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洛伐他汀对高糖时人肾小管上皮细胞核因子-κB和组织纤溶酶原激活物及其抑制物的作用

中华肾脏病杂志 2001年第6期17卷 399-403页

作者：陈丽萌李学旺林嘉友李航段琳中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基础医学研究所免疫室北京100730

目的观察高糖环境中，肾小管上皮细胞组织纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）及其抑制物－１（ＰＡＩ－１）异常与核因子（ＮＦ）－ｋＢ激活的关系，并探讨洛伐他汀对其改善作用。方法体外培养人肾小管上皮细胞（ＨＫＣ），用高糖刺激ＨＫＣ... 详细信息

目的观察高糖环境中，肾小管上皮细胞组织纤溶酶原激活物（ｔＰＡ）及其抑制物－１（ＰＡＩ－１）异常与核因子（ＮＦ）－ｋＢ激活的关系，并探讨洛伐他汀对其改善作用。方法体外培养人肾小管上皮细胞（ＨＫＣ），用高糖刺激ＨＫＣ细胞，并与洛伐他汀共孵育。发色底物法检测细胞上清中ＰＡＩ－１和ｔＰＡ活性；ＲＴ－ＰＣＲ方法观察ＨＫＣ细胞合成ＰＡＩ－１和ｔＰＡｍＲＮＡ表达；共聚焦显微镜和免疫印迹法检测核转录因子ＮＦ－ｋＢ的作用。结果高糖可激活ＮＦ－ｋＢ（ｐ６５），并使ＨＫＣ细胞培养上清中ＰＡＩ－１活性和ｍＲＮＡ表达增加，ｔＰＡ活性和ｍＲＮＡ表达降低；洛伐他汀可以部分或全部逆转高糖的作用。结论高糖促使ＨＫＣ细胞ＰＡＩ－１和ｔＰＡ异常表达，可能与ＮＦ－ｋＢ激活有关。洛伐他汀可以通过非降脂的甲羟戊酸途径逆转高糖对ＨＫＣ细胞ＮＦ－ｋＢ和ＰＡＩ－１与ｔＰＡ的影响。

关键词：洛伐他汀纤溶酶原激活物核因子-kB 葡萄糖肾小管上皮细胞糖尿病肾病

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阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者骨髓正常及异常造血细胞增殖及生存特性初探

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中华血液学杂志 1997年第10期18卷 517-520页

作者：李强张之南许彩民王美健沈悌武永吉中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的：探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者正常及异常造血细胞的增殖及生存特性。方法：用ＣＤ５９单抗及羊抗鼠ＩｇＧ免疫磁珠将６例患者骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ）分选为ＣＤ５９＋及ＣＤ５９－两群，分别进行体外培养并... 详细信息

目的：探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者正常及异常造血细胞的增殖及生存特性。方法：用ＣＤ５９单抗及羊抗鼠ＩｇＧ免疫磁珠将６例患者骨髓单个核细胞（ＢＭＭＮＣ）分选为ＣＤ５９＋及ＣＤ５９－两群，分别进行体外培养并与正常对照比较。结果：ＰＮＨ患者ＣＤ５９＋及ＣＤ５９－ＢＭＭＮＣ的体外增殖及生存能力均弱于正常ＢＭＭＮＣ；患者体内“正常”的ＣＤ５９＋ＢＭＭＮＣ生长能力反较异常的ＣＤ５９－细胞显著降低；患者ＣＤ５９＋细胞培养后出现ＣＤ５９抗原的丢失，正常对照则无此改变。结论：ＰＮＨ患者ＢＭＭＮＣ中ＣＤ５９－的异常造血细胞具有相对的生长优势，ＣＤ５９＋的ＢＭＭＮＣ并非真正“正常”，可能存在尚未明了的某种缺陷；ＰＮＨ发病机制复杂，异常细胞除可因ＰＩＧ－Ａ基因突变产生外，还可能因ＧＰＩ蛋白的丢失而产生。

关键词：血红蛋白尿症 PNA 骨髓 CD59抗原

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Reversing drug resistance in the ovarian carcinoma cell line SKOV3/mdr1 in vitro by antisense oligodeoxynucleotides

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Chinese Medical Journal 2001年第9期114卷 33-36,105页

作者：潘凌亚童英金滢周生张毅杨秀玉毛宁中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科北京100730 军事医学科学院基础医学研究所细胞生物学实验室北京100850

Objective　To investigate the effect of multidrug resistance gene 1 (mdr1) antisense oligodeoxynucleotides (ODNs) on reversing multidrug resistance in the drug resistant ovarian carcinoma cell line SKOV3/mdr1. Methods　The ovarian carcinoma cell line SKOV3 transducted with a human multidrug resistance gene (mdr1) served as the drug resistant model (SKOV3/mdr1). The mdr1 antisense ODNs was transfected into SKOV3/mdr1 cells while mediated by lipofectamine. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to measure the expression and the amount of the mdr1 mRNA in the cells. The positive rate and function of the mdr1 gene product P-glycoprotein (Pgp) in the mdr1 antisense ODNs treated SKOV3/mdr1 cells were determined by flow cytometry and rhodamine 123 efflux. Drug resistance in the SKOV3/mdr1 cell line was observed by MTT assay and cell colony culture. Results　The mdr1 mRNA level was decreased to about 60% of that of β-actin after mdr1 antisense ODNs treatment. The Pgp positive rate of mdr1 antisense ODNs treated SKOV3/mdr1 cells decreased from 100% to 52.6% (P<0.01). The intracellular rhodamine 123 retention was increased from 9.1% to 33.8% (P<0.01). The chemoresistance to taxol decreased to 58% of SKOV3/mdr1 with mdr1 antisense ODN treatment. Compared with SKOV3/mdr1 cells in the control group, under a certain range of drug concentrations, the number of drug resistance colonies in mdr1 antisense ODNs treated SKOV3/mdr1 cells for taxol and doxorubicin decreased by 8.6±0.8 fold and 3.1±0.6 fold, respectively. Some non-specific functions during oligodeoxyncleotide treatment was also detected. Conclusion　mdr1 expression in the SKOV1/mdr1 cell line was partially inhibited after mdr1 antisense ODNs treatment at the mRNA and protein level, increasing the chemotherapy sensitivity of this drug resistant ovarian carcinoma cell line.

关键词： oligodeoxynucleotides antisense · ovarian · neoplasma · multiple drug resistance · gene mdr1

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幽门螺杆菌空泡毒素基因的单链构象多态性研究

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中华医学杂志 1999年第3期79卷 181-184页

作者：彭惠潘国宗曹世植方福德中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所分子生物学国家重点实验室

目的应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析幽门螺杆菌（Ｈｐ）的空泡毒素基因（ｖａｃＡ）多态性，借此区分不同来源的Ｈｐ。方法用ｖａｃＡ为模板设计的引物对１５９例各种胃、十二指肠疾病患者胃粘膜行ＰＣＲ扩增，其产物作ＳＳＣＰ分析和Ｓｏｕ... 详细信息

目的应用ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析幽门螺杆菌（Ｈｐ）的空泡毒素基因（ｖａｃＡ）多态性，借此区分不同来源的Ｈｐ。方法用ｖａｃＡ为模板设计的引物对１５９例各种胃、十二指肠疾病患者胃粘膜行ＰＣＲ扩增，其产物作ＳＳＣＰ分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交。对３例具不同ＳＳＣＰ带型的十二指肠溃疡（ＤＵ）患者的Ｈｐ进行基因序列分析。结果ｖａｃＡ的两种产物ｖａｃＡ１和ｖａｃＡ２各占７６．５％（１１４／１４９）和２３．５％（３５／１４９），每个胃粘膜仅能扩增出一种产物。８种不同的ＳＳＣＰ带型中以Ｂ型为最多（４５．７％），ＤＵ占８０％。ＤＮＡ测序显示Ｈｐ的ｖａｃＡ信号序列有不同程度的差异。结论不同ＨｐｖａｃＡ基因的变异度较大，利用ＰＣＲＳＳＣＰ可将不同来源的Ｈｐ区分开，从而可用于Ｈｐ流行病学研究和治疗后的追踪观察，鉴别Ｈｐ的感染和重复感染等。

关键词：幽门螺杆菌空泡毒素基因单链构象胃肠疾病

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黏多糖贮积症Ⅲ型的鉴别诊断与产前诊断

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中华儿科杂志 2008年第6期46卷 407-410页

作者：张为民施惠平孟岩李贝特邱正庆刘俊涛中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院中心实验室100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院儿科100730 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系100730

目的建立以人工合成荧光底物测定乙酰肝素N-硫酸酯酶(SGSH),α-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAGLU)活性的方法,应用这两种方法对黏多糖贮积症Ⅲ型中的A、B亚型(MPSⅢA和ⅢB)病例进行鉴别诊断,并对MPSⅢB高危妊娠的孕妇进行了产前诊断,同时从分子... 详细信息

目的建立以人工合成荧光底物测定乙酰肝素N-硫酸酯酶(SGSH),α-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAGLU)活性的方法,应用这两种方法对黏多糖贮积症Ⅲ型中的A、B亚型(MPSⅢA和ⅢB)病例进行鉴别诊断,并对MPSⅢB高危妊娠的孕妇进行了产前诊断,同时从分子遗传学方面对MPSⅢA患儿进行了SGSH基因分析.方法采用人工合成的荧光底物(4-甲基伞形酮-α-D-N-硫酸葡萄糖苷4-methylumbelliferyl-α-***,4-甲基伞形酮-N-乙酰-α-葡萄糖苷4-methylumbelliferyl-α-N-acetylglucosaminide)测定疑似患儿白细胞和血浆中SGSH及NAGLU活性,在收集的12例患儿中,女4例,男8例,年龄3~10岁.来自10个无相关的家庭.用MPSⅢA的患儿外周血白细胞DNA进行SGSH基因的外显子PCR扩增,并通过的序列测定确定突变位置.用绒毛或经培养的羊水细胞为检材,对MPSⅢB高危妊娠的孕妇进行产前诊断.结果获得中国正常人白细胞中SGSH活性正常值4.4~8.1 nmot/(17 h·mg蛋白),各种组织中NAGLU活性正常值:血浆中为33.3~62.4 nmoL/(4 h·ml),绒毛组织为44.9~91.7 nmol/(17 h·mg蛋白),经培养的羊水细胞为53.2-82.2 nmol/(17 h·mg蛋白);在12例疑似患儿中确诊了7例MPSⅢA(其中两例为同胞),5例MPSⅢB患者(其中2例为同胞),SGSH基因分析发现6种突变类型,已知突变5种(G191R,D235N,R377C,E447K和R233X),插入突变1种(D219Wfs264X),此插入突变为新生突变.3例MPSⅢB产前诊断中,2例胎儿正常,1例胎儿受累.结论应用荧光法测定SGSH和NAGLU酶活性是敏感、可靠、快速的方法,可用于MPSⅢA和ⅢB病例的鉴别诊断及产前诊断;SGSH基因分析方法成本低,突变检出率高,可用于MPSⅢA的诊断和产前诊断.

关键词：黏多糖累积病Ⅲ型诊断,鉴别产前诊断突变

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酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶活性的调节

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中国医学科学院学报 2007年第2期29卷 241-245页

作者：高金明冯起平左瑾方福德蒋磊郭子健中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院呼吸内科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶(TPST)1和TPST2的调节作用。方法以人cDNA为模板,采用聚合酶链反应方法扩增人TPST1和TPST2基因野生型的全长cDNA序列,并融合入人IgG1的Fc编码区域;采用定点突变方法将TPST1和TPST2蛋白中可硫... 详细信息

目的研究酪氨酸硫化修饰对酪氨酸硫化转移酶(TPST)1和TPST2的调节作用。方法以人cDNA为模板,采用聚合酶链反应方法扩增人TPST1和TPST2基因野生型的全长cDNA序列,并融合入人IgG1的Fc编码区域;采用定点突变方法将TPST1和TPST2蛋白中可硫化的酪氨酸突变为苯丙氨酸。针对TPST1(259～275位核苷酸)和TPST2(73～94位核苷酸)基因,分别构建小干扰RNA(shRNA)1和shRNA2重组质粒。测定所有构建质粒开放读框序列。证实序列正确后,将上述质粒分别转染人肾胚胎上皮细胞(HEK)293T。24h后将细胞分成3份:1份用于35S-蛋氨酸/半胱氨酸或35S-亚硫酸钠标记,48h后再进行免疫沉淀反应;1份用于125I标记配基结合;1份用于流式细胞仪检测受体的表达水平。结果TPST1326位和TPST2325位酪氨酸在翻译后被硫化修饰,这一翻译后修饰被特异性的硫化抑制剂shRNA1和shRNA2及非特异性的硫化抑制剂NaClO3显著抑制。shRNA1和shRNA2可显著抑制补体3a和5a受体的硫化,并进一步降低这两种受体与特异性配基的结合效率。结论TPST1和TPST2翻译后受酪氨酸硫化修饰的调节,硫化抑制剂shRNA可以显著抑制TPST的活性,并进一步抑制补体3a和5a受体结合其特异性配基的作用。

关键词：硫化酪氨酸酪氨酸硫化转移酶

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加巴喷丁对神经病理性疼痛小鼠脑皮层组织内差异表达基因的影响

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基础医学与临床 2007年第6期27卷 652-655页

作者：陈绍辉赵晶罗爱伦黄宇光左萍萍杨楠郝文宇中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院麻醉科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005

目的观察加巴喷丁对神经病理性疼痛小鼠脑皮层基因表达差异的影响。方法120只小鼠随机分为对照(C)、假手术(S)和模型(M)组,各组再按不同给药分为生理盐水(P)和加巴喷丁(G)两个亚组(最终分为C+P、C+G、S+P、S+G、M+P、M+G六组)。部分坐... 详细信息

目的观察加巴喷丁对神经病理性疼痛小鼠脑皮层基因表达差异的影响。方法120只小鼠随机分为对照(C)、假手术(S)和模型(M)组,各组再按不同给药分为生理盐水(P)和加巴喷丁(G)两个亚组(最终分为C+P、C+G、S+P、S+G、M+P、M+G六组)。部分坐骨神经结扎2周后开始腹腔给药,给药4周后留取大脑皮层。通过手术侧足行为学和机械痛阈的改变来确认神经病理性疼痛模型成功及观察加巴喷丁的疗效。选择S+P、M+P和M+G三组做基因表达差异检测,并用实时PCR验证部分表达有显著差异的基因。结果M+P和S+P相比较,脑源性神经生长因子、神经肽Y、Pleiotrophin等基因显著下调。M+G和M+P相比较,上述基因显著上调。结论加巴喷丁镇痛的脑机制可能与脑源性神经生长因子、神经肽Y、Pleiotrophin等基因的上调有关。

关键词：神经病理性疼痛加巴喷丁脑源性神经生长因子神经肽Y pleiotrophin

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凋亡及其相关基因在实验性自身免疫性内耳病小鼠内耳组织中的表达

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2005年第8期40卷 561-565页

作者：柴亮高扬顾之燕倪道凤中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院耳鼻咽喉科中国医学科学院基础医学研究所神经免疫教研室中华医学会

目的探讨凋亡及其相关基因在自身免疫性内耳病形成和发展中的作用。方法选用近交系C57BL/6小鼠随机数字表法分为正常对照组和免疫7、14、21、28d组,每组16只。提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原,与等量完全弗氏佐剂,百日咳杆菌一次免疫实验... 详细信息

目的探讨凋亡及其相关基因在自身免疫性内耳病形成和发展中的作用。方法选用近交系C57BL/6小鼠随机数字表法分为正常对照组和免疫7、14、21、28d组,每组16只。提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原,与等量完全弗氏佐剂,百日咳杆菌一次免疫实验组动物,制备自身免疫性内耳病动物模型,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediatedd-UTPnickend-labing,TUNEL)检测内耳中的细胞凋亡,应用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Fas、FasL及bcl-2在内耳的表达。结果正常小鼠内耳组织中,TUNEL染色阳性细胞极为少见,偶尔在Corti器或球囊斑的支持细胞发现。免疫7d后,内毛细胞和少量的血管纹边缘细胞TUNEL染色阳性,14d后TUNEL染色阳性的细胞数量及种类显著增加,但外毛细胞、螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞免疫前后均未见凋亡表达。免疫组化染色显示,正常小鼠内耳中Fas表达广泛,FasL在部分螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞表达,bcl-2仅在螺旋神经节细胞、前庭神经节细胞有较强表达。免疫后FasL在各种组织均有较强表达,bcl-2在外毛细胞出现表达,在耳蜗神经元细胞的表达增加。RT-PCR检测正常小鼠内耳组织的FasmRNA、FasLmRNA、bcl-2mRNA均为阳性,FasLmRNA低水平表达,免疫后升高,在2周达到高峰后逐渐下降;bcl-2mRNA在免疫后进行性升高。结论Fas/FasL信号系统介导的凋亡与自身免疫性内耳病的发生、发展过程关系密切,bcl-2对内耳中Fas/FasL介导的凋亡有重要的调节作用。

关键词：凋亡基因实验性自身免疫性内耳病小鼠内耳组织基因表达

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内源性脑啡肽与加巴喷丁的脑皮层镇痛机制无关

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中国科学（C辑） 2009年第10期39卷 986-990页

作者：陈绍辉赵晶黄宇光罗爱伦左萍萍杨楠郝文宇中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院麻醉科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室北京100005

本研究为探讨加巴喷丁的脑皮层镇痛机制是否与内源性脑啡肽相关.90只小鼠随机分为对照组(C)、假手术组(S)和模型组(M),各组再按不同给药分为生理盐水(P)和加巴喷丁(G)两个亚组(最终分为C+P,C+G,S+P,S+G,M+P,M+G6组).部分坐骨神经结扎2... 详细信息

本研究为探讨加巴喷丁的脑皮层镇痛机制是否与内源性脑啡肽相关.90只小鼠随机分为对照组(C)、假手术组(S)和模型组(M),各组再按不同给药分为生理盐水(P)和加巴喷丁(G)两个亚组(最终分为C+P,C+G,S+P,S+G,M+P,M+G6组).部分坐骨神经结扎2周后开始腹腔给药,给药4周后留取大脑皮层.通过手术侧足机械痛阈和热痛敏的改变来确认神经病理性疼痛模型成功及观察加巴喷丁的疗效.选择S+P,M+P和M+G3组做前脑啡肽原(ppENK)基因表达差异检测,并用Real-TimePCR验证,同时ELISA法测定脑皮层组织脑啡肽含量.M+P与S+P相比较、M+G和M+P相比较,均未见ppENK基因表达有显著性差异;S+P,S+G,M+P和M+G组间脑皮层组织中脑啡肽含量也无显著性差异.研究表明,内源性脑啡肽可能与加巴喷丁的脑皮层镇痛机制无关.

关键词：神经病理性疼痛加巴喷丁脑啡肽脑皮层

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北京地区人乳头瘤病毒16 E6E7基因变异和序列分析

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中华皮肤科杂志 2003年第11期36卷 650-652页

作者：左亚刚王家璧许雪梅朱明昭刘方司静懿宋国兴中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院皮肤科北京100730 中国协和医科大学基础医学研究所生物物理室

目的了解北京地区人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7结构特点,为研制HPV16疫苗奠定基础。方法从HPV感染组织中提取DNA,PCR鉴别其型别,从单独HPV16感染的标本中分离HPV16E6E7基因,克隆入载体pGEM-3ZF,进行双向测序,与德国标准株进行比较。结果... 详细信息

目的了解北京地区人乳头瘤病毒(HPV)16型E6E7结构特点,为研制HPV16疫苗奠定基础。方法从HPV感染组织中提取DNA,PCR鉴别其型别,从单独HPV16感染的标本中分离HPV16E6E7基因,克隆入载体pGEM-3ZF,进行双向测序,与德国标准株进行比较。结果构建了北京地区HPV16E6E7的重组质粒。测序结果表明该基因全长为776bp,与已发表的德国标准株长度相等,3处核苷酸发生变异,同源性99.7%。分别位于第60、96和565nt(相当于HPV16全长序列中第142、178和647nt),2处位于E6区,1处位于E7,其对应氨基酸分别为第20、32和188个氨基酸,分别由Pro(CCA)、Asp(GAT)和Asn(AAT)变异为Pro(CCG)、Glu(GAG)和Ser(AGT)。结论北京地区HPV16E6E7基因结构与德国标准株存在差异。

关键词：北京人乳头瘤病毒16型 E6E7基因聚合酶链反应基因变异

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