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中国医学科学院学报 2007年第1期29卷 62-66,I0009页

作者：陈苗曲强沈悌张伸陈翠珠中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室北京100730

目的研究成人骨髓间充质干细胞(MSCs)在诱导条件下定向分化为成骨细胞过程中,细胞表面分子的表达及变化特征。方法从人骨髓中分离有核细胞,在含有15%胎牛血清、维生素C和β-甘油磷酸钠的α-MEM培养基中培养。在培养早期加入10-8mol/L地... 详细信息

目的研究成人骨髓间充质干细胞(MSCs)在诱导条件下定向分化为成骨细胞过程中,细胞表面分子的表达及变化特征。方法从人骨髓中分离有核细胞,在含有15%胎牛血清、维生素C和β-甘油磷酸钠的α-MEM培养基中培养。在培养早期加入10-8mol/L地塞米松(实验组)或保持基础培养状态(对照组1),同时部分细胞仅培养于α-MEM培养基中(对照组2)。于培养第7、12、17天分别收集实验组和各对照组细胞,用流式细胞方法观察细胞表面分子CD45、CD34、CD117、CD90和人白细胞抗原-DR(HLA-DR)的表达,并定量对比分析。结果成人骨髓MSCs在体外诱导条件下分化为具有成骨细胞特征的成熟细胞。培养第7天实验组、对照组1和对照组2均少量表达CD45,第12、17天CD45表达转为阴性。各组各时间点CD34、CD117表达均为阴性。培养第12天,实验组和各对照组细胞CD90表达均较第7天升高,以对照组升高明显。实验组细胞HLA-DR表达随着成骨细胞分化成熟逐渐上升,而对照组细胞HLA-DR表达下降。结论MSCs在诱导条件下可以向成骨细胞分化。细胞表面分子的表达在细胞分化过程中呈特征性改变,是成骨细胞分化早期的一个重要标志。

关键词：骨髓间充质干细胞成骨细胞细胞表面分子

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成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞的冻存与复苏研究

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中华外科杂志 2006年第21期44卷 1460-1462页

作者：曲强李秉璐赵玉沛陈翠珠闫旭王磊周立何小东中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 100730

目的在体外诱导人骨髓基质干细胞向肝细胞分化成熟的基础上,将细胞深冻保存,观察冻存复苏后细胞存活率及功能状况。方法在含有多种细胞因子的条件培养基中体外诱导成人骨髓基质干细胞,当细胞显示成熟肝细胞特征后,将细胞分别冻存于90%... 详细信息

目的在体外诱导人骨髓基质干细胞向肝细胞分化成熟的基础上,将细胞深冻保存,观察冻存复苏后细胞存活率及功能状况。方法在含有多种细胞因子的条件培养基中体外诱导成人骨髓基质干细胞,当细胞显示成熟肝细胞特征后,将细胞分别冻存于90%胎牛血清(FBS)和10%二甲亚砜(DMSO)(A组)、10%FBS、30%甘油和60%培养基(B组)和10%FBS、10%DMSO和80%威斯康星器官保存液(UW液)(C组)中。冻存4周后复苏细胞,测定各组细胞存活率及白蛋白合成情况。结果成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞经冻存复苏后可恢复功能细胞形态,A、B和C组冻存液中细胞复苏后细胞存活率分别为(60·0±3·3)%、(91·0±2·6)%和(89·0±1·4)%,培养24h后检测上清液白蛋白浓度分别为(0·210±0·005)g/L、(0·340±0·020)g/L和(0·330±0·030)g/L。结论成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞冻存复苏后仍保持较高的细胞存活率和功能,可作为临床肝细胞移植及生物人工肝的重要肝细胞来源。

关键词：干细胞肝细胞低温保藏细胞存活肝移植

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口腔鳞状细胞癌中蛋白酪氨酸磷酸酶基因的突变与表达

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中华口腔医学杂志 2009年第11期44卷 660-663页

作者：李倩赵继志陈永宁张韬周炼金晔中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院口腔科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 100730

目的探讨抑癌基因蛋白酪氨酸磷酸酶基因（phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome 10，PTEN）的突变和基因表达水平变化在口腔鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法应用聚合酶链反应（PCR）、基因测序方法检测42例口... 详细信息

目的探讨抑癌基因蛋白酪氨酸磷酸酶基因（phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome 10，PTEN）的突变和基因表达水平变化在口腔鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法应用聚合酶链反应（PCR）、基因测序方法检测42例口腔鳞状细胞癌和癌旁组织中VITEN第3、5、6、8外显子有无突变。应用半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测上述病例癌组织及癌旁组织中PTENmRNA的表达。结果发现2例口腔鳞状细胞癌组织中PTEN第5外显子发生点突变。42例口腔鳞状细胞癌和癌旁正常组织中均有PTENmRNA表达，口腔鳞状细胞癌组织中PTENmRNA表达量[PTEN／磷酸甘油醛脱氢酶（glyeeraldehyde phosphate dehydrogenase，GAPDH）]为（0．36±0．12），低于相应癌旁正常组织（0．64±0．09），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论PTENmRNA表达水平降低与口腔鳞状细胞癌的发生有一定关系。

关键词：癌鳞状细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶基因

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幼年起病的2例晚发型糖原贮积症Ⅱ型/Pompe病临床和基因分析

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中华儿科杂志 2007年第10期45卷 760-764页

作者：仇佳晶魏珉张为民施惠平中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院儿科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 100730 中国医学科学院基础医学研究所

目的对中国大陆地区幼年起病的晚发型糖原贮积症Ⅱ型(GSDⅡ,Pompe 病)患者进行临床和基因突变分析。方法对2例幼年起病的 Pompe 病患儿进行临床分析,提取患儿皮肤成纤维细胞及其父母的外周血 DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增α-1,4-葡萄... 详细信息

目的对中国大陆地区幼年起病的晚发型糖原贮积症Ⅱ型(GSDⅡ,Pompe 病)患者进行临床和基因突变分析。方法对2例幼年起病的 Pompe 病患儿进行临床分析,提取患儿皮肤成纤维细胞及其父母的外周血 DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增α-1,4-葡萄糖苷酶的19个外显子,测序,进行突变检测。同时对50例健康对照100个等位基因进行15号外显子的 PCR 扩增,测序,确定突变特征。结果 1例临床表现为进行性近端肌肉无力,肌张力低下;1例表现为肌容积减少,呼吸肌受累;2例均有肌酸磷酸肌酶升高,肌电图提示肌源性损害,肌活检呈空泡性改变,皮肤成纤维细胞α-1,4-葡萄糖苷酶活性测定明显低下。突变检测:测序发现4个杂合错义突变,例1为 c796 C>T,p.266Pro>Ser;c2105 G>A,p.702Arg>His;例2为 c2132 C>G,p.711Thr>Arg;c2167 G>A,p.723Val>Met。其中后3个为新突变,50例健康对照100个等位基因测序未发现同样突变。结论幼年起病的 Pompe 病患儿临床表现存在差异,呼吸肌受累情况影响其预后;检测到3个错义新突变,可能为致病突变。

关键词：糖原贮积病,Ⅱ型葡聚糖1,4-α-葡糖苷酶外显子突变

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压力性尿失禁及盆底组织膨出患者肛提肌形态学的观察

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中华妇产科杂志 2004年第8期39卷 519-521,i001页

作者：陈娟郎景和朱兰刘珠凤孙大为冷金花任海涛赵艳环关宏志中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经科实验室 100730

目的探讨肛提肌组织形态学的变化及其与压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)和盆底组织膨出(pelvic organ prolapse,POP)发病的关系。方法选择15例SUI患者(SUI组)、19例POP患者(POP组)及3例无SUI和POP的直肠癌患者(对照组)... 详细信息

目的探讨肛提肌组织形态学的变化及其与压力性尿失禁(stress urinary incontinence,SUI)和盆底组织膨出(pelvic organ prolapse,POP)发病的关系。方法选择15例SUI患者(SUI组)、19例POP患者(POP组)及3例无SUI和POP的直肠癌患者(对照组),术中行肛提肌活检,冰冻切片常规行HE染色、改良Gomori染色及非特异性酯酶(non—specific esterase,NSE)、酸性磷酸酶(acidphosphrase,ACP)、三磷酸腺苷酶(ATPase)染色,镜下观察肛提肌形态学变化。结果成功获取肛提肌肌肉组织与未取得肛提肌肌肉组织的SUI患者的年龄、产次、绝经时间、疾病严重程度、漏尿点压力等比较,差异均无显著性(P>0.05)。SUI组和POP组患者肛提肌组织形态学表现为肌纤维密度降低,排列紊乱,被大量的结缔组织填充、取代,肌纤维周围炎性细胞浸润;单个肌纤维细胞既有核中心移位、纤维劈裂、外周吞噬及空泡变性等肌源性改变,也有肌纤维萎缩、角形变、同型纤维聚集等神经源性改变。结论 SUI和POP患者的肛提肌同时存在神经源性和肌源性改变,提示持续的盆底肌去神经支配和继发的肌源性改变,可能是SUR及POP的发病原因之一。

关键词：肛提肌患者 SUI 改变盆底压力性尿失禁形态学细胞 ATP 肌肉组织

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非综合征性耳聋人工耳蜗植入者的基因分析

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中华医学杂志 2007年第16期87卷 1093-1096页

作者：田永胜陈晓巍曹克利陈东野左瑾方福德中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院耳鼻咽喉科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础所方福德实验室

目的研究连接蛋白26(Connexin26)基因(GJB2)突变和线粒体12S rRNA 基因突变在人工耳蜗植入的非综合征性耳聋患者中发生的几率及特性。方法选取100例接受人工耳蜗植入患者,语前聋为96例,语后聋为4例。自外周静脉血中提取总 DNA,进行 GJB... 详细信息

目的研究连接蛋白26(Connexin26)基因(GJB2)突变和线粒体12S rRNA 基因突变在人工耳蜗植入的非综合征性耳聋患者中发生的几率及特性。方法选取100例接受人工耳蜗植入患者,语前聋为96例,语后聋为4例。自外周静脉血中提取总 DNA,进行 GJB2基因和线粒体12S rRNA基因核苷酸 PCR,对扩增的基因片段进行测序,检测 GJB2基因突变和线粒体12S rRNA 基因突变。结果接受人工耳蜗植入的非综合征性耳聋病例中发现 GJB2基因突变率最高,为34%(34/100)。其突变类型主要为235delC,占27%;同时有氨基糖甙类药物使用史的16例病例中发现2例有线粒体12S rRNA 基因 A1555G突变,1例有线粒体12S rRNA 基因突变 delT961Cn。结论 GJB2基因突变在人工耳蜗植入的患者中发生率最高,235delC 是主要突变类型,有氨基糖甙类药物应用史的语后聋患者中线粒体12S rRNA 基因突变 A1555G 为常见突变形式。

关键词：耳蜗植入突变线粒体聋 GJB2

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生长抑素类似物在垂体促甲状腺激素瘤诊断和治疗中的作用

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中华内科杂志 2006年第11期45卷 910-913页

作者：陈适李梅连小兰曾正陪戴为信李方余卫王任直中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内分泌科卫生部内分泌重点实验室 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院核医学科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院放射科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科 100730

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽在垂体促甲状腺素(TSH)瘤诊断和治疗中的作用。方法系统报告北京协和医院诊治的1例垂体TSH大腺瘤患者临床特点,采用99mTc-奥曲肽显像和鞍区MRI对肿瘤进行准确定位诊断。给予奥曲肽0.1mg,每8h皮下注射,10d,... 详细信息

目的探讨生长抑素类似物奥曲肽在垂体促甲状腺素(TSH)瘤诊断和治疗中的作用。方法系统报告北京协和医院诊治的1例垂体TSH大腺瘤患者临床特点,采用99mTc-奥曲肽显像和鞍区MRI对肿瘤进行准确定位诊断。给予奥曲肽0.1mg,每8h皮下注射,10d,观察TSH水平和肿瘤大小的变化,经口鼻蝶窦行垂体瘤切除术,观察手术效果,并进行相关文献复习。结果TSH瘤奥曲肽显像呈阳性。单纯抗甲状腺药物治疗难以使甲状腺功能完全正常。奥曲肽治疗能快速有效使甲状腺功能控制至正常,经10d奥曲肽治疗,垂体肿瘤由3.0cm×2.0cm×2.5cm缩小至2.0cm×2.0cm×1.5cm,甲状腺肿大由Ⅲ度缩小为Ⅱ度。结论99mTc-奥曲肽显像可作为TSH瘤定位诊断的方法之一。奥曲肽治疗能有效控制继发性甲状腺功能亢进并缩小TSH瘤体积,可用作TSH瘤的常规手术前准备。

关键词：促甲状腺素垂体肿瘤奥曲肽治疗

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绒毛膜癌耐药细胞系的建立及人白细胞介素2基因转染后对其多药耐药性的逆转作用

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中华妇产科杂志 2001年第9期36卷 549-553页

作者：崔竹梅向阳杨秀玉刘芝华中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肿瘤研究所分子肿瘤国家重点实验室 100730

目的　建立绒毛膜癌 (绒癌 )的耐药细胞系 ,应用基因工程技术将人白细胞介素 2 (hIL 2 )基因导入绒癌耐药细胞系 ,观察hIL 2基因转染后对绒癌耐药细胞耐药性的逆转作用。方法　采用间歇诱导的方法 ,用鬼臼乙叉甙 (VP 16)诱导绒癌细胞系J... 详细信息

目的　建立绒毛膜癌 (绒癌 )的耐药细胞系 ,应用基因工程技术将人白细胞介素 2 (hIL 2 )基因导入绒癌耐药细胞系 ,观察hIL 2基因转染后对绒癌耐药细胞耐药性的逆转作用。方法　采用间歇诱导的方法 ,用鬼臼乙叉甙 (VP 16)诱导绒癌细胞系JEG 3 ,建立耐药细胞系 ,四甲基偶氮唑蓝比色法检测该耐药细胞系对多种化学治疗药物的耐药指数 ,及多种耐药基因包括肺耐药蛋白、多药耐药相关蛋白、谷胱甘肽转移酶、二氢叶酸还原酶和多药耐药基因 (MDR1)的mRNA表达情况。用逆转录聚合酶链反应技术 ,克隆hIL 2基因 ,将hIL 2基因插入真核表达载体pcDNA3 1( + )中 ,提取质粒 ,通过阳离子脂质体将hIL 2基因转染绒癌耐药细胞系 ,用新霉素筛选含hIL 2DNA片段的单个细胞克隆 ,检测转染hIL 2基因后该细胞耐药指数的变化 ,测定转染后细胞hIL 2和多种耐药基因mRNA的表达。结果　用VP 16采用间歇诱导法 ,成功建立绒癌的VP 16耐药细胞系JEG 3 /VP 16,并检测出MDR1mRNA表达。转染hIL 2基因后 ,绒癌细胞中检测出hIL 2mRNA表达 ,转染hIL 2基因的细胞的耐药指数降低 ,JEG 3 /VP 16细胞转染pcDNA3 1( + ) hIL 2后 ,对VP 16的耐药指数由 3 8 7降至 6 0～6 1,对甲氨蝶呤的耐药指数由 14 5降至 2 6～ 2 5 ,对更生霉素的耐药指数由

关键词：绒毛膜癌转染白细胞介素2 多药抗药性

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血清蛋白质指纹图谱模型在肾癌诊断中的应用

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中华泌尿外科杂志 2006年第8期27卷 527-529页

作者：张锐强谢静刘振元张玉石李汉忠邓碧萍李宁王彭中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院泌尿外科 1000730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 1000730

目的探讨肾癌早期诊断的新方法。方法血清标本66份,其中肾癌患者34份,健康对照组32份,应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得WCX2蛋白芯片表达图谱,采用Biomarker PatternsTM软件分析差异蛋白并初步建立肾癌血... 详细信息

目的探讨肾癌早期诊断的新方法。方法血清标本66份,其中肾癌患者34份,健康对照组32份,应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得WCX2蛋白芯片表达图谱,采用Biomarker PatternsTM软件分析差异蛋白并初步建立肾癌血清标志物诊断模型。结果在相对分子质量1000—50 000范围内共检测到101个蛋白峰,其中7个有统计学意义(P< 0．01)。所建立肾癌诊断模型敏感性为88％(30／34),特异性为91％(29／32)。采用此模型盲法分析42份未知血清标本,敏感性为80％(16／20),特异性为82％(18／22)。结论用SELDI—TOF—MS技术平台和生物信息学技术建立的诊断模型为肾癌早期诊断提供了新途径。

关键词：肾肿瘤癌肿瘤标记,生物学

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一种新的BBL Mycotube方法对酵母菌鉴定能力的评估

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中华检验医学杂志 2007年第4期30卷 465-466页

作者：陈翠珠徐英春窦红涛谢秀丽陈民钧中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 100730

目前临床上用于酵母菌鉴定的方法主要有色原底物显色鉴定法、API20CAUX和Vitek2CompactYBC方法。其中色原底物显色鉴定法操作最简单，但是能够鉴定的菌株范围有限，API20CAUX方法菌株鉴定范围广但操作复杂，BBLMycotube方法操作比API20C... 详细信息

目前临床上用于酵母菌鉴定的方法主要有色原底物显色鉴定法、API20CAUX和Vitek2CompactYBC方法。其中色原底物显色鉴定法操作最简单，但是能够鉴定的菌株范围有限，API20CAUX方法菌株鉴定范围广但操作复杂，BBLMycotube方法操作比API20CAUX方法简单，与色原底物显色鉴定法相比耗时相似，菌种鉴定范围更广。本试验以API20CAUX方法为标准，色原底物显色鉴定法和Vitek2CompactYBC方法作为补充方法，探讨BBLMycotube方法是否适用于临床酵母样真菌的鉴定。BBLMycotube是一种包含了8种反应底物，可以读取10种生化反应结果，各个成分互相间隔塑料管。采用封入套管内的金属接种针，挑取一个或多个纯菌落，将待测菌株一步接种到8种反应底物中。孵育48～72h后，读取结果，记录所有阳性和阴性反应。与结果比色板的颜色反应表进行比对，计算阳性编码。通过查询编码表，鉴定出受试菌株（鉴定率≥80％）。如果表中列出多种菌株名（鉴定率〈80％），可使用列出的补充试验进一步鉴定。

关键词：鉴定法酵母菌 BBL 菌株鉴定生化反应评估能力补充试验

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