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6A8α-甘露糖苷酶酶解p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside

中国医学科学院学报 2001年第5期23卷 423-427页

作者：王壮志李琳史耕先刘音赵方萄朱立平中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学教研室

目的明确6A8cDNA编码蛋白质的α-甘露糖苷酶性质。方法利用基因重组技术将克隆到的3个DNA片段拼接成完整6A8cDNA将其插入到真核表达载体pCDI转染COS-7细胞,用酶活性检测与Westernblot对瞬时表达的蛋白质的性质进行鉴定。结果拼接后... 详细信息

目的明确6A8cDNA编码蛋白质的α-甘露糖苷酶性质。方法利用基因重组技术将克隆到的3个DNA片段拼接成完整6A8cDNA将其插入到真核表达载体pCDI转染COS-7细胞,用酶活性检测与Westernblot对瞬时表达的蛋白质的性质进行鉴定。结果拼接后的cDNA片段经测序完全符合6A8cDNA碱基顺序。转染重组表达载体pCDI-6A8的COS-7细胞的匀浆对p-nitrophenyl-α-D-mannopyranoside的酶解作用为转染空载体pCDI的细胞及野生型细胞的3～4倍,且这种酶解作用不能被swainsonine所抑制。Westernblot检测显示在相对分子质量(Mr)120000处有一明显蛋白带,此带的显影于转染pCDI-6A8cDNA的细胞明显深于转染空载pCDI及野生型细胞。结论6A8cDNA编码的蛋白质确为一种α-甘露糖苷酶,属于Ⅱ类α-甘露糖苷酶。

关键词： 6A8 α-甘露糖苷酶 COS-7细胞瞬时表达

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重组腺相关病毒转导外源基因入EB病毒转化的B淋巴细胞获长期表达

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中华微生物学和免疫学杂志 2001年第6期21卷 594-599页

作者：史耕先刘音李琳朱立平中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫学教研室北京100005

目的　采用重组腺相关病毒 (AAV)载体pAGX(+) ,把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞 ,以获得正义或反义 6A8DNA长期表达的B淋巴细胞株。方法　构建含正义或反义 6A8DNA片段的重组pAGX(+)质粒。经包... 详细信息

目的　采用重组腺相关病毒 (AAV)载体pAGX(+) ,把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞 ,以获得正义或反义 6A8DNA长期表达的B淋巴细胞株。方法　构建含正义或反义 6A8DNA片段的重组pAGX(+)质粒。经包装后转导淋巴细胞 ,经G418筛选 ,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞。Northern杂交和RT PCR检测转导基因的mRNA表达水平。ConA结合试验检测细胞在转导基因后 6A8α 甘露糖苷酶活性的改变。结果　pAGX 反义6A8DNA及pAGX 正义 6A8DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV(rAAV)颗粒 ,藉助rAAV成功地把 6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB。Northern杂交结果显示 ,转导的正义或反义 6A8DNA获得表达。经 1年余传代培养 ,RT PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义 6A8DNA的mRNA表达增加 ,新霉素抗性基因 (neoR)也获得表达 ,表明转导基因获得了长期表达。ConA结合强度在转导反义 6A8DNA的细胞升高 ,提示转导反义 6A8DNA可影响 6A8α 甘露糖苷酶的表达。结论　用AAV载体成功地把 6A8α 甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB ,转导的基因获得长期表达 ,并干扰 6A8α 甘露糖苷酶的表达。

关键词：重组腺相关病病毒 EB病毒转化 B淋巴细胞外源基因转导

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转导反向6A8α-甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响

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基础医学与临床 2001年第2期21卷 136-140页

作者：岳玮史耕先王壮志刘音朱立平山东大学生命学院中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学教研室北京100005

用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA后 ,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化 ,并用间接免疫荧光染色 (流式细胞仪 )检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明 ,抗Fas抗体诱导细胞... 详细信息

用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA后 ,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化 ,并用间接免疫荧光染色 (流式细胞仪 )检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明 ,抗Fas抗体诱导细胞 2 4h后 ,野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA ,两者之间无明显差异 ,但转导反向 6A8cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向 6A8cDNA的Ju rkat细胞中凋亡细胞数明显减少 ,而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas(CD95 ,Apo 1)全阳性细胞 ,转导反向 6A8cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示 ,转导编码 6A8α 甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。

关键词：细胞凋亡反向6A8cDNA 反向6A8α-甘露糖苷酶抗Fas抗体 Jurkat细胞

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内源性雌激素与阿尔茨海默病的病例对照研究

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中华流行病学杂志 2001年第5期22卷 379-382页

作者：洪霞张振馨李辉赵洁皓魏镜黄觉斌杨恩立吴继星冀成君张晓君中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经科北京100730 中国医学科学院基础医学研究所流行病学教研室北京市第六医院神经科北京市回龙观医院老年科北京市同仁医院神经科

目的　探讨内源性雌激素与阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease,AD)是否存在病因联系。方法　以人群为基础进行年龄、性别匹配的病例对照研究。病例组为样本人群中确诊的全部女性AD患者共 115例 ;对照组为符合匹配条件的全部未发生认知... 详细信息

目的　探讨内源性雌激素与阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease,AD)是否存在病因联系。方法　以人群为基础进行年龄、性别匹配的病例对照研究。病例组为样本人群中确诊的全部女性AD患者共 115例 ;对照组为符合匹配条件的全部未发生认知功能障碍者共 10 41名。结果　自然绝经年龄对AD发病有显著影响 ,自然绝经年龄为 47～ 5 0岁的女性 ,患AD的危险为绝经年龄 <47岁女性的 0 .6 72倍 ;绝经年龄 >5 0岁的女性患AD的危险则为绝经年龄 <47岁女性的 0 .45 2倍 (P =0 .0 2 0 7)。初潮年龄每增加 1岁 ,校正的OR值为 1.16 0 (P =0 .0 34 2 )。结论　内源性雌激素与AD可能存在病因联系。

关键词：阿尔茨海默病雌激素流行病学

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动物细胞系的染色体组型与遗传变异率分析

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Acta Genetica Sinica 2001年第4期28卷 327-344,T001,T002页

作者：张德礼李六金夏耕田何旭玉高步先白晓鸿黄高升刘尚高阎隆飞方福德胡春雷王黎军姜焕宏冯阿曼张广民安社刚任远强郭建民胡淑贤樊军喜牛永利宋占军李迎樊胜军北京大学医学部免疫学系北京100083 北京军区联勤部卫生防疫队西安710032 第四军医大学动物保健品研制中心毒理学研究室西安710032 第四军医大学基础部病理学教研室西京医院病理科中国癌症研究基金会肿瘤研究所北京100094 中国农业大学动物医学院传染病微生物学教研室生物学院生物化学与分子生物学系农业生物技术国家重点实验室北京100005 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院实验动物研究所

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库，即７种动物肾细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、ＭＤＣＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２、ＭＡ－１０４、ＢＨＫ－２１）的种子库和工作库的基础上，通过细胞染色体组型、Ｇ带核型、染色体数目变异率、... 详细信息

在建立国内首家犬、猫、猴、鼠传代细胞库，即７种动物肾细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、ＭＤＣＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２、ＭＡ－１０４、ＢＨＫ－２１）的种子库和工作库的基础上，通过细胞染色体组型、Ｇ带核型、染色体数目变异率、结构畸变率分析，了解７种细胞系传代培养不同代次的染色体变异情况。以相应的细胞株皮下接种裸鼠形成肿瘤实验、软琼脂细胞克隆形成率与植物凝集素作用下细胞凝集实验为对照，筛选出无致癌／致瘤性、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的细胞系（Ｆ－８１、ＣＲＦＫ、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－２）或极低致癌性的ＭＤＣＫ细胞系用于制苗，发现肿瘤细胞系高变异率株可在裸鼠体内快速选育成功。细胞系染色体遗传特征决定致瘤性质并具有种属特异性，得到一些１００％成瘤和１００％不成瘤的细胞株并探讨了与染色体组型的关系。对于肿瘤的发病机理及实验治疗，都是非常好的模型。一些细胞系不仅成瘤而且还可转移（致恶性横纹肌样瘤的ＢＨＫ－２１和Ｖｅｒｏ细胞株），其他致瘤细胞株只成瘤不转移或不明显转移。

关键词：动物肾细胞系人类子宫颈癌细胞系猪肾原代细胞染色体核型 G带核型遗传变异率数目变异结构畸变

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编码人分化抗原5C5全长cDNA的克隆及功能初探

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中华微生物学和免疫学杂志 2000年第3期20卷 248-252页

作者：马凤蓉阎民孟晓燕赵方萄汪燚史耕先刘音王讯朱立平中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学免疫学教研室

目的　编码 5C5分化抗原全长cDNA的克隆及功能探索。方法　构建人活化B细胞株3D5细胞的λgt11cDNA文库 ,以核苷酸杂交法从cDNA文库中筛选阳性克隆 ,作核苷酸序列分析 ,编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析 ,Northernblot测 5C5mRNA转录本... 详细信息

目的　编码 5C5分化抗原全长cDNA的克隆及功能探索。方法　构建人活化B细胞株3D5细胞的λgt11cDNA文库 ,以核苷酸杂交法从cDNA文库中筛选阳性克隆 ,作核苷酸序列分析 ,编码蛋白质氨基酸序列的亲疏水分析 ,Northernblot测 5C5mRNA转录本长度 ,用RT PCR检测 5C5mRNA在不同细胞株的表达 ,观察单抗 5C5 G1对 3D5细胞增殖的影响。结果　从人活化B细胞株 3D5的λgt11cDNA文库筛选到长 90 5bp的 5C5 1cDNA及 75 4bp的 5C5 2cDNA。 5C5 1cDNA序列内有 1个开放阅读框架 (19～ 5 37bp) ,编码 179个aa的蛋白质。此蛋白质内有一穿膜螺旋结构 (94～ 114aa) ,其N端在胞内。 5C5 2cDNA从 16 3到 45 9为开放阅读框架 ,编码 99个aa的蛋白质。从Northernblot见0 9kb左右和 0 7kb左右 2条杂交带。由RT PCR见 5C5mRNA在 3D5细胞强表达 ,在Daudi细胞表达次之 ,在Jurkat细胞表达最弱。单抗 5C5 G1有增强cpBCGF诱导 3D5细胞增殖的作用。结论　长90 5bp的 5C5 1cDNA为 1个全长cDNA。编码 1个膜蛋白 ,可能参与 3D5细胞的增殖反应。

关键词： 5C5 cDNA 亮氨酸拉链蛋白 B细胞分化抗原

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编码人白细胞分化抗原5D4的基因表达

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 517-520页

作者：汪焱马凤蓉孟晓燕史耕先刘音赵方萄朱立平中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学教研室北京100005

目的确证 5D4 cDNA是全长 cDNA，并为制备抗 5D4不同表位的单克隆抗体准备抗原。方法构建重组表达质粒 pGEX- 5X- 3- 5D4全长和 pGEX- 5X- 3- 5D4 5′侧 ,并转化大肠杆菌 DH5α ,使其表达 5D4分化抗原，用 Northern印迹分析和 RT- PCR检... 详细信息

目的确证 5D4 cDNA是全长 cDNA，并为制备抗 5D4不同表位的单克隆抗体准备抗原。方法构建重组表达质粒 pGEX- 5X- 3- 5D4全长和 pGEX- 5X- 3- 5D4 5′侧 ,并转化大肠杆菌 DH5α ,使其表达 5D4分化抗原，用 Northern印迹分析和 RT- PCR检测 5D4 mRNA在不同组织和免疫细胞株中的表达状况。结果 5D4 mRNA有 5种转录本，它们在不同组织有不同的表达， 1.9 kb RNA在所检测的 8种组织中只见于小肠组织和脾脏。 5D4 mRNA在不同免疫细胞的表达量不同。在大肠杆菌 DH5α中表达出了相对分子质量约为 66 000和 60 000的 5D4- GST融合蛋白。结论 1 846 bp 5D4 cDNA为全长 cDNA，并在大肠杆菌 DH5α中成功表达出了与 GST融合的 5D4分化抗原全长 (66 000)及其跨膜区侧氨基端蛋白质 (60 000)。

关键词：分化抗原5D4 基因表达

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6A8α-甘露糖苷酶表达对人B淋巴细胞3D5增殖反应的影响

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 529-532页

作者：赵方萄史耕先李琳朱立平中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学教研室北京100005

目的观察 6A8α-甘露糖苷酶表达对人 B细胞株 3D5增殖反应的影响。方法以重组腺相关病毒颗粒为载体，将正义 6A8 DNA或反义 6A8 DNA转导入 EB病毒转化的人 B细胞株 3D5，用单抗 6A8a染色反应和 Con A结合试验确认 6A8α-甘露糖苷酶高表... 详细信息

目的观察 6A8α-甘露糖苷酶表达对人 B细胞株 3D5增殖反应的影响。方法以重组腺相关病毒颗粒为载体，将正义 6A8 DNA或反义 6A8 DNA转导入 EB病毒转化的人 B细胞株 3D5，用单抗 6A8a染色反应和 Con A结合试验确认 6A8α-甘露糖苷酶高表达和低表达。以野生型细胞及转导空载载体的细胞作对照， MTT法检测细胞对 B细胞生长因子（ BCGF）、葡萄球菌 Cowen I（ SAC）或 IL- 6刺激的增殖反应。结果转导正义 6A8 DNA的细胞高表达 6A8α-甘露糖苷酶，转导反义 6A8 DNA的细胞低表达 6A8α-甘露糖苷酶。转导正义 6A8 DNA的 3D5细胞在 SAC诱导下的增殖反应明显增强（ P< 0.05），但转导反义 6A8 DNA细胞的增殖反应无变化。对低分子量 BCGF或 IL- 6诱导的刺激，转导正义 6A8或反义 6A8对细胞的增殖反应均无影响。结论 6A8α-甘露糖苷酶活性增高使 3D5细胞对 SAC刺激的增殖反应增强。 6A8α-甘露糖苷酶活性变化对低相对分子质量 BCGF或 IL- 6诱导的增殖反应无影响。

关键词： 6A8 α-甘露糖苷酶 3D5 B细胞增殖反应

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大鼠免疫相关脑区的定位

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 525-528页

作者：高扬黄以光林嘉友王东林荣安中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学教研室北京100005

目的定位免疫功能相关的中枢脑区。方法以大鼠脑内细胞因子 IL- 1β、 IL- 6、 IL- 2和 TGF-β 1的表达为观察指标 ,应用免疫组化 ABC法和免疫荧光法 ,比较不同免疫状态大鼠与正常对照大鼠脑内 IL- 1β、 IL- 6、 IL- 2和 TGF-β 1阳性... 详细信息

目的定位免疫功能相关的中枢脑区。方法以大鼠脑内细胞因子 IL- 1β、 IL- 6、 IL- 2和 TGF-β 1的表达为观察指标 ,应用免疫组化 ABC法和免疫荧光法 ,比较不同免疫状态大鼠与正常对照大鼠脑内 IL- 1β、 IL- 6、 IL- 2和 TGF-β 1阳性细胞的分布，以及细胞因子的表达与免疫状态的关系；分析 IL- 1β、 IL- 6和 TGF-β 1阳性细胞的细胞性质。结果（ 1）在免疫组和对照组大鼠多个脑区中观察到 IL- 1β、 IL- 6和 TGF-β 1阳性细胞的分布，但仅有下丘脑外侧区 (LH)和前杏仁核（ AA）内 IL- 1β、 IL- 6和 TGF-β 1的表达与大鼠是否被抗原免疫有关。（ 2）细胞双标记证明表达细胞因子的细胞为神经元。结论下丘脑外侧区和前杏仁核为参与神经免疫调节功能的特定脑区之一，该脑区的神经免疫调节功能是通过神经源性细胞因子介导实现的。

关键词：神经免疫调节细胞因子脑功能区

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人IgA Fc受体(CD89)的功能部位

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中国医学科学院学报 2000年第6期22卷 521-524页

作者：任继辉石敏鹿张伟中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学教研室北京100005

目的确定人 IgA Fc受体（ Fcα R, CD89）结合 IgA的功能部位。方法先采用 PCR及点突变 PCR技术获得不同片段的 Fcα R cDNA，再将各片段分别插入表达质粒 pET30a中，在大肠杆菌中表达出不同片段的受体，用一组能够结合 Fcα R的单克隆... 详细信息

目的确定人 IgA Fc受体（ Fcα R, CD89）结合 IgA的功能部位。方法先采用 PCR及点突变 PCR技术获得不同片段的 Fcα R cDNA，再将各片段分别插入表达质粒 pET30a中，在大肠杆菌中表达出不同片段的受体，用一组能够结合 Fcα R的单克隆抗体通过 Western印迹法鉴别所表达片段是否具有 Fcα R的功能部位。结果表达了 5种不同片段的 Fcα R，能够封闭 Fcα R的中和抗体仅与受体的远膜区（ EC1）结合。结论 Fcα R的功能部位位于 EC1上。

关键词： Fc受体 IgA 点突变

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