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中华外科杂志 2005年第11期43卷 713-715页

作者：李秉璐曲强赵玉沛何小东王磊陈翠珠刘振元中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院医学实验中心 100730

目的观察在体外诱导人骨髓基质干细胞向肝细胞分化过程中白蛋白的表达特征。方法从手术切除弃置的人肋骨骨髓中分离基质细胞,在含有肝细胞生长因子(HGF)、淋巴细胞抑制因子(LIF)、纤维母细胞生长因子(FGF)等条件培养基中培养细胞。应用... 详细信息

目的观察在体外诱导人骨髓基质干细胞向肝细胞分化过程中白蛋白的表达特征。方法从手术切除弃置的人肋骨骨髓中分离基质细胞,在含有肝细胞生长因子(HGF)、淋巴细胞抑制因子(LIF)、纤维母细胞生长因子(FGF)等条件培养基中培养细胞。应用免疫荧光方法在共聚焦显微镜下观察肝细胞特异性白蛋白染色;同时,于诱导培养后多时间点测定培养细胞产生的白蛋白水平。结果人骨髓来源的基质干细胞在条件培养基中经诱导后,分化为成熟附壁细胞;细胞胞浆内肝细胞特异性标志物白蛋白呈阳性染色;已分化细胞合成并分泌白蛋白,其表达水平随细胞分化显示时间依赖性变化特征。结论人骨髓基质干细胞经诱导培养后可向成熟肝细胞分化并具有合成和分泌白蛋白功能,可以作为临床肝细胞移植及生物人工肝等治疗终末期肝病的重要肝细胞来源。

关键词：人骨髓基质干细胞分化过程白蛋白表达研究纤维母细胞生长因子肝细胞生长因子条件培养基显微镜下观察免疫荧光方法特异性标志物培养细胞诱导培养细胞分化细胞特异性时间依赖性肝细胞来源终末期肝病生物人工肝

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细胞表面分子在骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中的表达

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中国医学科学院学报 2007年第1期29卷 62-66,I0009页

作者：陈苗曲强沈悌张伸陈翠珠中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室北京100730

目的研究成人骨髓间充质干细胞(MSCs)在诱导条件下定向分化为成骨细胞过程中,细胞表面分子的表达及变化特征。方法从人骨髓中分离有核细胞,在含有15%胎牛血清、维生素C和β-甘油磷酸钠的α-MEM培养基中培养。在培养早期加入10-8mol/L地... 详细信息

目的研究成人骨髓间充质干细胞(MSCs)在诱导条件下定向分化为成骨细胞过程中,细胞表面分子的表达及变化特征。方法从人骨髓中分离有核细胞,在含有15%胎牛血清、维生素C和β-甘油磷酸钠的α-MEM培养基中培养。在培养早期加入10-8mol/L地塞米松(实验组)或保持基础培养状态(对照组1),同时部分细胞仅培养于α-MEM培养基中(对照组2)。于培养第7、12、17天分别收集实验组和各对照组细胞,用流式细胞方法观察细胞表面分子CD45、CD34、CD117、CD90和人白细胞抗原-DR(HLA-DR)的表达,并定量对比分析。结果成人骨髓MSCs在体外诱导条件下分化为具有成骨细胞特征的成熟细胞。培养第7天实验组、对照组1和对照组2均少量表达CD45,第12、17天CD45表达转为阴性。各组各时间点CD34、CD117表达均为阴性。培养第12天,实验组和各对照组细胞CD90表达均较第7天升高,以对照组升高明显。实验组细胞HLA-DR表达随着成骨细胞分化成熟逐渐上升,而对照组细胞HLA-DR表达下降。结论MSCs在诱导条件下可以向成骨细胞分化。细胞表面分子的表达在细胞分化过程中呈特征性改变,是成骨细胞分化早期的一个重要标志。

关键词：骨髓间充质干细胞成骨细胞细胞表面分子

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口腔鳞状细胞癌中蛋白酪氨酸磷酸酶基因的突变与表达

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中华口腔医学杂志 2009年第11期44卷 660-663页

作者：李倩赵继志陈永宁张韬周炼金晔中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院口腔科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 100730

目的探讨抑癌基因蛋白酪氨酸磷酸酶基因（phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome 10，PTEN）的突变和基因表达水平变化在口腔鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法应用聚合酶链反应（PCR）、基因测序方法检测42例口... 详细信息

目的探讨抑癌基因蛋白酪氨酸磷酸酶基因（phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome 10，PTEN）的突变和基因表达水平变化在口腔鳞状细胞癌发生、发展过程中的作用。方法应用聚合酶链反应（PCR）、基因测序方法检测42例口腔鳞状细胞癌和癌旁组织中VITEN第3、5、6、8外显子有无突变。应用半定量反转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测上述病例癌组织及癌旁组织中PTENmRNA的表达。结果发现2例口腔鳞状细胞癌组织中PTEN第5外显子发生点突变。42例口腔鳞状细胞癌和癌旁正常组织中均有PTENmRNA表达，口腔鳞状细胞癌组织中PTENmRNA表达量[PTEN／磷酸甘油醛脱氢酶（glyeeraldehyde phosphate dehydrogenase，GAPDH）]为（0．36±0．12），低于相应癌旁正常组织（0．64±0．09），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论PTENmRNA表达水平降低与口腔鳞状细胞癌的发生有一定关系。

关键词：癌鳞状细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶基因

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成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞的冻存与复苏研究

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中华外科杂志 2006年第21期44卷 1460-1462页

作者：曲强李秉璐赵玉沛陈翠珠闫旭王磊周立何小东中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基本外科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 100730

目的在体外诱导人骨髓基质干细胞向肝细胞分化成熟的基础上,将细胞深冻保存,观察冻存复苏后细胞存活率及功能状况。方法在含有多种细胞因子的条件培养基中体外诱导成人骨髓基质干细胞,当细胞显示成熟肝细胞特征后,将细胞分别冻存于90%... 详细信息

目的在体外诱导人骨髓基质干细胞向肝细胞分化成熟的基础上,将细胞深冻保存,观察冻存复苏后细胞存活率及功能状况。方法在含有多种细胞因子的条件培养基中体外诱导成人骨髓基质干细胞,当细胞显示成熟肝细胞特征后,将细胞分别冻存于90%胎牛血清(FBS)和10%二甲亚砜(DMSO)(A组)、10%FBS、30%甘油和60%培养基(B组)和10%FBS、10%DMSO和80%威斯康星器官保存液(UW液)(C组)中。冻存4周后复苏细胞,测定各组细胞存活率及白蛋白合成情况。结果成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞经冻存复苏后可恢复功能细胞形态,A、B和C组冻存液中细胞复苏后细胞存活率分别为(60·0±3·3)%、(91·0±2·6)%和(89·0±1·4)%,培养24h后检测上清液白蛋白浓度分别为(0·210±0·005)g/L、(0·340±0·020)g/L和(0·330±0·030)g/L。结论成人骨髓基质干细胞分化来源的肝细胞冻存复苏后仍保持较高的细胞存活率和功能,可作为临床肝细胞移植及生物人工肝的重要肝细胞来源。

关键词：干细胞肝细胞低温保藏细胞存活肝移植

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幼年起病的2例晚发型糖原贮积症Ⅱ型/Pompe病临床和基因分析

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中华儿科杂志 2007年第10期45卷 760-764页

作者：仇佳晶魏珉张为民施惠平中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院儿科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 100730 中国医学科学院基础医学研究所

目的对中国大陆地区幼年起病的晚发型糖原贮积症Ⅱ型(GSDⅡ,Pompe 病)患者进行临床和基因突变分析。方法对2例幼年起病的 Pompe 病患儿进行临床分析,提取患儿皮肤成纤维细胞及其父母的外周血 DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增α-1,4-葡萄... 详细信息

目的对中国大陆地区幼年起病的晚发型糖原贮积症Ⅱ型(GSDⅡ,Pompe 病)患者进行临床和基因突变分析。方法对2例幼年起病的 Pompe 病患儿进行临床分析,提取患儿皮肤成纤维细胞及其父母的外周血 DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增α-1,4-葡萄糖苷酶的19个外显子,测序,进行突变检测。同时对50例健康对照100个等位基因进行15号外显子的 PCR 扩增,测序,确定突变特征。结果 1例临床表现为进行性近端肌肉无力,肌张力低下;1例表现为肌容积减少,呼吸肌受累;2例均有肌酸磷酸肌酶升高,肌电图提示肌源性损害,肌活检呈空泡性改变,皮肤成纤维细胞α-1,4-葡萄糖苷酶活性测定明显低下。突变检测:测序发现4个杂合错义突变,例1为 c796 C>T,p.266Pro>Ser;c2105 G>A,p.702Arg>His;例2为 c2132 C>G,p.711Thr>Arg;c2167 G>A,p.723Val>Met。其中后3个为新突变,50例健康对照100个等位基因测序未发现同样突变。结论幼年起病的 Pompe 病患儿临床表现存在差异,呼吸肌受累情况影响其预后;检测到3个错义新突变,可能为致病突变。

关键词：糖原贮积病,Ⅱ型葡聚糖1,4-α-葡糖苷酶外显子突变

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家族性复发性葡萄胎的临床特征及遗传学分析

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中华妇产科杂志 2006年第3期41卷 177-181页

作者：赵峻向阳黄尚志万希润董敏胡韶毅何莲芝杨秀玉中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院分子细胞遗传实验教学中心 100730 皖南医学院附属医院妇产科

目的探讨家族性复发性葡萄胎(FRM)的临床及遗传学特征。方法回顾性分析2例FRM患者的临床资料,并对2例FRM及6例散发性葡萄胎患者及葡萄胎组织的DNA进行微卫星多态性检测,以鉴定葡萄胎的遗传学起源。结果2例FRM患者均为罕见的双亲来源的... 详细信息

目的探讨家族性复发性葡萄胎(FRM)的临床及遗传学特征。方法回顾性分析2例FRM患者的临床资料,并对2例FRM及6例散发性葡萄胎患者及葡萄胎组织的DNA进行微卫星多态性检测,以鉴定葡萄胎的遗传学起源。结果2例FRM患者均为罕见的双亲来源的完全性葡萄胎(BiCHM);6例散发性葡萄胎患者中,1例部分性葡萄胎为双亲三倍体,其余5例完全性葡萄胎均为孤雄完全性葡萄胎。2例FRM患者在葡萄胎之后都继发了侵蚀性葡萄胎或绒毛膜癌,并发生了肺转移,但经过化疗和(或)肺叶切除,均已达到完全缓解。结论从遗传学起源上分类,FRM常为BiCHM,具有较高的恶变率及转移率。通过基因分析可确定葡萄胎的遗传学起源,对评估预后有重要意义。

关键词：葡萄胎微卫星重复多态现象(遗传学)

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髌股关节骨关节病关节软骨、软骨下骨及滑膜组织超微结构的研究

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中国医学科学院学报 1996年第6期18卷 450-456页

作者：王凯林进郝泗城宇克莉毕平夏文李世英叶启彬中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院天津医科大学第二医院天津师范大学实验中心

对１０例髌股关节骨关节病患者病变关节软骨、软骨下骨及滑膜组织的超微结构进行了研究。实验结果表明：（１）髌股关节骨关节病患者关节软骨、软骨下骨及滑膜组织均呈不同程度超微结构变化。（２）髌股关节内侧间隙呈Ⅰ～Ⅱ级退变，主... 详细信息

对１０例髌股关节骨关节病患者病变关节软骨、软骨下骨及滑膜组织的超微结构进行了研究。实验结果表明：（１）髌股关节骨关节病患者关节软骨、软骨下骨及滑膜组织均呈不同程度超微结构变化。（２）髌股关节内侧间隙呈Ⅰ～Ⅱ级退变，主要由于该部位关节软骨缺乏相应的载荷刺激所致废用性退变；外侧间隙呈Ⅲ～Ⅳ级退变，主要由于股四头肌内侧头萎缩，髌骨半脱位，导致局部应力集中，关节面不断撞击、磨损所致。（３）软骨下骨呈强烈硬化趋势，其改变可先于、晚于或平行于关节软骨改变，变化规律与载荷性质有关。（４）Ⅰ～Ⅱ级软骨退变的修复组织更接近于正常软骨组织，而Ⅲ～Ⅳ级退变的修复组织则更像纤维软骨组织，两者差异可能由于其修复组织的来源不同所致。（５）滑膜组织的改变则为继发于关节软骨退变的非特异性炎性反应，并可进一步加重前者退变。（６）临床对Ⅰ～Ⅱ级病变可行保守治疗，Ⅲ～Ⅳ级病变则需行髌股关节表面置换术。

关键词：髌股关节骨关节病软骨滑膜组织超微结构

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血清蛋白质指纹图谱模型在肾癌诊断中的应用

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中华泌尿外科杂志 2006年第8期27卷 527-529页

作者：张锐强谢静刘振元张玉石李汉忠邓碧萍李宁王彭中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院泌尿外科 1000730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 1000730

目的探讨肾癌早期诊断的新方法。方法血清标本66份,其中肾癌患者34份,健康对照组32份,应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得WCX2蛋白芯片表达图谱,采用Biomarker PatternsTM软件分析差异蛋白并初步建立肾癌血... 详细信息

目的探讨肾癌早期诊断的新方法。方法血清标本66份,其中肾癌患者34份,健康对照组32份,应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得WCX2蛋白芯片表达图谱,采用Biomarker PatternsTM软件分析差异蛋白并初步建立肾癌血清标志物诊断模型。结果在相对分子质量1000—50 000范围内共检测到101个蛋白峰,其中7个有统计学意义(P< 0．01)。所建立肾癌诊断模型敏感性为88％(30／34),特异性为91％(29／32)。采用此模型盲法分析42份未知血清标本,敏感性为80％(16／20),特异性为82％(18／22)。结论用SELDI—TOF—MS技术平台和生物信息学技术建立的诊断模型为肾癌早期诊断提供了新途径。

关键词：肾肿瘤癌肿瘤标记,生物学

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一种新的BBL Mycotube方法对酵母菌鉴定能力的评估

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中华检验医学杂志 2007年第4期30卷 465-466页

作者：陈翠珠徐英春窦红涛谢秀丽陈民钧中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室 100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 100730

目前临床上用于酵母菌鉴定的方法主要有色原底物显色鉴定法、API20CAUX和Vitek2CompactYBC方法。其中色原底物显色鉴定法操作最简单，但是能够鉴定的菌株范围有限，API20CAUX方法菌株鉴定范围广但操作复杂，BBLMycotube方法操作比API20C... 详细信息

目前临床上用于酵母菌鉴定的方法主要有色原底物显色鉴定法、API20CAUX和Vitek2CompactYBC方法。其中色原底物显色鉴定法操作最简单，但是能够鉴定的菌株范围有限，API20CAUX方法菌株鉴定范围广但操作复杂，BBLMycotube方法操作比API20CAUX方法简单，与色原底物显色鉴定法相比耗时相似，菌种鉴定范围更广。本试验以API20CAUX方法为标准，色原底物显色鉴定法和Vitek2CompactYBC方法作为补充方法，探讨BBLMycotube方法是否适用于临床酵母样真菌的鉴定。BBLMycotube是一种包含了8种反应底物，可以读取10种生化反应结果，各个成分互相间隔塑料管。采用封入套管内的金属接种针，挑取一个或多个纯菌落，将待测菌株一步接种到8种反应底物中。孵育48～72h后，读取结果，记录所有阳性和阴性反应。与结果比色板的颜色反应表进行比对，计算阳性编码。通过查询编码表，鉴定出受试菌株（鉴定率≥80％）。如果表中列出多种菌株名（鉴定率〈80％），可使用列出的补充试验进一步鉴定。

关键词：鉴定法酵母菌 BBL 菌株鉴定生化反应评估能力补充试验

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黏多糖贮积症Ⅲ型的鉴别诊断与产前诊断

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中华儿科杂志 2008年第6期46卷 407-410页

作者：张为民施惠平孟岩李贝特邱正庆刘俊涛中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院儿科100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系100730

目的建立以人工合成荧光底物测定乙酰肝素N-硫酸酯酶(SGSH),α-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAGLU)活性的方法,应用这两种方法对黏多糖贮积症Ⅲ型中的A、B亚型(MPSⅢA和ⅢB)病例进行鉴别诊断,并对MPSⅢB高危妊娠的孕妇进行了产前诊断,同时从分子... 详细信息

目的建立以人工合成荧光底物测定乙酰肝素N-硫酸酯酶(SGSH),α-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAGLU)活性的方法,应用这两种方法对黏多糖贮积症Ⅲ型中的A、B亚型(MPSⅢA和ⅢB)病例进行鉴别诊断,并对MPSⅢB高危妊娠的孕妇进行了产前诊断,同时从分子遗传学方面对MPSⅢA患儿进行了SGSH基因分析.方法采用人工合成的荧光底物(4-甲基伞形酮-α-D-N-硫酸葡萄糖苷4-methylumbelliferyl-α-***,4-甲基伞形酮-N-乙酰-α-葡萄糖苷4-methylumbelliferyl-α-N-acetylglucosaminide)测定疑似患儿白细胞和血浆中SGSH及NAGLU活性,在收集的12例患儿中,女4例,男8例,年龄3~10岁.来自10个无相关的家庭.用MPSⅢA的患儿外周血白细胞DNA进行SGSH基因的外显子PCR扩增,并通过的序列测定确定突变位置.用绒毛或经培养的羊水细胞为检材,对MPSⅢB高危妊娠的孕妇进行产前诊断.结果获得中国正常人白细胞中SGSH活性正常值4.4~8.1 nmot/(17 h·mg蛋白),各种组织中NAGLU活性正常值:血浆中为33.3~62.4 nmoL/(4 h·ml),绒毛组织为44.9~91.7 nmol/(17 h·mg蛋白),经培养的羊水细胞为53.2-82.2 nmol/(17 h·mg蛋白);在12例疑似患儿中确诊了7例MPSⅢA(其中两例为同胞),5例MPSⅢB患者(其中2例为同胞),SGSH基因分析发现6种突变类型,已知突变5种(G191R,D235N,R377C,E447K和R233X),插入突变1种(D219Wfs264X),此插入突变为新生突变.3例MPSⅢB产前诊断中,2例胎儿正常,1例胎儿受累.结论应用荧光法测定SGSH和NAGLU酶活性是敏感、可靠、快速的方法,可用于MPSⅢA和ⅢB病例的鉴别诊断及产前诊断;SGSH基因分析方法成本低,突变检出率高,可用于MPSⅢA的诊断和产前诊断.

关键词：黏多糖累积病Ⅲ型诊断,鉴别产前诊断突变

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