检索结果-内蒙古大学图书馆

未知人Na(+)-K(+)-Exchanging ATPase α1亚基基因第一内含子的获得及鉴定

中国医学科学院学报 1999年第3期21卷 159-165页

作者：杨靖轩张金三卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的研究人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因胞外区约８０～１３０位氨基酸编码序列的未知基因组结构。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对人基因组ＤＮＡ及ｃＤＮＡ文库进行扩增，限制性酶切... 详细信息

目的研究人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因胞外区约８０～１３０位氨基酸编码序列的未知基因组结构。方法采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对人基因组ＤＮＡ及ｃＤＮＡ文库进行扩增，限制性酶切分析扩增产物，并进行荧光测序，对测序结果进行同源性分析及剪接位点的搜索并对得到的核苷酸序列进行分析。结果人基因组ＤＮＡ和ｃＤＮＡ经扩增后分别得到８３３和１９５ｂｐ两种不同大小的片段Ｆｇ，Ｆｃ。分析序列发现Ｆｇ与Ｆｃ相比在１３８～７７５ｂｐ处含有一６３８ｂｐ的插入片段，此片段与ＧｅｎＢａｎｋ中的任何已知序列均无明显同源性。结论本研究发现了一段全新未知的人Ｎａ（＋）－Ｋ（＋）－ＥｘｃｈａｎｇｉｎｇＡＴＰａｓｅα１亚单位基因的内含子全序列，并得到了第一外显子同第二外显子之间的相对位置和序列，其在Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ的基因检索号为Ｌ７６９３８。序列分析表明该内含子可能具有潜在的调控基因表达的功能，并含有一个可能的编码序列。

关键词： Exchanging ATPase α1亚单位 PCR 内含子

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一种新的睾丸特异核孔蛋白基因特性的研究

引用

中国医学科学院学报 1999年第2期21卷 81-87页

作者：高颖朱海东曹登峰盛齐缪时英王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的通过筛选人睾丸特异基因及对其结构和功能的研究，为阐明精子发生与成熟提供新的线索。方法采用筛选人睾丸表达文库、快速扩增ｃＤＮＡ５′末端、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）以及基因重组等技术。结果（１... 详细信息

目的通过筛选人睾丸特异基因及对其结构和功能的研究，为阐明精子发生与成熟提供新的线索。方法采用筛选人睾丸表达文库、快速扩增ｃＤＮＡ５′末端、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析、荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）以及基因重组等技术。结果（１）获得一新的长度为２２０９ｂｐ的ｃＤＮＡ，编码７００个氨基酸，将该基因命名为ＢＳ－６３。Ｇｅｎ－Ｂａｎｋ注册号为Ｕ６４６７５。（２）ＢＳ－６３Ｎ端具有核孔蛋白的特征性结构元件“ＸＦＸＦＧ”或“ＦＧ”以及与Ｒａｓ相关核蛋白（Ｒａｎ）结合的典型特征。（３）Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析显示，ＢＳ－６３基因有６．０和８．５ｋｂ两种转录形式，其中６．０ｋｂ为睾丸组织特异性转录本。（４）ＦＩＳＨ显示，ＢＳ－６３基因定位于２ｑ１１．２～１２。（５）ＢＳ－６３ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得高效表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示，表达蛋白的相对分子质量约为８００００。（６）体外功能实验表明，该表达蛋白可被蛋白激酶Ｃ及细胞周期依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化。结论ＢＳ－６３可能是一种新的睾丸特异核孔蛋白。

关键词：核孔蛋白荧光原位杂交睾丸特异基因

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人扁桃体B淋巴细胞mRNA的差异显示分析及活化B细胞表达的新EST的分离

引用

中华微生物学和免疫学杂志 1999年第2期19卷 129-132页

作者：殷际义崔莲仙赵庆张正健袁勃中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的分离新的Ｂ细胞活化基因。方法采用差异显示反转录ＰＣＲ技术（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）对人扁桃体活化和静止Ｂ细胞ｍＲＮＡ的差异显示情况进行分析，对显示片段进行克隆并行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析，对Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交阳性的ｃＤＮ... 详细信息

目的分离新的Ｂ细胞活化基因。方法采用差异显示反转录ＰＣＲ技术（ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）对人扁桃体活化和静止Ｂ细胞ｍＲＮＡ的差异显示情况进行分析，对显示片段进行克隆并行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析，对Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交阳性的ｃＤＮＡ片段进行测序并比较同源性。结果差异显示分析共获得明显差异表达的ｃＤＮＡ片段６２条，选择主要表达于活化Ｂ细胞上的２０条ｃＤＮＡ片段克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上，并逐一对静止和活化Ｂ细胞ＲＮＡ进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ分析，其中６条ｃＤＮＡ片段在活化Ｂ细胞中呈Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交阳性且与差异显示情况相符，对它们进行测序，然后通过国际互联网与ＧｅｎＢａｎｋ，ＥＭＢＬ和ＤＤＢＪ的ＤＮＡ数据库比较序列同源性，发现其中４个克隆与已发现的基因具明显同源性，一个克隆是新的，另一个克隆虽然与人Ｔ细胞分泌的趋化因子Ｉ－３０９同源性达９５％，但二者转录本不同。结论通过ＤＤＲＴ－ＰＣＲ分离到两个可能为新的Ｂ细胞活化基因的ｃＤＮＡ片段，这为进一步克隆新的Ｂ细胞活化基因奠定了基础。

关键词：扁桃体 B淋巴细胞聚合酶链反应 Northern分析

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人hsp90β基因的热诱导表达与染色质活化的关系

引用

中国医学科学院学报 1999年第2期21卷 126-129页

作者：施一江沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

目的研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质，然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布... 详细信息

目的研究人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达与染色质活化的关系。方法采用有机汞亲和层析柱分离热诱导前后Ｊｕｒｋａｔ细胞内的活性和非活性染色质，然后采用狭缝杂交技术比较热诱导前后人ｈｓｐ９０β基因在活性和非活性染色质中的分布，并用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交的方法研究热休克诱导下的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达。结果发现热休克诱导使细胞内人ｈｓｐ９０β基因在活性染色质中的含量明显增加，并与内源性的ｈｓｐ９０βｍＲＮＡ表达水平一致。结论首次证实人ｈｓｐ９０β基因的热诱导表达在染色质水平受“基因开关”的调控，为研究人类细胞热应激机制提供了新的模型。

关键词： hsp90β基因亲和层析活性染色质染色质 cDNA

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人Aγ-珠蛋白基因-173T→C突变对启动子功能的影响

引用

中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 252-256页

作者：黄小东张俊武阳学贤王以弘赵华路中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究人Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变对反式作用因子与启动子的结合及对启动子活性的影响。方法　采用电泳迁移改变分析和荧光素酶报告基因瞬时转染分析。结果　Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变使ＧＡＴＡ１与... 详细信息

目的　研究人Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变对反式作用因子与启动子的结合及对启动子活性的影响。方法　采用电泳迁移改变分析和荧光素酶报告基因瞬时转染分析。结果　Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变使ＧＡＴＡ１与突变启动子片段（－２０１～－１５８）的结合降低了９６％（Ｐ＜００１），并且使Ｏｃｔ１与相同的ＤＮＡ片段的结合降低５５％（Ｐ＜００５）。在ＭＥＬＧＭ９７９细胞中，突变启动子活性是正常启动子的２倍（Ｐ＜００５）；在Ｋ５６２和Ｈｅｌａ细胞中，突变和正常启动子活性基本相同。结论　Ａγ启动子－１７３Ｔ→Ｃ突变导致ＧＡＴＡ１与突变启动子片段结合显著减少，提示在成年期该转录因子可能是Ａγ珠蛋白基因的负调控因子；－１７３

关键词： Aγ-珠蛋白基因启动子点突变转录因子 GATA-1

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

反转录病毒载体介导的人β-珠蛋白基因在小鼠体内整合和表达的实验研究

引用

中华医学杂志 1999年第2期79卷 121-124页

作者：翟锦彬刘德培王晶陈迪郑勇梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用... 详细信息

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用回体（ｅｘｖｉｖｏ）基因转移策略，分析人β珠蛋白基因在小鼠体内的整合及表达。结果病毒重组体的病毒滴度在“乒乓”超感染后有明显提高，最高病毒滴度约为１×１０６ＣＦＵ／ｍｌ；在小鼠ＣＦＵＳ１２（第１２天脾结节）中检测到２个重组体中人β珠蛋白基因的整合，表达水平约为内源性鼠α珠蛋白基因的０５％～５％。在２只长期造血重建小鼠的骨髓、脾、胸腺及另一只小鼠的骨髓及脾中整合有人β珠蛋白基因，在一只重建小鼠的骨髓和脾中有人β珠蛋白基因表达，约为鼠α珠蛋白基因的７％。结论反转录病毒载体介导的人β珠蛋白基因可稳定整合在小鼠骨髓造血干细胞中。

关键词：珠蛋白基因表达 β地中海贫血

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

人白细胞介素-15cDNA真核表达载体的构建及其在肺癌细胞中的表达

引用

中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 368-372页

作者：沈永泉崔莲仙何维巴德年中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的观察人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在腺癌细胞内的表达。方法将人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ于ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ位点正向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ，构建ｐＬ－ＩＬ－１５－ＳＮ的重组质粒。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将该重组质粒转... 详细信息

目的观察人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ在腺癌细胞内的表达。方法将人ＩＬ－１５ｃＤＮＡ于ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ位点正向克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ，构建ｐＬ－ＩＬ－１５－ＳＮ的重组质粒。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导将该重组质粒转染到人肺鳞癌细胞（ＰＧ细胞系）和小鼠肺腺癌细胞（ＬＡ７９５细胞系）。经Ｇ４１８条件培养筛选，获得阳性细胞克隆。再经ＣＴＬＬ－２细胞增殖法测阳性细胞ＩＬ－１５的表达活性。结果获得３个ＰＧ细胞和４个ＬＡ７９５细胞阳性克隆，ＩＬ－１５活性测定显示其表达水平在２４ｈ内分别在１４２～２０１或１３８～１７８Ｕ／（ｍｌ·１０６细胞）。结论ＩＬ－１５ｃＤＮＡ转导的人和小鼠肺癌细胞可表达有生物学活性的ＩＬ－１５。

关键词：白细胞介素15 cDNA 基因转导肺癌载体构建

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

一氧化氮合酶抑制剂阻断阿片耐受和依赖的信号转导途径

引用

中华医学杂志 1999年第10期79卷 764-768页

作者：臧梦维沈琦刘景生中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨一氧化氮合酶（NOS）抑制剂NG-硝基-L-精氨酸（L-NNA）对阿片耐受和依赖机制中腺苷酸环化酶-环磷酸腺苷（AC-cAMP）系统、Ca2+系统和一氧化氮-环磷酸鸟苷（NO-cGMP）系统变化的影响。方法实验共分为对照组，阿片激动剂组，阿片... 详细信息

目的探讨一氧化氮合酶（NOS）抑制剂NG-硝基-L-精氨酸（L-NNA）对阿片耐受和依赖机制中腺苷酸环化酶-环磷酸腺苷（AC-cAMP）系统、Ca2+系统和一氧化氮-环磷酸鸟苷（NO-cGMP）系统变化的影响。方法实验共分为对照组，阿片激动剂组，阿片激动剂+纳洛酮组;L-NNA+阿片激动剂组和L-NNA+阿片激动剂+纳洛酮组。采用竞争性蛋白结合试验，3H-精氨酸转化成3H-胍氨酸方法，放射免疫测定和激光共聚焦显微镜技术，测定cAMP含量，NOS活性，cGMP生成量和[Ca2+]i水平。免疫组织化学检测iNOS蛋白表达。结果稳定表达iNOS基因的NG-LNCXiNOS细胞在高选择性δ-受体激动剂δ-阿片受体高选择性激动剂（DPDPE）长时程作用及纳洛酮戒断时，胞内cAMP水平和[Ca2+]i增加，胞浆相iNOS活性和cGMP生成增多，与DPDPE预处理剂量成正比。10-4mol/LL-NNA能降低吗啡、DPDPE、DADLE诱发的cAMP、iNOS活性和蛋白及cGMP的升高，但不能降低[Ca2+]i。结论NOS抑制剂延缓阿片耐受和依赖的发生，可能是负调控AC-cAMP系统和NO-cGMP系统，为临床应用NOS抑制剂防治阿片耐受和成瘾提供了实验依据。

关键词：阿片样δ 麻醉品依赖一氧化氮信号传递

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达

引用

Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1999年第3期31卷 15-20页

作者：臧梦维沈琦汪青刘景生彭学贤中国医学科学院基础医学研究所、中国协和医科大学基础医学院、医学分子生物学国家重点实验室中国科学院微生物研究所

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用，采用脂质体介导基因转染技术，将ｉＮＯＳｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８... 详细信息

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ｉＮＯＳ）基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用，采用脂质体介导基因转染技术，将ｉＮＯＳｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８１５神经细胞，获得Ｇ４１８抗性克隆，命名为ＮＧＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞。ＤＮＡ印迹杂交、ＰＣＲ扩增及ＲＴＰＣＲ和蛋白质免疫印迹杂交分析，证实ＮＧＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞有外源ｉＮＯＳ基因整合、转录和表达；ＮＡＤＰＨ黄递酶（ＮＡＤＰＨｄｉａｐｈｏｒａｓｅ，ＮＡＤＰＨｄ）组化和免疫组化染色表明，胞质中有ｉＮＯＳ基因功能表达；酶催化活性和ＮＯ－２含量均明显升高；重组酶具有天然酶生化和药理特性，即ＮＡＤＰＨ依赖性，Ｃａ２＋非依赖性和Ｃａ２＋螯合剂抗性以及ＮＯＳ抑制剂使酶活性降低，呈剂量相关性；ｉＮＯＳ基因表达使ＮＯｃＧＭＰ系统上调。成功地建立ｉＮＯＳ基因修饰神经细胞株，为寻找治疗阿片耐受和依赖的新药创造了条件。

关键词：一氧化氮合酶逆转录病毒环磷酸鸟苷神经母细胞瘤细胞株

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

MBLL cDNA的克隆及组织表达分析

引用

科学通报 1999年第22期44卷 2408-2413页

作者：杜光伟周严陈建和汪俊华阴彬袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

果蝇的mbl(muscleblind)基因编码一个核蛋白 ,含有 2个Cys3 His锌指基序 .mbl基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化 .根据与mbl基因高度同源的人ESTAA0 86 1 39设计PCR引物 ,筛选胎儿脑cDNA点阵文库 ,得到一个人cDNA ,命名为MBLL... 详细信息

果蝇的mbl(muscleblind)基因编码一个核蛋白 ,含有 2个Cys3 His锌指基序 .mbl基因的突变将影响果蝇所有光感受器细胞的分化 .根据与mbl基因高度同源的人ESTAA0 86 1 39设计PCR引物 ,筛选胎儿脑cDNA点阵文库 ,得到一个人cDNA ,命名为MBLL(muscleblind_like) .MBLL长为 2 5 95bp ,含有一个完整的开放阅读框 ,编码 2 5 5个氨基酸 ,具有 4个Cys3 His锌指基序 ,氨基酸序列与果蝇mbl有很高的同源性 (GenBank接受号 :AF0 6 1 2 6 1 ) .利用Northern和RNA斑点杂交检测MBLL基因在 43种成人组织 ,7种胎儿组织中的表达 ,结果显示MBLL是一个广泛表达的基因。

关键词： MBLL cDNA 克隆组织表达基因编码

来源：评论

学校读者我要写书评

暂无评论

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：