检索结果-内蒙古大学图书馆

慢病毒介导shRNA沉默Nicastrin基因的人永生化角质形成细胞模型构建

中华皮肤科杂志 2017年第4期50卷 268-272页

作者：毛秋霞张婉璐何艳艳贾苇雪 Yang Brooks 李莉李黎明张晓峰徐浩翔陈旭王宝玺李诚让中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042 河南省人民医院皮肤科 Cutaneous Biology Research Center Massachusetts General Hospital 中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院皮肤科

目的构建Nicastrin（NCT）基因的RNA干扰慢病毒表达载体，并在人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）上鉴定其沉默效率，构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型，为后续研究NCT基因下调对角质形成细胞的生物学行为影响奠定实验... 详细信息

目的构建Nicastrin（NCT）基因的RNA干扰慢病毒表达载体，并在人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）上鉴定其沉默效率，构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型，为后续研究NCT基因下调对角质形成细胞的生物学行为影响奠定实验基础。方法设计3个靶向NCT基因特异性短发卡RNA（shRNA）表达序列并连接到慢病毒表达质粒pGLV3/H1/GFP ＋ Puro中，成功构建慢病毒重组表达质粒，并通过测序鉴定。将构建的重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞，产生慢病毒颗粒，并测其滴度。将HaCaT细胞分为空白组（未感染病毒）、阴性对照组（NC组，感染空载病毒LV3-shNC）和干扰组（感染NCT-shRNA1、2、3慢病毒）。流式细胞仪检测慢病毒转染效率，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹检测靶基因的沉默效率，筛选出沉默效果最佳的干扰序列。结果测序表明，NCT-shRNA慢病毒重组表达质粒构建成功。重组表达质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生的慢病毒颗粒滴度为109 TU/ml。慢病毒感染HaCaT细胞后，流式细胞仪检测，慢病毒转染效率大于95%。qRT-PCR结果，与NC组相比，干扰组NCT mRNA表达量明显下降，其中NCT-shRNA1组NCT基因沉默效果最佳，干扰效率达到75%。Western印迹结果，与NC组相比，shRNA1组NCT蛋白表达抑制率为71.7%。结论成功筛选出高效NCT-shRNA干扰序列，构建NCT-shRNA慢病毒重组表达载体，并构建NCT基因稳定下调的人永生化角质形成细胞模型。

关键词：化脓性汗腺炎 RNA干扰慢病毒属角蛋白细胞 NCT基因模型,细胞

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筛查与结直肠癌发病率关系的系统综述和荟萃分析

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中华医学杂志 2017年第44期97卷 3492-3497页

作者：厚磊廖苏苏姜晶梅薛芳韩伟张彪庞海玉中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院流行病和卫生统计学系北京100005 中国疾病预防控制中心慢性非传染性疾病预防控制中心中国医学科学院北京侨和医院中心实验室

目的探讨筛查与结直肠癌发病率的关系。方法检索Medline、Scopus、BIOSIS Previews和Cochrane Library数据库收录的所有结直肠癌筛查随机对照试验（RCT），筛查组必须报告肠镜使用情况，对照组不接受筛查。结果9个RCT入选，试验组包括4... 详细信息

目的探讨筛查与结直肠癌发病率的关系。方法检索Medline、Scopus、BIOSIS Previews和Cochrane Library数据库收录的所有结直肠癌筛查随机对照试验（RCT），筛查组必须报告肠镜使用情况，对照组不接受筛查。结果9个RCT入选，试验组包括4个单次筛查，5个重复2次或以上筛查；随机总人数997131人，最长中位随访10～28年。按意向性分析原则，筛查使中晚期结直肠癌发病率降低了10％～60％。在5个多次报告发病率的RCT中，筛查组结直肠癌发病率随时间呈现先升后降的趋势，6个筛查组在基线后最长中位随访时间分别为9．0、10．9、13．0、18．0、18．0、19．5年，与对照组相比，其相应的人年发病率比（RR）和95％C1分别为0．96（0．86～1．06）、0．80（0．70～0．92）、1．02（0．91—1．14）、0．80（0．70～0．90）、0．83（0．73～0．94）、0．94（0．85～1．05）。与自然人群筛查相比，基于诊所或医院的筛查人群发病率获益更多，镜检率较高、检出或病变切除率较高的人群获益尤多。结论结直肠癌筛查至少10年后才可能观察到结直肠癌发病率下降，筛查人群危险水平、筛查技术方案以及筛查对象对包括镜检在内的筛查程序的接受程度都影响发病率下降的幅度。

关键词：筛查结直肠肿瘤发病率荟萃分析

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警惕印度毛癣菌感染在中国的流行

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中国真菌学杂志 2023年第4期18卷 289-290,309页

作者：刘维达梁官钊李筱芳孔雪谢文婷北京协和医学院、中国医学科学院皮肤病医院(中国医学科学院皮肤病研究所)真菌科中国医学科学院病原微生物菌(毒)种保藏中心医学真菌中心江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室南京210042

近年来,已有多国报道发现印度毛癣菌感染引起难治性复发性皮肤癣菌病,该菌常对特比萘芬或多种抗真菌药耐药。现对印度毛癣菌感染现状进行阐述,旨在引起有关学者和相关部门重视。

关键词：印度毛癣菌耐药特比萘芬

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外周血单一核细胞的体外活化对成纤维细胞增殖和基质金属蛋白酶产生的影响

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中华皮肤科杂志 2015年第11期48卷 801-806页

作者：康玉英孙彩虹鞠梅陈崑顾恒山西医学科学院山西大医院皮肤性病科太原030032 江苏大学附属人民医院皮肤科中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病号胜病分子生物学重点实验室

目的研究不同活化剂对外周血单一核细胞（PBMC）产生基质金属蛋白酶（MMP）的影响以及PBMC活化后培养上清液［称为条件培养基（CM）］对培养的皮肤成纤维细胞增殖活性、产生MMP的影响。方法抽取、分离健康人PBMC，分为植物血凝素（PH... 详细信息

目的研究不同活化剂对外周血单一核细胞（PBMC）产生基质金属蛋白酶（MMP）的影响以及PBMC活化后培养上清液［称为条件培养基（CM）］对培养的皮肤成纤维细胞增殖活性、产生MMP的影响。方法抽取、分离健康人PBMC，分为植物血凝素（PHA）组、双抗体组、对照组，分别用活化剂PHA、CD3和CD28双抗体、含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基处理细胞，72 h后收集三组CM，并将获得的CM按不同比例稀释后作用于培养的成纤维细胞，以不加CM作为对照组，培养48或24 h。采用噻唑蓝法检测细胞增殖能力，半定量反转录（RT）-PCR法检测细胞MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA表达水平，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液中白介素（IL）-6、MMP-1、MMP-3、MMP-9蛋白含量。采用单因素方差分析、Tukey HSD检验、Games-Howell检验等方法进行统计学分析。结果与对照组相比，PHA组PBMC增殖活性及分泌IL-6、MMP-3水平明显增加，差异均有统计学意义（P 〈 0.05）；3组活化后上清液中均未检测到MMP-1、MMP-9蛋白。对照组、双抗体组、PHA组PBMC中MMP-1 mRNA相对表达水平（以靶基因与β肌动蛋白mRNA之比表示）0.083 ± 0.016、0.188 ± 0.030、0.714 ± 0.104，差异有统计学意义（P 〈 0.05），MMP-3、MMP-9 mRNA均无表达。不同稀释度CM刺激成纤维细胞后上清液中可检测到MMP-3蛋白，MMP-3含量以原液CM中最高，1/10 CM刺激时最低；在相同的稀释度刺激时，上清液中MMP-3含量以PHA刺激组最高，对照刺激组最低；不同CM刺激成纤维细胞后上清液中均未检测到MMP-1、MMP-9蛋白。不同处理组成纤维细胞的增殖能力及MMP-1、MMP-3 mRNA表达差异均无统计学意义（P 〉 0.05），MMP-9 mRNA无表达。结论 PBMC活化后可表达MMP-1 mRNA并分泌MMP-3蛋白，PBMC活化后上清液不能刺激成纤维细胞MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA及蛋白表达，提示炎症细胞可能通过自身产生MMP而发挥作用。

关键词：白细胞单核成纤维细胞基质金属蛋白酶类细胞增殖植物血凝素类

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BRAFV600E突变基因对人黑素瘤细胞侵袭能力影响的研究

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中华皮肤科杂志 2009年第2期42卷 101-104页

作者：陈浩张玲薛燕宁韩永智徐秀莲曾学思孙建方中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 昆明医学院云南省天然药物药理重点实验室广东省人民医院

目的探讨BRAFV600E突变基因对黑素瘤细胞侵袭能力的影响。方法用构建成功的质粒载体转染人黑素瘤细胞株A375，在体外干扰BRAFV600E突变基因，用Transwell小室检测肿瘤细胞侵袭能力，用明胶酶法检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的变化，采... 详细信息

目的探讨BRAFV600E突变基因对黑素瘤细胞侵袭能力的影响。方法用构建成功的质粒载体转染人黑素瘤细胞株A375，在体外干扰BRAFV600E突变基因，用Transwell小室检测肿瘤细胞侵袭能力，用明胶酶法检测基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的变化，采用RT—PCR和Western印迹检测MMP-2和血管内皮细胞生长因子（VEGF）mRNA和蛋白表达。结果特异性短发卡RNA抑制人黑素瘤细胞MMP-2和VEGFmRNA和蛋白的表达，MMP-2mRNA和蛋白表达分别减少35％和80％，VEGF则减少45％和14％。转染特异性质粒的黑素瘤细胞穿过Metrigel的数目下降69％。结论BRAFV600E突变增强黑素瘤细胞的侵袭能力，特异性shRNA可以使瘤细胞的侵袭性下降。

关键词：黑色素瘤 RNA 小分子干扰基质金属蛋白酶2 血管内皮生长因子类细胞系肿瘤 BRAF基因

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烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶的影响

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中华皮肤科杂志 2018年第9期51卷 653-657页

作者：童建波杜蕾蕾曾荣王丽玮刘宇甄段志敏陈青李岷中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤性病分子生物学重点实验室南京210042 江苏省血液中心南京210042

目的探讨烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子仪（TNF-α）和细胞内信号分子β38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法10^6、10^7CFU／ml烟曲霉悬液（10^6和10^7CFU／ml烟曲霉组）、100mg／L阳性刺激物... 详细信息

目的探讨烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子仪（TNF-α）和细胞内信号分子β38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法10^6、10^7CFU／ml烟曲霉悬液（10^6和10^7CFU／ml烟曲霉组）、100mg／L阳性刺激物β-葡聚糖（β-葡聚糖组）及培养基（空白对照组）分别与2×10^5／mlTHP-1细胞共孵育1、3、6h，实时荧光定量PCR分析各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平。10^7CFU／ml烟曲霉悬液（烟曲霉组）、β-葡聚糖（β-葡聚糖组）及培养基分别作用THP-1细胞24h，酶联免疫吸附法检测各组培养上清液中TNF-α含量。Western印迹法检测10^7CFU／ml烟曲霉体外作用THP-1细胞后15、30、60minβ38MAPK和磷酸化β38MAPK水平。采用20μmol／LSB203580预先与THP-1细胞共培养2h后，再用10^7CFU／ml烟曲霉、β-葡聚糖或培养基作用6h，检测各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平变化。结果10^6、10^7CFU／ml烟曲霉组、100mg／L β-葡聚糖组及空白对照组TNF-α mRNA表达水平差异有统计学意义（F=110．983，P〈0．001），且随培养时间延长，THP-1细胞TNF-α mRNA水平增高（F=701．680，P〈0．001）。1^7CFU／ml烟曲霉刺激THP-1细胞24h后，TNF-α蛋白水平（6236．30±437．12ng／L）较空白对照组（132．10±0．61ng／L）明显升高（P〈0．01）。10^7CFU／ml烟曲霉作用THP-1细胞30min后磷酸化β38MAPK蛋白水平明显升高，60rain时开始减弱。SB203580阻断的烟曲霉组TNF-α mRNA表达水平（3．83±0．62）较未阻断的烟曲霉组（187．23±21．62）明显降低。结论人THP-1细胞体外与烟曲霉作用后激活信号分子β38MAPK并分泌TNF-α，表明单核细胞可能参与抗烟曲霉感染固有免疫反应。

关键词：烟曲霉菌肿瘤坏死因子α p38丝裂原活化蛋白激酶类 THP-1细胞

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儿童获得性大疱性表皮松解症二例

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中华皮肤科杂志 2017年第11期50卷 851-852页

作者：于灵冯素英李志量荆可靳培英王宝玺河南省人民医院郑州大学人民医院皮肤科郑州450003 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所皮肤科江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院皮肤科

例1 男，7岁，因全身红斑水疱5年、加重1周就诊。患儿5年前无明显诱因口周、颈部、股部出现红斑、水疱，后水疱逐渐蔓延至全身，于当地医院诊断为线状IgA大疱性皮病，病理检查示表皮下水疱，疱液及真皮可见大量中性粒细胞、淋巴细胞浸... 详细信息

例1 男，7岁，因全身红斑水疱5年、加重1周就诊。患儿5年前无明显诱因口周、颈部、股部出现红斑、水疱，后水疱逐渐蔓延至全身，于当地医院诊断为线状IgA大疱性皮病，病理检查示表皮下水疱，疱液及真皮可见大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润，直接免疫荧光示IgG、C3基底膜带线性沉积，IgA、IgM均阴性，予甲泼尼龙（16 mg/d）、环孢素（50 mg每日2次）口服，病情控制，药物逐渐减量，1年后病情复发加重，

关键词：获得性大疱性表皮松解症儿童治疗

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2020年中国肿瘤药物临床试验进展

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中华肿瘤杂志 2021年第2期43卷 218-223页

作者：吴大维黄慧瑶唐玉王海学王骏王书航房虹杨雪源李静王欣刘利军闫言王清李宁曹彩徐兵河孙燕赫捷国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院药物临床试验研究中心100021 国家药品监督管理总局药品审评中心北京100022 中国医学科学院皮肤病医院医院办公室南京210042 国家心血管病中心国家心血管疾病临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院阜外医院心血管疾病国家重点实验室北京医院国家老年医学中心临床试验研究中心 100730 中国医学科学院血液病医院(中国医学科学院血液学研究所)临床试验研究中心天津300020 中国医学科学院整形外科医院临床试验机构办公室北京100144 中日友好医院临床试验研究中心北京100029 中关村玖泰药物临床试验技术创新联盟北京100027 国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院胸外科100021

目的了解2020年中国肿瘤药物临床试验的进展及上市肿瘤药物情况,探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)对肿瘤药物临床试验进展的影响。方法从中国国家食品药品监督管理总局药物临床试验登记与信息公示平台登记数据库和国产药品及进口药品数... 详细信息

目的了解2020年中国肿瘤药物临床试验的进展及上市肿瘤药物情况,探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)对肿瘤药物临床试验进展的影响。方法从中国国家食品药品监督管理总局药物临床试验登记与信息公示平台登记数据库和国产药品及进口药品数据查询系统提取2020年肿瘤药物临床试验、涉及试验药品及上市药物信息,与2019年进行比较分析,同时比较2020年国内制药企业和全球制药企业在试验范围、试验分期及药物类型、作用和机制等方面的差异。结果2020年共有722项肿瘤药物临床试验在中国注册,年增长率为52.3%,占同期全部药物临床试验的28.3%。其中由国内制药企业发起603项(83.5%),国际多中心试验105项(14.5%),Ⅰ期临床试验所占比例(44.5%)最高。722项肿瘤药物临床试验共涉及肿瘤药物458种,年增长率为36.7%。其中361种(85.8%)由国内制药企业开发,原研药是常见药物类型(77.1%),肿瘤治疗药物多见(92.8%)。作用机制方面以靶向药为主(76.6%),程序性死亡蛋白1(PD-1)和表皮生长因子受体(EGFR)是最常见的靶点。2020年共有17家制药企业的19种抗肿瘤新药或生物类似药在中国获准上市,其中10种来自国内制药企业。不论是肿瘤药物临床试验,还是上市药物,肺癌和乳腺癌均为最常见的适应证。在肿瘤药物临床试验申办方分布、试验范围分布和试验分期分布方面,以及试验药物申办方分布、药物类型分布、药物作用分布方面,2020年与2019年差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论疫情防控期间,中国肿瘤药物临床试验仍保持高水平增长。国内制药企业在2020年取得了一系列关键性成果,是推动中国肿瘤药物临床试验发展的中坚力量。

关键词：恶性肿瘤药物临床试验中国

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α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬的影响

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中华皮肤科杂志 2015年第8期48卷 568-571页

作者：郑云鹏陈旭黄丹徐松顾恒郑州大学第一附属医院皮肤科 450052 中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所南京210042 江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室

目的：评价α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。方法人皮肤成纤维细胞与终浓度分别为0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L 的α硫辛酸孵育4、12和24 h 后，采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性，单丹酰戊二胺（MDC）染色法检测细... 详细信息

目的：评价α硫辛酸对人皮肤成纤维细胞自噬水平的影响。方法人皮肤成纤维细胞与终浓度分别为0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L 的α硫辛酸孵育4、12和24 h 后，采用噻唑蓝法检测细胞增殖活性，单丹酰戊二胺（MDC）染色法检测细胞自噬水平，Western 印迹法检测微管相关蛋白1轻链3-B（LC3-B）表达。结果孵育4 h 和12 h 时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间人皮肤成纤维细胞增殖活性（A490值）差异均无统计学意义（F 值分别为2.85、1.34，均 P 〉0.05）；孵育24 h 时，各组间差异有统计学意义（F =10.41，P 〈0.01）。MDC 法检测显示，孵育4 h 和12 h 时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间自噬体阳性细胞百分率差异均无统计学意义（F 值分别为0.11、0.10，均 P 〉0.05）；孵育24 h 时，各组间差异有统计学意义（F =8.03，P 〈0.05）。Western 印迹法检测显示，孵育4 h 和12 h 时，0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.50 mmol/L α硫辛酸组间细胞 LC3-Ⅰ向 LC3-Ⅱ转化（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ）水平差异均无统计学意义（F 值分别为3.38、2.13，均 P 〉0.05），但孵育24 h 时各组间差异有统计学意义（F =37.49，P 〈0.01）。结论α硫辛酸可能抑制人皮肤成纤维细胞基础自噬。

关键词：自噬成纤维细胞细胞增殖微管相关蛋白轻链3-B

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儿童肛门生殖器疣45例HPV病毒检测分析

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中国皮肤性病学杂志 2018年第12期32卷 1407-1410页

作者：黄丹张小华朱艳顾恒鞠梅陈崑中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室江苏南京210042

目的检测儿童肛门生殖器疣的HPV病毒基因型。方法门诊收集12岁以下的儿童肛门生殖器疣患者,记录病史及查体,留取皮损处脱落细胞标本,运用PCR-反向点杂交法检测15种高危型别,3种疑似高危型别,10种低危型别和1种皮肤型别。统计患者的一般... 详细信息

目的检测儿童肛门生殖器疣的HPV病毒基因型。方法门诊收集12岁以下的儿童肛门生殖器疣患者,记录病史及查体,留取皮损处脱落细胞标本,运用PCR-反向点杂交法检测15种高危型别,3种疑似高危型别,10种低危型别和1种皮肤型别。统计患者的一般情况、皮损分布和HPV检查结果。结果共收集了45例4个月～12岁的儿童肛门生殖器疣患者,男女分别为12例,23例,男女比例0. 4∶1,年龄中位值4岁,病程4个月。皮损分布在肛周者最多为38例(84. 44%),其次外生殖器8例(17. 78%)。8例(17. 78%)为多部位发病,其余37例(82. 22%)均为单部位发病,单发于肛周者最多为30例(66. 67%)。HPV检测阳性者有24例,阳性率53. 33%,6型感染16例(66. 67%),11型感染4例(16. 67%),7型感染4例(16. 67%),59+6型混合感染1例。HPV6型在性别间分布差异有统计学意义(P=0. 023)。结论本地区儿童肛门生殖器疣HPV感染亚型以低危型6型为主,多为单一型感染,皮肤型感染的比率可能被低估。

关键词：疣生殖器儿童人乳头瘤病毒基因型

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