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毕赤酵母表达的neurturin对恒河猴帕金森氏病模型中黑质多巴胺能神经元的保护作用

生物化学与生物物理进展 2004年第8期31卷 722-726页

作者：李鸿钧苏婷马雁冰和占龙鲁帅尧戴长柏孙茂盛中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650118

帕金森氏病 (PD)是由于多巴胺能神经元变性、坏死 ,导致黑质纹状体系统的多巴胺含量下降而引起的一种神经系统退行性疾病 ,目前还没有一种很好的方法能使之治愈 .Neurturin (NTN)能特异地作用于中脑多巴胺能神经元 ,对该类神经元具营... 详细信息

帕金森氏病 (PD)是由于多巴胺能神经元变性、坏死 ,导致黑质纹状体系统的多巴胺含量下降而引起的一种神经系统退行性疾病 ,目前还没有一种很好的方法能使之治愈 .Neurturin (NTN)能特异地作用于中脑多巴胺能神经元 ,对该类神经元具营养和保护作用 .经静脉注射 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)诱导恒河猴产生帕金森氏病模型 ,并在NTN治疗组 ,注射MPTP之前 4 8h脑室内注射重组毕赤酵母表达的人NTN 1mg .结果表明 :模型组猴均逐渐出现了PD症状 ,而NTN治疗组猴 ,PD症状比较轻或不明显 ;荧光分光光度法测定MPTP模型组猴黑质、壳核和尾状核多巴胺 (DA)、 5 羟色胺 (5 HT)和 5 羟吲哚乙酸 (5 HIAA)的含量结果与正常对照组相比均显著降低 ,NTN治疗组猴的黑质、壳核和尾状核中的DA、 5 HT和 5 HIAA与对照组相比无显著性差异 ,而与模型组相比 ,DA、 5 HT和 5 HIAA含量均明显增加 ;光镜检查MPTP模型组猴黑质神经元细胞明显脱失 ,而NTN治疗组猴黑质神经元细胞丢失不明显 ,与正常对照组猴无差别 .上述结果表明 ,制备的重组人NTN在恒河猴体内能保护中脑黑质多巴胺能神经元不受MPTP的损伤 ,使其DA含量及多巴胺能神经元维持正常。

关键词：帕金森氏病多巴胺能神经元变性坏死毕赤酵母表达

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指数富集配基的系统进化原理及应用进展

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生物化学与生物物理进展 2002年第6期29卷 855-859页

作者：刘晓李长友陈元鼎中国医学科学院中国协和医科大学医学生物研究所昆明600118

过去十几年 ,指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术得到了充分的发展 ,目前已经成为在数量众多的靶分子中 ,高亲和性和特异性地确定适配子的一种崭新的方法 .SELEX的流程即是人工合成随机寡核苷酸序列、适配子筛选、扩增、再循环的过程 ... 详细信息

过去十几年 ,指数富集配基的系统进化 (SELEX)技术得到了充分的发展 ,目前已经成为在数量众多的靶分子中 ,高亲和性和特异性地确定适配子的一种崭新的方法 .SELEX的流程即是人工合成随机寡核苷酸序列、适配子筛选、扩增、再循环的过程 .在这一过程中 ,适配子修饰基团文库的应用使得SELEX流程更加经济、快捷、高通量 .回顾了SELEX的研究和应用 ,期待着这一方法能够在理论和实践上得到进一步的发展 .

关键词：指数富集配基系统进化原理应用适配子 SELEX

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Ⅲ型脊髓灰质炎病毒感染转基因小鼠的研究

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中国医学科学院学报 1998年第1期20卷 70-75页

作者：郭仁陈淑范罗其胜王庆玲易红昆詹琼芬中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所

目的验证ＰＶＲＴｇ２１转基因小鼠是否可作为脊髓灰质炎病毒的动物模型。方法应用３个不同毒力的Ⅲ型脊髓灰质炎病毒株（Ｓａｂｉｎ－３，Ｖａｃｃｉｎｅ３２１和Ｌｅｏｎ株）对能编码脊髓灰质炎病毒受体基因的转基因小鼠（ＰＶＲＴｇ... 详细信息

目的验证ＰＶＲＴｇ２１转基因小鼠是否可作为脊髓灰质炎病毒的动物模型。方法应用３个不同毒力的Ⅲ型脊髓灰质炎病毒株（Ｓａｂｉｎ－３，Ｖａｃｃｉｎｅ３２１和Ｌｅｏｎ株）对能编码脊髓灰质炎病毒受体基因的转基因小鼠（ＰＶＲＴｇ２１）进行感染性实验。结果经脊髓接种，均可引起临床麻痹和神经细胞的特异性损伤。其表现随毒力的不同而不同，３个毒株的小鼠半数致麻痹剂量（ＰＤ５０）分别为１０￣１．１，１０￣２．６和１０￣４．９７ＴＣＩＤ＿５０，接种不同病毒引起的中枢神经系统组织学损伤也有明显的差别。结论ＰＶＲＴｇ２１转基因小鼠有可能成为评价脊髓灰质炎病毒和疫苗的神经毒力，研究病毒的变异和实施流行病监视的一种有用的动物模型。

关键词：脊髓灰质炎病毒转基因动物模型

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两种病毒与细胞结合诱导的原癌基因早期表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第2期32卷 145-148页

作者：李琦涵董承红王炯王丽春孙明杨芳中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所!昆明650118

脊髓灰质炎病毒和单纯疱疹病毒I型结合人二倍体细胞后 1h内 ,导致了不同的早期基因形式的原癌基因表达反应 ,其主要表现为c fos、src等的表达增强或抑制。

关键词：脊髓灰质炎病毒单纯疱疹病毒早期原癌基因反应

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一个由HSVⅠ诱导的类SR蛋白新基因的克隆

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第6期17卷 729-732页

作者：董承红,王丽春,赵红玲,孙明,刘龙丁,李琦涵中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所中国医学科学院中国协

根据mRNA差异显示分析 ,由单纯疱疹病毒 (HSV)Ⅰ型结合人成纤维细胞膜受体后 2h诱导产生的早期基因cDNA库中 ,分离到一个编码具有SR蛋白结构特征的新基因 ,该基因长 90 4bp .编码产生的蛋白含 12 1个氨基酸残基 ,分子量 14 9kD ,具有RS... 详细信息

根据mRNA差异显示分析 ,由单纯疱疹病毒 (HSV)Ⅰ型结合人成纤维细胞膜受体后 2h诱导产生的早期基因cDNA库中 ,分离到一个编码具有SR蛋白结构特征的新基因 ,该基因长 90 4bp .编码产生的蛋白含 12 1个氨基酸残基 ,分子量 14 9kD ,具有RS重复区和PPLP结构域 ,但不具备SR蛋白家族所特有的RNA识别区域 (RRM) .主要分布于细胞质内 ,仅在细胞膜相应受体与HSVⅠ结合后特异产生

关键词： HSVⅠ 早期基因反应 SR-15蛋白克隆

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重组杆状病毒表达轮状病毒SA11毒株VP4蛋白

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中国医学科学院学报 1997年第1期19卷 48-53页

作者：孙茂盛 SusanaGiambiagi OscarBurrone 中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650107

从培养的SA11病毒中提取病毒dsRNA作为模板，经逆转录、多聚酶链反应（RT-PCR）获得编码VP4蛋白的全基因，全长2362bp.完整的VP4基因克隆到杆状病毒转移载体pVL-1393中，转染Sf9细胞进行同源重组，用声、杂交法筛选出表达VP4蛋白的重组... 详细信息

从培养的SA11病毒中提取病毒dsRNA作为模板，经逆转录、多聚酶链反应（RT-PCR）获得编码VP4蛋白的全基因，全长2362bp.完整的VP4基因克隆到杆状病毒转移载体pVL-1393中，转染Sf9细胞进行同源重组，用声、杂交法筛选出表达VP4蛋白的重组杆状病毒。表达的VP4蛋白能被抗轮状病毒抗体所识别，表达产量约占总蛋白的10％。用表达的VP4蛋白免疫动物后可产生高水平抗亲本SA11毒株中和抗体。抗体能阻断SA11病毒在MA104细胞上引起的细胞病变（CPE），免疫荧光和Westernblot也证实抗体可特异性识别轮状病毒抗原。结果表明，重组杆状病毒表达的VP4蛋白具有良好的抗原性和免疫原性，可望用VP4基因研制轮状病毒重组疫苗和亚单位疫苗。

关键词：轮状病毒 VP4蛋白重组杆状病毒疫苗

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甲型肝炎减毒活疫苗H_2株在狨猴体内传代的实验

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中华预防医学杂志 1997年第5期31卷 260-262页

作者：黄小琴练幼辉王庆龄王祥杨净思白惠珠曹逸云中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所

为探索甲型肝炎减毒活疫苗的残余毒力及毒力返祖的可能性，将血清抗－ＨＡＶ阴性，肝功能正常的普通狨猴用于甲型肝炎减毒活疫苗Ｈ２株传代试验。即用甲型肝炎疫苗接种普通狨猴，将其粪便排出的子代病毒，直接用粪便悬液或／和用组织培... 详细信息

为探索甲型肝炎减毒活疫苗的残余毒力及毒力返祖的可能性，将血清抗－ＨＡＶ阴性，肝功能正常的普通狨猴用于甲型肝炎减毒活疫苗Ｈ２株传代试验。即用甲型肝炎疫苗接种普通狨猴，将其粪便排出的子代病毒，直接用粪便悬液或／和用组织培养增殖液接种狨猴进行传代。３次连续体内传代的结果揭示：血清抗－ＨＡＶ无明显差异，没有或有低水平肝脏酶活性变化，全部肝脏组织检查无病理学改变，全部动物排毒，但排毒量少。

关键词：甲型肝炎疫苗减毒活疫苗狨猴动物实验

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重组痘苗病毒为载体表达脊髓灰质炎病毒（Ⅰ型）及甲型肝炎病毒双价抗原

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中国医学科学院学报 1996年第3期18卷 209-213页

作者：刘金辉苏晔戴长柏郭仁中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所

本文报道含有脊髓灰质炎病毒Ⅰ型中和抗原位点及甲型肝炎病毒中和抗原位点重组痘苗病毒的构建，用重组痘苗病毒感染１４３ＴＫ－细胞后成功地表达了脊髓灰质炎病毒Ⅰ型和甲型肝炎病毒的抗原。免疫荧光显示，两种抗原的荧光颗粒均分布在... 详细信息

本文报道含有脊髓灰质炎病毒Ⅰ型中和抗原位点及甲型肝炎病毒中和抗原位点重组痘苗病毒的构建，用重组痘苗病毒感染１４３ＴＫ－细胞后成功地表达了脊髓灰质炎病毒Ⅰ型和甲型肝炎病毒的抗原。免疫荧光显示，两种抗原的荧光颗粒均分布在胞浆内。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实，重组痘苗病毒所表达的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型抗原和甲型肝炎病毒抗原为一融合蛋白。用此重组痘苗病毒免疫动物，可诱导脊髓灰质炎病毒Ⅰ型和甲型肝炎病毒的中和抗体产生。

关键词：痘苗病毒脊髓灰质炎病毒甲型肝炎病毒抗原

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用核酸序列分析鉴别甲肝病毒疫苗株与野毒株

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中华微生物学和免疫学杂志 1999年第3期19卷 219-221页

作者：周德久黄小琴白惠珠曹逸云董德祥中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所

目的鉴别在接种甲肝减毒活疫苗（Ｈ２株）后２３天发生的一例甲型肝炎，其病原体是疫苗株还是野毒株。方法用细胞培养、ＩＥＭ等确认病原体，接种普通狨猴检定病毒毒力，测定核苷酸序列分析病毒基因型。结果甲型肝炎的确诊依据有：抗Ｉ... 详细信息

目的鉴别在接种甲肝减毒活疫苗（Ｈ２株）后２３天发生的一例甲型肝炎，其病原体是疫苗株还是野毒株。方法用细胞培养、ＩＥＭ等确认病原体，接种普通狨猴检定病毒毒力，测定核苷酸序列分析病毒基因型。结果甲型肝炎的确诊依据有：抗ＩｇＭ（＋），双份血清ＨＡＶ总抗体效价１６倍增长以及粪便排出ＨＡＶ（郑株）。该粪便悬液攻击普通狨猴后，肝脏呈现持续性组织病理改变，证明郑株是强毒ＨＡＶ。郑株的３个片段共１３７７个核苷酸序列分析表明，与１９８８年上海甲肝流行株合－５２的同源性高达（９８．３０～９９．４０）％，判定为ＩＡ基因亚型，与Ｈ２株疫苗病毒的基因亚型不同。结论该例甲型肝炎是接种甲肝减毒活疫苗中交叉感染野毒株引发的偶合病例。

关键词：甲肝减毒活疫苗核苷酸序列鉴别诊断野毒株

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重组杆状病毒表达HEV ORF2抗原片段

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第5期21卷 560-563页

作者：杜瑞娟马雁冰唐浩庄俊英乐耕耘刘勇戴长柏孙茂盛中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所昆明650118

目的　用重组杆状病毒表达戊型肝炎病毒 (hepatitisEvirus,HEV)ORF2基因片段 ,并对其免疫学特性进行研究。方法　与中间转染载体pVL1 3 93相连构建重组质粒 ,在Lipofectin介导下将其与杆状病毒线性DNA(BaculoGoldTM)共转染Sf9昆虫细胞... 详细信息

目的　用重组杆状病毒表达戊型肝炎病毒 (hepatitisEvirus,HEV)ORF2基因片段 ,并对其免疫学特性进行研究。方法　与中间转染载体pVL1 3 93相连构建重组质粒 ,在Lipofectin介导下将其与杆状病毒线性DNA(BaculoGoldTM)共转染Sf9昆虫细胞得到重组病毒 ,用免疫荧光 ,Westernblot等方法对表达产物进行免疫学特性初步研究 ,并进行动物免疫试验。结果　含ORF2结构基因片段的重组杆状病毒在Sf9昆虫细胞中获得了高效表达 ,经免疫荧光 ,Westernblot,动物免疫试验证实该重组蛋白为HEV特异性蛋白 ,可刺激机体产生相应抗体。结论　重组杆状病毒能有效表达HEV抗原基因 ,所表达的ORF2重组蛋白具有HEV抗体识别的抗原表位 ,具有较好的抗原性和免疫原性。

关键词：肝炎病毒戊型杆状病毒表达 HEV ORF2基因

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