信息

目的探讨不同肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)分离株3Cpro中可能存在的部分位点差异与病毒毒力之间的关系。方法将采集自云南昆明的的18名手足口病(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)患者的12份咽拭子和6份粪便样本接种Vero细胞,根据细胞病变(CPE)情况收获病毒,二次传代后,收获病毒,提取病毒RNA,以其为模板,PCR扩增VP1和3Cpro,应用Mega 5.1软件对测序结果进行序列比对,Neighbor-Joining法构建进化树,并结合病毒增殖的动力学试验分析不同EV71分离株的增殖特性和特异性位点的相关性。结果共分离出10株能够在Vero细胞中增殖并引起细胞出现典型病变的EV71样本,均属于C4亚型。3Cpro的序列分析显示,3株EV71住院病例和1株门诊病历样本与其他6株门诊病例样本相比,核苷酸序列和氨基酸序列均存在一定的差异,且氨基酸差异主要集中在第56位(V-I)和第158位(V-I)氨基酸位点,有较短的增殖时间和较高的增殖高峰,具有不同3Cpro遗传特征的病毒间增殖速率存在差异。结论不同的EV71毒株的3Cpro序列第56位(V-I)和第158位(V-I)氨基酸位点与病毒病原学特征具有一定的相关性。

关键词：肠道病毒属 3C蛋白酶序列感染增殖

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腺病毒载体的研究进展及其在轮状病毒疫苗研究中的应用

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中国生物制品学杂志 2012年第3期25卷 378-382页

作者：郜岩孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医学院昆明650031

腺病毒载体是一种非常有效的转基因载体,具有高效率、高滴度、低致病性及不整合入宿主细胞染色体等优点,是目前非常具有应用前景的转基因载体。本文就重组腺病毒载体的研究进展、研究中的问题和解决方法及其在轮状病毒疫苗研究中的应用... 详细信息

腺病毒载体是一种非常有效的转基因载体,具有高效率、高滴度、低致病性及不整合入宿主细胞染色体等优点,是目前非常具有应用前景的转基因载体。本文就重组腺病毒载体的研究进展、研究中的问题和解决方法及其在轮状病毒疫苗研究中的应用作一综述。

关键词：腺病毒载体轮状病毒疫苗

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2009年云南省昆明地区柯萨奇病毒B5的遗传特性分析

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中国生物制品学杂志 2013年第6期26卷 766-770页

作者：邵聪文潘玥邓新强叶君马忠飞孙强明马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的对2009年中国云南省昆明地区柯萨奇病毒B5(Coxsackievirus group B5,CVB5)的部分VP1基因序列进行分析,以了解CVB5的遗传特性。方法收集2009年中国云南省昆明地区临床诊断为无菌性脑炎患儿的200份粪便标本,设计针对CVB的通用引物,利... 详细信息

目的对2009年中国云南省昆明地区柯萨奇病毒B5(Coxsackievirus group B5,CVB5)的部分VP1基因序列进行分析,以了解CVB5的遗传特性。方法收集2009年中国云南省昆明地区临床诊断为无菌性脑炎患儿的200份粪便标本,设计针对CVB的通用引物,利用半巢式RT-PCR扩增部分VP1基因。PCR产物直接测序后,采用Omiga和Mega 5.05等生物学软件进行核苷酸、氨基酸序列及系统进化分析。结果共分离出7株CVB5,其部分VP1基因之间的核苷酸和氨基酸序列同源性均较高,分别为92.7%～98.5%和93.6%～100.0%;与中国其他不同地区参考株的核苷酸序列同源性为80.1%～99.1%,其中与中国山东株98388-SD-CHN-1998同源性较低;与中国其他不同地区参考株的氨基酸序列同源性为84.4%～100.0%,其中与中国河南株CoxB5-Henan-2010和中国山东株98388-SD-CHN-1998之间同源性最低;与其他不同国家参考株比较,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别在77.5%～89.1%和92.1%～96.3%之间;与原型株Faulkner的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为79.6%～80.9%和92.1%～95.4%。基因系统进化分析显示,分离的7株CVB5属于相对独立的1个分枝,中国流行株除98388-SD-CHN-1998外,构成1个分枝。结论 2009年中国云南省昆明地区CVB5流行株属于相同基因型。

关键词：柯萨奇病毒B5 VP1基因序列分析

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