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白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38MAPK 的影响

中华皮肤科杂志 2015年第8期48卷 535-538页

作者：段志敏杜蕾蕾曾荣沈永年胡素泉刘维达陈青李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤性病分子生物学重点实验室南京210042 江苏省血液中心

目的：探讨白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞系）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和细胞内信号分子 p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法实时荧光定量 PCR 分析105、106 CFU/ml 灭活白念珠菌及阳性刺激物脂多... 详细信息

目的：探讨白念珠菌对人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞系）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和细胞内信号分子 p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法实时荧光定量 PCR 分析105、106 CFU/ml 灭活白念珠菌及阳性刺激物脂多糖刺激 THP-1细胞1、3、6 h 后 TNF-α mRNA 表达水平变化。40μg/L 地塞米松预先与 THP-1细胞共培养30 min 后，再用106 CFU/ml 白念珠菌、脂多糖刺激6 h 后检测TNF-α mRNA 表达水平。酶联免疫吸附法检测白念珠菌刺激 THP-1细胞24 h 后 TNF-α分泌量。免疫印迹法分析白念珠菌体外作用 THP-1细胞30 min、1 h 后 p38MAPK 和磷酸化 p38MAPK 的水平。结果105 CFU/ml 白念珠菌、106 CFU/ml 白念珠菌、脂多糖刺激 THP-1细胞组以及空白对照组 TNF-α mRNA 表达水平差异有统计学意义（F =110.98，P 〈0.001）；白念珠菌刺激1、3、6 h 之间差异也有统计学意义（F =701.680，P 〈0.001），随培养时间延长，THP-1细胞 TNF-α mRNA 水平增高，呈时间依赖效应。106 CFU/ml 白念珠菌刺激 THP-1细胞后24 h，TNF-α蛋白水平（6385.70±533.99 ng/L）较空白对照组（147.10±0.53 ng/L）明显升高，差异有统计学意义（P 〈0.01）。106 CFU/ml 白念珠菌作用于 THP-1细胞30、60 min 后磷酸化 p38MAPK 蛋白水平也明显升高。40μg/L地塞米松预先与 THP-1细胞共培养30 min 后，再以106 CFU/ml 白念珠菌刺激6 h 后 TNF-α mRNA 表达水平（3.77±0.62）较未用地塞米松组（208.50±10.50）明显降低，地塞米松可阻断白念珠菌上调 TNF-α mRNA 水平。结论人 THP-1细胞体外与白念珠菌作用后激活信号分子 p38MAPK 并分泌 TNF-α，参与抗念珠菌感染固有免疫反应。

关键词：白色念珠菌白血病,单核细胞,急性肿瘤坏死因子 α p38 丝裂原活化蛋白激酶类细胞系,肿瘤

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外周血单一核细胞的体外活化对成纤维细胞增殖和基质金属蛋白酶产生的影响

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中华皮肤科杂志 2015年第11期48卷 801-806页

作者：康玉英孙彩虹鞠梅陈崑顾恒山西医学科学院山西大医院皮肤性病科太原030032 江苏大学附属人民医院皮肤科中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病号胜病分子生物学重点实验室

目的研究不同活化剂对外周血单一核细胞（PBMC）产生基质金属蛋白酶（MMP）的影响以及PBMC活化后培养上清液［称为条件培养基（CM）］对培养的皮肤成纤维细胞增殖活性、产生MMP的影响。方法抽取、分离健康人PBMC，分为植物血凝素（PH... 详细信息

目的研究不同活化剂对外周血单一核细胞（PBMC）产生基质金属蛋白酶（MMP）的影响以及PBMC活化后培养上清液［称为条件培养基（CM）］对培养的皮肤成纤维细胞增殖活性、产生MMP的影响。方法抽取、分离健康人PBMC，分为植物血凝素（PHA）组、双抗体组、对照组，分别用活化剂PHA、CD3和CD28双抗体、含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基处理细胞，72 h后收集三组CM，并将获得的CM按不同比例稀释后作用于培养的成纤维细胞，以不加CM作为对照组，培养48或24 h。采用噻唑蓝法检测细胞增殖能力，半定量反转录（RT）-PCR法检测细胞MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA表达水平，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液中白介素（IL）-6、MMP-1、MMP-3、MMP-9蛋白含量。采用单因素方差分析、Tukey HSD检验、Games-Howell检验等方法进行统计学分析。结果与对照组相比，PHA组PBMC增殖活性及分泌IL-6、MMP-3水平明显增加，差异均有统计学意义（P 〈 0.05）；3组活化后上清液中均未检测到MMP-1、MMP-9蛋白。对照组、双抗体组、PHA组PBMC中MMP-1 mRNA相对表达水平（以靶基因与β肌动蛋白mRNA之比表示）0.083 ± 0.016、0.188 ± 0.030、0.714 ± 0.104，差异有统计学意义（P 〈 0.05），MMP-3、MMP-9 mRNA均无表达。不同稀释度CM刺激成纤维细胞后上清液中可检测到MMP-3蛋白，MMP-3含量以原液CM中最高，1/10 CM刺激时最低；在相同的稀释度刺激时，上清液中MMP-3含量以PHA刺激组最高，对照刺激组最低；不同CM刺激成纤维细胞后上清液中均未检测到MMP-1、MMP-9蛋白。不同处理组成纤维细胞的增殖能力及MMP-1、MMP-3 mRNA表达差异均无统计学意义（P 〉 0.05），MMP-9 mRNA无表达。结论 PBMC活化后可表达MMP-1 mRNA并分泌MMP-3蛋白，PBMC活化后上清液不能刺激成纤维细胞MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA及蛋白表达，提示炎症细胞可能通过自身产生MMP而发挥作用。

关键词：白细胞单核成纤维细胞基质金属蛋白酶类细胞增殖植物血凝素类

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Tim-3对B16F10细胞共培养的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

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中国麻风皮肤病杂志 2015年第9期31卷 534-538页

作者：吕雅琳周晓伟胡彬曾学思刘毅孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病医院南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

目的:明确T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)对B16F10细胞共培养的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法:构建Tim-3真核表达载体后,CCK-8法检测Tim-3融合蛋白对B16F10共培养的小鼠脾淋巴细胞的增殖。结果:Tim-3融合蛋白转染组淋巴细胞增殖活力... 详细信息

目的:明确T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)对B16F10细胞共培养的小鼠脾淋巴细胞增殖的影响。方法:构建Tim-3真核表达载体后,CCK-8法检测Tim-3融合蛋白对B16F10共培养的小鼠脾淋巴细胞的增殖。结果:Tim-3融合蛋白转染组淋巴细胞增殖活力低于未转染组和转染空载体组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Tim-3融合蛋白抑制B16F10共培养的小鼠脾淋巴细胞的增殖。

关键词： T细胞免疫球蛋白黏蛋白真核表达小鼠

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酪氨酸激酶抑制剂在恶性黑素瘤分子靶向治疗中的进展

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国际皮肤性病学杂志 2015年第3期41卷 174-177页

作者：周璐陈浩孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

恶性黑素瘤是一种异质性肿瘤,不同发病部位或不同组织学类型,可能存在不同的基因和信号转导途径的异常.因此,针对异常基因、信号通路的靶向治疗药物的发明和临床应用为晚期黑素瘤患者的个性化治疗提供了新的选择.中国人最常见的黑素瘤... 详细信息

恶性黑素瘤是一种异质性肿瘤,不同发病部位或不同组织学类型,可能存在不同的基因和信号转导途径的异常.因此,针对异常基因、信号通路的靶向治疗药物的发明和临床应用为晚期黑素瘤患者的个性化治疗提供了新的选择.中国人最常见的黑素瘤是肢端型,该型黑素瘤中最常见的异常基因是c-kit基因.针对c-kit基因的靶向药物酪氨酸激酶抑制剂在治疗晚期黑素瘤方面已有较多体外研究及临床观察.主要介绍酪氨酸激酶抑制剂中的受体酪氨酸激酶抑制剂、多靶点酪氨酸激酶抑制剂和非受体酪氨酸激酶抑制剂3类药物的药理作用机制及国内外治疗黑素瘤的研究进展,以及酪氨酸激酶抑制剂的常见不良反应.

关键词：黑色素瘤酪氨酸磷酸化抑制剂分子靶向治疗

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增殖性红斑的治疗现状及进展

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国际皮肤性病学杂志 2015年第5期41卷 294-297页

作者：冯广东王焱方方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

增殖性红斑是累及龟头及包皮黏膜的Bowen病,为一种表皮内原位癌.本病主要发生于中年以上无包皮环切史的男性患者,进展为鳞状细胞癌的可能性约33％.有效治疗方法包括局部手术切除、Mohs手术、阴茎部分或全部切除术、局部外用5％氟脲嘧啶... 详细信息

增殖性红斑是累及龟头及包皮黏膜的Bowen病,为一种表皮内原位癌.本病主要发生于中年以上无包皮环切史的男性患者,进展为鳞状细胞癌的可能性约33％.有效治疗方法包括局部手术切除、Mohs手术、阴茎部分或全部切除术、局部外用5％氟脲嘧啶软膏或5％咪喹莫特乳膏、冷冻、放疗、激光、光动力治疗等.传统外用药物治疗,操作简单,患者容易接受,但复发率高.近年来,光动力及激光疗法发展迅速,逐渐成为该病的一线治疗方案.但手术治疗仍为金标准,且复发率最低,龟头包皮病变切除后复发率低于2％,但同时会引起阴茎的外观及功能障碍.不同治疗方案的选择取决于患者的免疫状况、病变部位以及患者的意愿.

关键词：增殖性红斑肿瘤鳞状细胞外科手术外用药临床方案

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生殖器丘疹样棘层松解性皮病ATP2C1基因突变检测

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中国麻风皮肤病杂志 2015年第9期31卷 515-518页

作者：肖学敏张国毅王宝玺贾苇雪毛秋霞李诚让中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

目的:检测1例散发性生殖器丘疹样棘层松解性皮病患者ATP2C1基因突变。方法:提取患者、其父母及100名无亲缘关系健康对照的外周血以及患者皮损组织DNA,PCR扩增ATP2C1基因28个外显子和侧翼序列,并进行测序。结果:检测到患者血样及皮损组织... 详细信息

目的:检测1例散发性生殖器丘疹样棘层松解性皮病患者ATP2C1基因突变。方法:提取患者、其父母及100名无亲缘关系健康对照的外周血以及患者皮损组织DNA,PCR扩增ATP2C1基因28个外显子和侧翼序列,并进行测序。结果:检测到患者血样及皮损组织DNA均存在ATP2C1基因第1570位碱基发生突变T→C,父母及对照未发现突变。结论:ATP2C1基因17号外显子的突变可能是本患者的发病原因。生殖器丘疹样棘层松解性皮病可能与Hailey病组成一个连续病谱。

关键词： ATP2C1基因突变检测性生殖器松解性皮病丘疹皮损组织 PCR扩增

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静脉注射免疫球蛋白治疗某些皮肤病的进展

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国际皮肤性病学杂志 2015年第2期41卷 89-92页

作者：宋昊徐秀莲中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

最初静脉注射免疫球蛋白批准用于原发性免疫缺陷病的抗体替代治疗，随着对其作用机制的进一步认识，静脉注射免疫球蛋白用于治疗大疱性皮肤病、结缔组织病、重症药疹、川崎病等疾病，证实疗效好，提高了患者生存率；其相对安全性高，耐... 详细信息

最初静脉注射免疫球蛋白批准用于原发性免疫缺陷病的抗体替代治疗，随着对其作用机制的进一步认识，静脉注射免疫球蛋白用于治疗大疱性皮肤病、结缔组织病、重症药疹、川崎病等疾病，证实疗效好，提高了患者生存率；其相对安全性高，耐受性好，但也有一些不良反应。目前最大的缺陷是缺乏大样本的随机对照试验。

关键词：皮肤疾病免疫球蛋白类注射治疗应用

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皮肤恶性黑素瘤肿瘤相关巨噬细胞与上皮间质化指标相关性的研究

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国际皮肤性病学杂志 2015年第5期41卷 280-283页

作者：吴琼李阿梅邵雪宝臧洁宋昊温斯健姜祎群孙建方上海市皮肤病医院 200433 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所、江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

目的探讨皮肤恶性黑素瘤标本肿瘤相关巨噬细胞（TAM）浸润情况与肿瘤临床病理特征及上皮间质化指标之间的关系.方法收集54例皮肤黑素瘤及15例良性色素痣石蜡标本,用免疫组化法对TAM标记CD163及上皮间质化指标上皮型钙黏蛋白、神经型... 详细信息

目的探讨皮肤恶性黑素瘤标本肿瘤相关巨噬细胞（TAM）浸润情况与肿瘤临床病理特征及上皮间质化指标之间的关系.方法收集54例皮肤黑素瘤及15例良性色素痣石蜡标本,用免疫组化法对TAM标记CD163及上皮间质化指标上皮型钙黏蛋白、神经型钙黏蛋白及波形蛋白在组织中的表达进行检测.采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析,计量资料（x）±s表示,采用t检验、单因素方差分析、多因素线性回归进行数据分析.结果恶性黑素瘤标本中检测到CD163阳性的TAM,在色素痣标本中未发现明显的CD163阳性细胞.在原位黑素瘤中,TAM计数为16.97±8.74,在侵袭性黑素瘤中,TAM计数为35.08±13.78,差异有统计学意义（P＜0.05）.在有淋巴结转移的TAM计数为56.00±3.07,在无淋巴结转移的TAM计数为28.70±18.52,差异有统计学意义（P＜0.05）.TAM计数在Clark分级中差异有统计学意义（P＜0.05）,且在Ⅰ～Ⅳ级TAM计数随Clark级别增高而增加,Ⅳ级与Ⅴ级之间的TAM计数,差异无统计学意义（P＞0.05）.TAM计数在不同性别、不同年龄、肢端/非肢端、是否溃疡之间比较,差异无统计学意义（P≥0.05）.多因素线性回归结果显示,皮肤恶性黑素瘤组织中,TAM计数与Clark分级、溃疡、肿瘤进展、神经型钙黏蛋白及波形蛋白5个因素相关.结论皮肤恶性黑素瘤中TAM可能通过促进上皮间质化使肿瘤发展,从而增加肿瘤的恶性程度.

关键词：黑色素瘤痣和黑素瘤巨噬细胞上皮-间质转化病理学

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肿瘤相关巨噬细胞研究进展

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国际皮肤性病学杂志 2015年第2期41卷 121-124页

作者：吴琼姜祎群孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤相关慢性炎症中的关键细胞，促进肿瘤生长、增殖、血管生成、侵袭、转移及化疗抵抗。巨噬细胞根据环境不同大致可极化为经典活化型巨噬细胞（M1型）及替代活化型巨噬细胞（M2型）。环氧酶2、核因子KB、T0ll样受... 详细信息

肿瘤相关巨噬细胞是肿瘤相关慢性炎症中的关键细胞，促进肿瘤生长、增殖、血管生成、侵袭、转移及化疗抵抗。巨噬细胞根据环境不同大致可极化为经典活化型巨噬细胞（M1型）及替代活化型巨噬细胞（M2型）。环氧酶2、核因子KB、T0ll样受体信号途径、缺氧、原癌基因MYC、Notch信号通路及细胞因子等参与肿瘤相关巨噬细胞发生M1-M2型别转化。巨噬细胞的表型及功能随着肿瘤进展的不同阶段而变化，针对巨噬细胞的抗肿瘤药物治疗，应取决于肿瘤所处的阶段。

关键词：巨噬细胞肿瘤表型

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皮肤僵硬综合征五例分析

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国际皮肤性病学杂志 2015年第2期41卷 73-75页

作者：胡彬周璐陈浩温斯健吴侃孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

目的加深对皮肤僵硬综合征临床及组织病理特点的认识。方法回顾性分析5例皮肤僵硬综合征患者的临床表现、组织病理学特点和治疗反应。结果5例患儿发病年龄3个月至4岁，就诊年龄5～9岁，病程2～6年。典型皮疹为一侧下肢及腹部、臀部皮肤... 详细信息

目的加深对皮肤僵硬综合征临床及组织病理特点的认识。方法回顾性分析5例皮肤僵硬综合征患者的临床表现、组织病理学特点和治疗反应。结果5例患儿发病年龄3个月至4岁，就诊年龄5～9岁，病程2～6年。典型皮疹为一侧下肢及腹部、臀部皮肤木板样坚硬质地，表面毳毛增多，受累关节活动受限。组织病理示真皮内胶原纤维增生，伴有黏多糖沉积。药物治疗的疗效不明显。结论皮肤僵硬综合征于出生后或婴幼儿早期发病，以一侧肢体受累为主，可累及对侧，需与硬皮病等鉴别，临床尚缺乏有效的治疗手段。

关键词：僵人综合征少见病结缔组织

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