流式细胞术(flow cytometry)可以实现高速、逐一的细胞定量分析和分选,是研究和诊断血液病的重要手段之一。但是由于不同实验所用细胞和实验条件不同,经常存在抗原阴性细胞非特异染色等问题。利用抗体滴定法,可通过计算、比较染色指数,得到使抗原阳性细胞群和阴性细胞群达到最佳分离效果的实验条件。为了优化血液细胞流式细胞术中荧光抗体染色的实验条件,以小鼠骨髓细胞为被标记细胞,选择利用非串联荧光染料FITC标记的大鼠抗小鼠CD11b抗体(FITC Rat Anti-Mouse CD11b)和串联荧光染料APC-eFluor780标记的大鼠抗小鼠CD11b抗体(APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b)进行标记。通过计算不同浓度抗体标记小鼠骨髓细胞的染色指数进行抗体滴定,确定合适的抗体浓度区间,进而分析细胞数量、染色时间及固定步骤对抗体染色指数的影响,探究影响血液细胞抗体染色的关键因素。结果显示,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b的浓度分别在0.156~2.500μg·mL-1和0.25~1.00μg·mL-1范围内染色指数较高,但是超出这个范围的抗体浓度会使染色指数降低;抗体浓度、染色时间一定时,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b分别在细胞数量为1.56×105~5.00×106 cells·管-1和1.56×105~3.12×105 cells·管-1范围内染色指数较高,但是超出这个范围的细胞数量会使染色指数降低;抗体浓度、细胞数量一定时,对于FITC Rat Anti-Mouse CD11b,随着染色时间的延长,染色指数降低,而APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b与之相反;通过比较固定前后染色指数的高低发现,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b在固定后染色指数均显著下降(P<0.01和P<0.05)。研究结果提供了一种通过抗体滴定优化流式分析血液细胞的方法,并指出在特定实验中根据抗体滴定结果选择合适的抗体浓度、细胞数量、染色时间和固定步骤对标记血液细胞进行流式检测的研究至关重要。
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