检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2003年第3期25卷 289-293,T002页

作者：张晓东苟大为缪时英张建超宗书东王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 NationalFamilyPlanningResearchInstitute

目的分离、克隆精子发生相关基因,深入了解精子发生的分子机制。方法采用本组克隆的大鼠睾丸EST筛选cDNA文库、Northernblot、原核表达和纯化、抗体制备和免疫组化等技术。结果(1)获得1个新的全长cDNA序列,命名为RSD-7。全长1238bp,编码... 详细信息

目的分离、克隆精子发生相关基因,深入了解精子发生的分子机制。方法采用本组克隆的大鼠睾丸EST筛选cDNA文库、Northernblot、原核表达和纯化、抗体制备和免疫组化等技术。结果(1)获得1个新的全长cDNA序列,命名为RSD-7。全长1238bp,编码232个氨基酸,GenBank接收号为AF315467。序列分析显示,RSD-7基因编码蛋白质含有1个Ubiquitin-like结构域。(2)Northernblot结果显示,在8种成鼠组织中,RSD-7基因仅在睾丸组织中有明显表达。不同发育天龄的大鼠睾丸组织Northernblot结果显示,出生后30d的大鼠RSD-7基因开始表达,一直到120d仍有表达。(3)RSD-7cDNA在大肠杆菌中获得高效表达,并纯化了GST-RSD-7融合蛋白,以此为抗原制备了高效价的抗RSD-7蛋白的多克隆抗体。(4)通过免疫组织化学方法,RSD-7蛋白定位于Sertoli细胞胞浆和质膜上。结论初步分析了RSD-7基因的表达特征并制备了抗RSD-7多克隆抗体,为进一步研究RSD-7蛋白在精子发生过程中的功能提供了条件。

关键词：精子发生基因克隆 RSD-7cDNA Sertoli细胞

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化疗药物增强重组可溶性TRAIL抗肿瘤作用

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 524-528页

作者：王明婕刘彦信李晓玲史娟刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨化疗药物对重组可溶性TRAIL穴rsTRAIL雪抗肿瘤作用的影响及其分子机制。方法13株不同肿瘤细胞经rsTRAIL处理后,采用MTS-PMS染色法和流式细胞仪技术测定细胞凋亡率,观察肿瘤细胞对rsTRAIL的敏感性;化疗药物与rsTRAIL联合作用于... 详细信息

目的探讨化疗药物对重组可溶性TRAIL穴rsTRAIL雪抗肿瘤作用的影响及其分子机制。方法13株不同肿瘤细胞经rsTRAIL处理后,采用MTS-PMS染色法和流式细胞仪技术测定细胞凋亡率,观察肿瘤细胞对rsTRAIL的敏感性;化疗药物与rsTRAIL联合作用于敏感性不同的肿瘤细胞检测细胞敏感性的变化;免疫印迹技术分析TRAIL受体DR5蛋白表达。结果13株肿瘤细胞中约46.2%穴6/13雪的细胞株对rsTRAIL敏感;化疗药物CHX、CP和8-CA可显著提高肿瘤细胞株对rsTRAIL细胞毒作用的敏感性;8-CA和TRAIL联合作用可上调DR5的蛋白表达。结论化疗药物CHX、CP和8-CA可增强rsTRAIL的抗肿瘤作用。

关键词：化疗药物 rsTRAIL 协同作用细胞凋亡 DR5

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CD3ε和5-氟尿嘧啶在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P53的表达

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中华医学杂志 2003年第22期83卷 1962-1967页

作者：程宏刘彦信张锦春刘士廉郑德先中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM... 详细信息

目的　研究CD3ε分子与化疗药物 5 氟尿嘧啶 (5 FU)在T淋巴细胞凋亡中的协同作用及P5 3的表达 ,为探索T淋巴细胞凋亡的分子机制打下基础 ,为相关肿瘤的治疗提供新的实验依据。方法　培养人T淋巴白血病细胞株JK ,转染了突变的CD3εITAM的TJK及T3JK细胞株。用CD3ε特异的单克隆抗体 (2 0 0 μg/ml)和 /或 5 FU(2 5 μg/ml)刺激不同的T淋巴细胞诱导细胞凋亡 ,用噻唑蓝比色法检测细胞存活率 ,并计算细胞死亡率 ;用瞬时转染野生型或突变型P5 3表达质粒的方法和Western印迹检测P5 3蛋白质的表达 ,分析其在T淋巴细胞凋亡中的作用。结果　在CD3ε和 5 FU分别诱导T淋巴细胞凋亡过程中 ,均伴随着P5 3蛋白质表达增加 ;两者联合使用使T淋巴细胞凋亡和P5 3蛋白质表达显著增加 ;P5 3过表达可明显增加T淋巴细胞对 5 FU的敏感性。结论　抗CD3ε抗体和 5 FU联合作用可显著提高P5 3蛋白质表达 ,两者在T淋巴细胞凋亡中具有协同效应。

关键词： CD3ε 5-氟尿嘧啶 T淋巴细胞凋亡协同作用 P53 表达单克隆抗体

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单核苷酸多态性的研究进展

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 392-394页

作者：杜玮南孙红霞方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

单核苷酸多态性 (SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的一种 DNA序列多态性。SNP现象在人类基因组中广泛存在 ,并具有很高的信息含量。目前已发现数万个 SNP标记 ,且有多个生物医学网站开辟了专页对其加以介绍。随着对 SN... 详细信息

单核苷酸多态性 (SNP)是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的一种 DNA序列多态性。SNP现象在人类基因组中广泛存在 ,并具有很高的信息含量。目前已发现数万个 SNP标记 ,且有多个生物医学网站开辟了专页对其加以介绍。随着对 SNP检测和分析技术的进一步发展 ,尤其是与 DNA芯片等技术的结合 ,它已成为第三代遗传标记 ,初步满足对疾病相关基因定位研究的需要 ,尤其是对多基因遗传病高精度基因定位的要求 ,并将最终取代目前最常用的微卫星标记技术进入基因应用研究的领域。

关键词：单核苷酸多态性遗传标记基因研究 DNA芯片

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人Aγ-珠蛋白基因-173T→C突变对启动子功能的影响

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中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 252-256页

作者：黄小东张俊武阳学贤王以弘赵华路中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究人Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变对反式作用因子与启动子的结合及对启动子活性的影响。方法　采用电泳迁移改变分析和荧光素酶报告基因瞬时转染分析。结果　Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变使ＧＡＴＡ１与... 详细信息

目的　研究人Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变对反式作用因子与启动子的结合及对启动子活性的影响。方法　采用电泳迁移改变分析和荧光素酶报告基因瞬时转染分析。结果　Ａγ珠蛋白基因－１７３Ｔ→Ｃ突变使ＧＡＴＡ１与突变启动子片段（－２０１～－１５８）的结合降低了９６％（Ｐ＜００１），并且使Ｏｃｔ１与相同的ＤＮＡ片段的结合降低５５％（Ｐ＜００５）。在ＭＥＬＧＭ９７９细胞中，突变启动子活性是正常启动子的２倍（Ｐ＜００５）；在Ｋ５６２和Ｈｅｌａ细胞中，突变和正常启动子活性基本相同。结论　Ａγ启动子－１７３Ｔ→Ｃ突变导致ＧＡＴＡ１与突变启动子片段结合显著减少，提示在成年期该转录因子可能是Ａγ珠蛋白基因的负调控因子；－１７３

关键词： Aγ-珠蛋白基因启动子点突变转录因子 GATA-1

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Fudenine———个新的与血糖调节相关的膜蛋白

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中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 63-64,F003页

作者：常永生左瑾张雪峰张明方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

确定 Fudenine是否为一个新的膜蛋白。方法用绿色荧光蛋白（ GFP）对 Fudenine进行体内定位，以 GFP(一种代谢稳定的蛋白 )定位于细胞质中，作为对照。将融合质粒 Fudenine- GFP瞬时转染 CBRH7919和 L- 6TG两种细胞， 48 h后荧光显微镜... 详细信息

确定 Fudenine是否为一个新的膜蛋白。方法用绿色荧光蛋白（ GFP）对 Fudenine进行体内定位，以 GFP(一种代谢稳定的蛋白 )定位于细胞质中，作为对照。将融合质粒 Fudenine- GFP瞬时转染 CBRH7919和 L- 6TG两种细胞， 48 h后荧光显微镜下观察。结果报告质粒 GFP表达产物定位于胞质中，而融合质粒产物定位于细胞膜上。结论 Fudenine是一种膜蛋白，它可能与其同源基因 prominin和 AC133抗原有相似的功能，在血糖调控和信号转导等方面发挥作用。

关键词： Fudenine 亚细胞定位细胞膜膜蛋白血糖调节

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人突变的载脂蛋白E对转基因小鼠学习与记忆能力的影响

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 348-351页

作者：廖峥嵘琦祖和孙明增杨迪恽君惕中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究突变的人载脂蛋白 E(apo E)对大脑皮层功能的影响。方法　以 F1代 apo E4与 apo E7转基因小鼠为研究对象 ,分别用 Southern印迹分析及 EL ISA检测人 apo E基因在 F1代小鼠染色体上的整合与在血中的表达 ;以主动回避实验检测... 详细信息

目的　研究突变的人载脂蛋白 E(apo E)对大脑皮层功能的影响。方法　以 F1代 apo E4与 apo E7转基因小鼠为研究对象 ,分别用 Southern印迹分析及 EL ISA检测人 apo E基因在 F1代小鼠染色体上的整合与在血中的表达 ;以主动回避实验检测小鼠的学习能力和短期与长期记忆能力的变化 ,同时用酶法测定 F1代小鼠的血脂水平。结果　 (1)人 apo E4和 apo E7基因稳定地整合于 F1代小鼠染色体上并高效表达于血清中 ;(2 ) F1代小鼠血脂升高的同时 ,apo E4小鼠学习能力与短期记忆能力均显著下降 ,apo E7小鼠短期记忆能力也下降。结论　人apo E4与 apo E7基因过度表达均可使转基因小鼠大脑皮层功能受损害 ,提示人 apo E基因突变可能与 apo E4表型一样 ,也与早老性痴呆的发病有一定关系。

关键词：载脂蛋白E 转基因小鼠学习记忆

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中国人群中载脂蛋白E等位基因型与阿尔茨海默病的相关性分析

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中国医学科学院学报 2001年第5期23卷 450-454页

作者：吴亚宁张俊武张正馨屈秋明陈等中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究中国人群中载脂蛋白E等位基因型与阿尔茨海默病的关联。方法利用PCR和限制性内切酶酶解,分析阿尔茨海默病患者及正常老年人载脂蛋白E各等位基因、基因型的频率。结果ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4这三个等位基因出现的次数(和频率)... 详细信息

目的研究中国人群中载脂蛋白E等位基因型与阿尔茨海默病的关联。方法利用PCR和限制性内切酶酶解,分析阿尔茨海默病患者及正常老年人载脂蛋白E各等位基因、基因型的频率。结果ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4这三个等位基因出现的次数(和频率)在56例散发性阿尔茨海默病(AD)患者中分别为3(2.7%)、8475.0%、2522.3%,而在67例健康对照中分别为96.7%、11585.8%、107.5%。ApoEε4等位基因在AD患者中出现的频率明显高于对照组,统计学处理说明其差异有显著性(χ2=10.99P<0.01OR=3.5995%CI=1.54-8.41)ApoEε3等位基因在AD组中出现的频率低于对照组,两组中的差异也有统计学意义(P<0.05)。结论ApoEε4等位基因是AD的危险因素,ApoEε3等位基因在AD的发生中可能具有一定保护作用。

关键词：阿尔茨海默病载脂蛋白E 等位基因型相关性分析

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DNA重新甲基化酶3b在成年及新生小鼠部分组织中的选择性剪接表达

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 312-316页

作者：林岚许琪张焱尹斌范钰罗一菁韩少梅张正国吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　探讨哺乳动物 DNA重新甲基转移酶 3b(Dnm t3b)在新生及成年小鼠多种组织中的选择性剪接表达。方法　采用 RT- PCR结合毛细管电泳分析新生及成年小鼠主要器官中 Dnmt3b的选择性剪接表达产物 ,并通过计算机分析 Dnm t3b外显子 10和... 详细信息

目的　探讨哺乳动物 DNA重新甲基转移酶 3b(Dnm t3b)在新生及成年小鼠多种组织中的选择性剪接表达。方法　采用 RT- PCR结合毛细管电泳分析新生及成年小鼠主要器官中 Dnmt3b的选择性剪接表达产物 ,并通过计算机分析 Dnm t3b外显子 10和外显子 2 1、2 2选择性剪接对该基因功能可能产生的影响。结果　成年小鼠肝组织中大部分 Dnm t3b转录本保留外显子 10 ,而其它组织的大部分转录本中此序列被剪切掉。成年小鼠肺组织主要表达缺失外显子 10的 Dnmt3b转录本 ,而新生小鼠肺组织则表达保留外显子 10的转录本。亲水性及二级结构分析表明 ,选择性剪接区域编码的肽段均位于 Dnmt3b蛋白分子的表面。结论　小鼠 Dnm t3b基因的选择性剪接具有组织及发育阶段特异性 ,其选择性剪接区域编码的肽段可能与蛋白分子的调控或酶分子的靶序列识别有关。

关键词：甲基转移酶选择性剪接毛细管电泳 DNA

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丝裂原活化蛋白激酶信号途径在热休克蛋白90基因表达中的作用

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 327-331页

作者：李江伟吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究丝裂原活化蛋白激酶 - (MAPK)信号传导途径对 Jurkat细胞中热休克蛋白 90基因(hsp90 )表达的影响。方法　用 Western免疫印迹 -增强型化学发光系统 (ECL)检测热休克前后 Jurkat细胞胞外信号调节激酶 (ERK)、p38激酶及 c- Jun... 详细信息

目的　研究丝裂原活化蛋白激酶 - (MAPK)信号传导途径对 Jurkat细胞中热休克蛋白 90基因(hsp90 )表达的影响。方法　用 Western免疫印迹 -增强型化学发光系统 (ECL)检测热休克前后 Jurkat细胞胞外信号调节激酶 (ERK)、p38激酶及 c- Jun N-末端蛋白激酶 (JNK)的底物 c- Jun的磷酸化程度 ;分别用 JNK1的显性负突变质粒 DN- JNK1、p38c DNA反义表达质粒 anti- p38及 ERK激酶的特异性抑制剂 PD980 5 9瞬时转染或处理Jurkat细胞 ,再行 RT- PCR检测 hsp90 α和 hsp90 β基因的表达水平。分别以转染空载体 (p CDNA3)及未经任何处理的 Jurkat细胞作为相应对照组。结果　 45℃热休克 15 min后 ,Jurkat细胞中 JNK1和 p38激酶的磷酸化程度与热休克前相比明显增强 ,ERK的磷酸化较热休克前有所增强。转染 DN- JNK1的细胞中 hsp90 α和 hsp90 β基因的组成性和热诱导表达均较转染空载体的对照组降低 ,尤其对 hsp90 α基因的热诱导表达的影响更为明显 (仅为对照组的6 8% ) ;转染 anti- p38后 ,hsp90 α基因的组成性表达和 hsp90 β基因热诱导表达分别比转染空载体的对照组增加2 6 %和 2 2 % ;经 PD980 5 9处理的 Jurkat细胞中 ,hsp90 α基因的组成性表达比未处理的细胞增加 46 % ,但 PD980 5 9处理对 hsp90 α和

关键词：丝裂原活化蛋白酶信号途径热休克蛋白90

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