检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2016年第10期29卷 1013-1016页

作者：谢忠平李华杨水芝谢天宏杨婷刘正玲岳磊宋霞中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价CA16 K168/8疫苗候选株免疫血清对不同CA16毒株的交叉中和能力及对致乳鼠麻痹CA16临床分离株的体内中和保护能力。方法将CA16 K168/8疫苗候选株病毒纯化液辅以弗氏佐剂经背部及侧腹部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,制备高效价... 详细信息

目的评价CA16 K168/8疫苗候选株免疫血清对不同CA16毒株的交叉中和能力及对致乳鼠麻痹CA16临床分离株的体内中和保护能力。方法将CA16 K168/8疫苗候选株病毒纯化液辅以弗氏佐剂经背部及侧腹部皮下多点注射免疫新西兰大白兔,制备高效价免疫血清。采用微量细胞病变法检测中和抗体效价;用中和抗体效价终浓度为32 U的特异性免疫血清对18株不同CA16临床分离毒株及15株EV71毒株进行交叉中和指数检测;选取中和抗体效价为16、32、64、128、256 U的特异性免疫血清对可致乳鼠产生明显麻痹作用的CA16 FY-18株进行体内中和保护水平检测。结果获得的兔抗CA16 K168/8血清对14株CA16毒株的中和效价为1∶1 024~1∶6 144,GMT值为1∶3 153;可于体外完全中和18株不同CA16毒株,中和指数为100~5 623.4,平均值为794.1,而对15株EV71临床分离株中和指数仅为0.32~5.62,平均值为2.2;体内中和保护水平随抗体效价升高而增加,呈量-效关系,当中和抗体效价达128 U时,可完全保护乳鼠不发生临床麻痹反应。结论 CA16 K168/8疫苗候选株特异性免疫血清体内、外试验结果表明其具有良好的免疫保护性。

关键词：柯萨奇病毒A组16型疫苗候选株免疫血清交叉保护

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埃博拉病毒GP和VP40蛋白在哺乳动物细胞中的共表达及病毒样颗粒装配

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中国生物工程杂志 2016年第12期36卷 66-71页

作者：孙鹏艳黎奎刘存宝姚宇峰褚晓杰白红妹杨旭黄惟巍孙文佳马雁冰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的:制备基因重组埃博拉病毒样颗粒,为疫苗研究及埃博拉病毒特异抗原、抗体检测提供基础。方法:根据埃博拉病毒扎伊尔株的GP和VP40蛋白氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成GP和VP40基因片段并分... 详细信息

目的:制备基因重组埃博拉病毒样颗粒,为疫苗研究及埃博拉病毒特异抗原、抗体检测提供基础。方法:根据埃博拉病毒扎伊尔株的GP和VP40蛋白氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成GP和VP40基因片段并分别构建于表达质粒pcDNA3.1或同时构建到具有双表达单元的质粒pBudCE4.1;重组质粒经lipofectamine2000转染293FT细胞;以Western blot检测重组蛋白GP和VP40的表达;通过电镜观察病毒样颗粒。结果:构建的重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功;Western blot结果显示,共转染分别表达GP和VP40的两个质粒或转染共表达两个蛋白的质粒都发现GP特异反应条带产生,且大小与预期相符,此外,转染共表达质粒产生的GP蛋白表达明显强于两个质粒共转染,并同时可检测到VP40的表达;电镜观察到典型的丝状的埃博拉病毒样颗粒。结论:在293FT细胞中基因优化的埃博拉病毒GP和VP40可有效表达并装配为病毒样颗粒,为进一步研究奠定了基础。

关键词：埃博拉病毒病毒样颗粒 293FT细胞表达

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恒河猴大脑皮质星形胶质细胞的原代培养及鉴定

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中国细胞生物学学报 2017年第1期39卷 58-64页

作者：王建斌冯敏廖芸王丽春张莹范胜涛李琦涵中国医学科学院医学生物学研究所&北京协和医学院云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国医学科学院病原生物学研究所&北京协和医学院北京100730

为建立有效纯度高的恒河猴星形胶质细胞体外培养体系,无菌条件下取6月龄恒河猴婴猴的大脑皮质,除去白质,充分剪碎后机械吹打制成细胞悬液接种培养,待原代培养的细胞长满培养皿后,通过恒温摇床振荡和传代差速贴壁除去寡突胶质细胞、成纤... 详细信息

为建立有效纯度高的恒河猴星形胶质细胞体外培养体系,无菌条件下取6月龄恒河猴婴猴的大脑皮质,除去白质,充分剪碎后机械吹打制成细胞悬液接种培养,待原代培养的细胞长满培养皿后,通过恒温摇床振荡和传代差速贴壁除去寡突胶质细胞、成纤维细胞等,得到纯化后的星形胶质细胞,并用GFAP-FITC(glial fibrillary acidic protein-fluorescein isothiocyanate)免疫荧光法对所获细胞进行鉴定。分离培养的细胞具备典型的星形胶质细胞形态,并表达星形胶质细胞特异性抗原GFAP(glial fibrillary acidic protein),纯化后获得了高纯度的恒河猴星形胶质细胞。采用该培养方法成功建立原代恒河猴星形胶质细胞培养体系,为体外研究嗜神经性病毒、神经系统疾病及其相关中枢神经病理机制等提供了可靠的细胞模型。

关键词：星形胶质细胞恒河猴原代培养 GFAP

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肠道病毒71型灭活疫苗灭活验证超速离心条件的优化

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中国生物制品学杂志 2018年第2期31卷 192-194,199页

作者：赵恒袁梅严皎王云飞杨佳蒋国润史磊冯凯杨晓蕾洪超中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所质量检定室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71... 详细信息

目的优化肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)灭活疫苗灭活验证超速离心条件,为EV71灭活疫苗灭活验证样品的处理提供实验依据。方法在不同转速(45 000、40 000、35 000、30 000、25 000 r/min)和时间(120、90、60、30 min)条件下对EV71收获液进行超速离心,检测离心前和离心后病毒液的滴度,计算回收率,比较不同条件下离心前后病毒回收效果。结果在转速相同或离心时间相同的条件下,EV71的沉淀效果与离心时间或离心转速呈正相关(R^2从0.77和0.88分别增大到0.99),其中,当离心转速超过40 000 r/min时,不同离心时间下病毒的回收率均在90%以上,当离心时间为120 min,离心转速为45 000 r/min时,病毒的沉淀效果最好,回收率最高,达98%。综合离心时间因素,选择离心条件为45 000 r/min-60 min较适宜(回收率为97%),与45 000 r/min-120 min相比,差异无统计学意义(P>0.05);如将时间减为45 000 r/min-30 min,与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EV71的沉淀效果与离心转速和离心时间呈正相关,即随着离心转速增大和离心时间的延长,病毒的沉淀效果越好、回收率越高。

关键词：肠道病毒71型超速离心回收率

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低剂量IL⁃2注射对EV⁃A71乳鼠感染模型的影响

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病毒学报 2022年第4期38卷 866-873页

作者：姬桐李慧张志晓朱文兵杨燕吴忠香董少忠宋杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室昆明650118

肠道病毒A组71型(Enterovirus 71,EV⁃A71)是引起婴幼儿手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要病原体,研究表明EV⁃A71感染诱发的中枢神经系统(Central nervous system,CNS)并发症与EV⁃A71患儿机体的免疫失调有着密切的关系。白细胞介素⁃2(interleukin⁃2,IL⁃2)是一种能激活T细胞,并维持T细胞分化和增殖的T细胞生长因子,同时也参与炎症或自身免疫性反应。本研究旨在研究低剂量IL⁃2(500 IU/只)对EV⁃A71感染乳鼠模型的影响。研究结果发现,注射低剂量IL⁃2能显著改善EV⁃A71感染BALB/c乳鼠的存活率和疾病指数,能明显减轻EV⁃A71感染BALB/c乳鼠的脑部和肺部的病理损伤,能显著降低EV⁃A71感染Balb/c乳鼠脑部的病毒载量,并且能显著下调IL⁃1β、IL⁃6、IL⁃18和TNF⁃α的表达。本研究的结果初步提示了低剂量IL⁃2用于治疗HFMD的有效性,为IL⁃2用于EV⁃A71感染导致的HMFD患者的临床治疗提供了理论依据。

关键词： EV⁃A71 手足口病低剂量IL⁃2

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Sabin IPV基础免疫后不同时间的中和抗体水平研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2012年第3期26卷 196-198页

作者：刘婧马艳孙明波伍胤杰周武刚谢炳锋张名唐聪杨卉娟杨晓蕾中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大疾病传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的探讨不同剂量配比的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（SabinIPV）基础免疫后中和抗体的持续时间及加强免疫前后中和抗体水平的变化。方法用不同配比的Ⅰ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备两批SabinIPV，并使用GSK制备的DTaP—WIPV作为阳性对... 详细信息

目的探讨不同剂量配比的Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（SabinIPV）基础免疫后中和抗体的持续时间及加强免疫前后中和抗体水平的变化。方法用不同配比的Ⅰ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒原液制备两批SabinIPV，并使用GSK制备的DTaP—WIPV作为阳性对照组，对18只Wistar大鼠进行3针基础免疫后，每间隔3个月采血直到加强免疫前，并同时于加强免疫后1个月采血，并对血清中抗脊髓灰质炎病毒3个型别的中和抗体效价进行初步研究。结果大鼠采用0、1、2月免疫程序进行3针免疫后，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型脊髓灰质炎病毒中和抗体的几何平均滴度随着时间的变化均有所下降，但绝大部分组大鼠的血清中和抗体阳转率仍维持在100％，在加强免疫后，各组的三个型别的中和抗体水平在短期内明显升高。结论SabinIPV有良好的免疫持久性，并在加强免疫后，可产生更高水平的中和抗体。

关键词：脊髓灰质炎病毒疫苗灭活抗体病毒

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灭活轮状病毒与灭活肠道病毒71型联合疫苗的免疫效果

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 292-295页

作者：叶静米鍇吴晋元郭莉莉李鸿钧孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子生物学研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的评价灭活轮状病毒（rotavirus，RV）与灭活肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠，同时设单价疫苗组，均经小鼠腿部肌肉... 详细信息

目的评价灭活轮状病毒（rotavirus，RV）与灭活肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）联合疫苗的免疫效果及两种抗原间的相互作用。方法将灭活RV与EV71按不同抗原含量配比制成联合疫苗免疫ICR小鼠，同时设单价疫苗组，均经小鼠腿部肌肉注射，隔2周免疫1次，共2次，分别于每次免疫后2周，经小鼠尾静脉采血，分离血清，经56。c灭活30rain后，采用血清中和试验检测小鼠血清中抗RV和抗EV71中和抗体效价。结果初次免疫后14d，各组小鼠血清中RV特异性中和抗体阳转率为50％-67％，中和抗体效价为2．2-2．8，加强免疫后14d，抗体阳转率达100％，中和抗体效价为28．5-35．9。初次免疫后14d，各组小鼠血清中抗EV71中和抗体阳转率为83％-100％，中和抗体效价为4．0-7．1，加强免疫后14d，中和抗体阳转率达100％，中和抗体效价为25．4-71．8；联合疫苗组与单价疫苗组间抗RV及抗EV71中和抗体效价差异无统计学意义（P〉0．05）；Rv和EV71抗原量按160／160EU配比时，可诱导出最高的抗RV抗体及抗EV71抗体应答。结论Rv与EV71联合疫苗可诱导小鼠产生针对两种病毒的体液免疫应答，抗体应答水平与疫苗抗原配比剂量相关，未发现两种抗原间有协同或拈抗作用。

关键词：轮状病毒肠道病毒71型灭活疫苗联合疫苗

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利用翻译延伸因子1-α启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒16L1蛋白

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中国生物制品学杂志 2014年第4期27卷 448-452,457页

作者：金晓媚姚宇峰黄惟巍杨旭孙文佳刘存宝龙琼马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118

目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换... 详细信息

目的利用翻译延伸因子1-α(translation elongation factor 1-α,TEF1-α)启动子在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16 L1蛋白。方法从毕赤酵母GS115中扩增组成型TEF1-α启动子(PTEF1-α)基因,通过基因重组替换商业化表达质粒pPink-HC和pPink-LC的启动子PAOX1;在PTEF1-α下游分别克隆绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因和HPV 16 L1基因,构建重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1;将重组质粒电转化感受态毕赤酵母PichiaPink strain 1,培养不同时间后,荧光显微镜下观察GFP的表达;分别在YPD、YPG、YPM、YPSor培养基中培养pTEF-16 L1转化菌,检测菌体在不同培养基中的增殖情况;Western blot检测HPV 16 L1蛋白的表达水平。结果重组质粒pTEF-GFP和pTEF-16 L1经双酶切鉴定和序列分析表明构建正确;荧光显微镜检测显示,在不同培养时间PTEF1-α指导了GFP的成功表达,且表达量随培养时间的延长而降低;重组毕赤酵母在YPD和YPG培养基中生长迅速;4种培养基中均有HPV 16 L1蛋白的特异性表达,且在YPG和YPSor培养基中获得了HPV 16 L1蛋白较持续的表达。结论成功实现了组成型启动子PTEF1-α控制的HPV16 L1蛋白的表达,为HPV疫苗的低成本及方便生产提供了一个可供选择的有效方案。

关键词：翻译延伸因子1-α 启动子毕赤酵母绿色荧光蛋白人乳头瘤病毒16 L1蛋白

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人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1在大肠埃希菌中的表达

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中国生物制品学杂志 2015年第3期28卷 245-250,256页

作者：杨旭夏烨李亚东金晓媚龙琼孙文佳黄惟巍刘存宝姚宇峰马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所分子免疫研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心云南昆明650118

目的探讨在大肠埃希菌中不同因素对高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白表达的影响,为研发针对多型别HPV的低价、广谱疫苗奠定基础。方法通过采用非融合、不同融合蛋白形式,不同基因型HPV L1序列,以及同一基因型但不同... 详细信息

目的探讨在大肠埃希菌中不同因素对高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)L1蛋白表达的影响,为研发针对多型别HPV的低价、广谱疫苗奠定基础。方法通过采用非融合、不同融合蛋白形式,不同基因型HPV L1序列,以及同一基因型但不同序列特征等构建HPV L1非融合及融合表达重组质粒及HPV L1谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferase,GST)融合表达质粒,转化不同宿主菌(大肠埃希菌DH5α、BL21),在不同的温度下(37、20℃)进行IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE分析融合蛋白的表达及其可溶性,Western blot鉴定表达的融合蛋白。结果 HPV 16 L1蛋白在GST融合蛋白形式下获得了高效表达,而非融合表达或硫氧还蛋白融合表达未见明显目的条带;不同的宿主菌未对GST融合蛋白表达水平产生明显影响;在37℃培养条件下,表达的GST融合蛋白以包涵体形式存在,而在20℃培养条件下,部分表达的蛋白以可溶性形式存在;HPV 16 L1基因不同序列获得了类似的表达水平;经酵母密码子优化的HPV 18 L1与HPV 58 L1基因均能以GST融合表达形式获得与HPV 16 L1相似的高效表达。结论在大肠埃希菌中以GST融合形式可获得多基因型别HPV L1蛋白的高效可溶性表达,为病毒样颗粒体外折叠制备奠定了基础,也为其他外源基因在大肠埃希菌中的高效表达提供了参考。

关键词：乳头瘤病毒衣壳蛋白大肠埃希菌表达

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树鼩HGF全长编码序列的克隆及分子特征分析

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中国比较医学杂志 2016年第5期26卷 10-18页

作者：李振宇陈玲霞尹博文苗雨润宋庆凯代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的获取树鼩肝细胞生长因子的全长编码序列并进行分子特征分析。方法以树鼩肝组织总RNA为材料,通过RT-PCR扩增和序列拼接获得树鼩肝细胞生长因子全长编码序列,进而通过DNAMAN,Pymol等生物信息学软件对其序列和分子特征进行分析。结果树... 详细信息

目的获取树鼩肝细胞生长因子的全长编码序列并进行分子特征分析。方法以树鼩肝组织总RNA为材料,通过RT-PCR扩增和序列拼接获得树鼩肝细胞生长因子全长编码序列,进而通过DNAMAN,Pymol等生物信息学软件对其序列和分子特征进行分析。结果树鼩HGF分子结构在进化中相对保守,树鼩HGF整体结构与人相似。但树鼩HGFαNK1区域相比人HGF多出一个α螺旋,并且有两个更长的β折叠片,另外,树鼩在该区域存在一个很强的表面正电荷区域。这些差异可能会对树鼩HGF与其受体的作用方式产生影响。结论本实验为明确树鼩HGF与其受体的作用方式和树鼩HGF的合成与制备奠定了基础。

关键词：树鼩肝细胞生长因子分子克隆结构预测

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