检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2002年第6期18卷 671-675页

作者：李涛梁红雁闫峰卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力 ,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法 ,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内 ,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发... 详细信息

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力 ,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法 ,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内 ,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发现 ,人心钠素基因经肌肉和静脉内直接注射这 2种途径导入后 ,均可使阿霉素肾病动物的尿量体重比明显增加 ,有效利尿作用时间大于 15d。试验期间 ,实验组肾病动物的体重明显增长 ,血浆中的心钠素浓度在基因转移 5d后明显升高 ,但动物尿中的K+和Na+浓度无明显变化。以上结果说明 ,心钠素基因经肌肉和静脉 2种途径导入均可明显改善肾病动物的泌尿功能。

关键词：阿霉素肾病大鼠肌肉注射静脉注射心钠素基因利尿作用比较研究基因治疗逆转录病毒载体

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检测4种热休克基因表达水平的RT-PCR体系的建立及其应用

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 321-324页

作者：李宏帆刘兴荣衡凤燕吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果... 详细信息

目的建立能同时检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA表达水平的RT-PCR体系。方法采用基因克隆、基因重组、体外转录、RT-PCR技术,建立能同时检测细胞中4种热休克基因的RT-PCR体系,并将此体系用于检测SW13细胞中热休克基因的表达。结果构建了用于4种热休克基因mRNA检测的内参照质粒,并经体外转录成内参照RNA(i-RNA);用于SW13细胞中结果显示:hsp70、hsp90α呈典型的热诱导表达,hsp60和hsp90β具有较高水平的组成性表达,并且呈不同程度的热诱导表达。结论新构建的RT-PCR体系可以用于检测人Jurkat细胞中4种热休克基因mRNA的表达水平。

关键词：基因表达热休克基因内参照RNA 逆转录一聚合酶链反应 Jurkat细胞

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高密度脂蛋白诱导内皮细胞系差异表达基因的研究

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中华医学杂志 2002年第13期82卷 921-923页

作者：张文成陈保生曾武威白玲薛红吴纲中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗动脉粥样硬化 (AS)的分子机理 ,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法　应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术 ,分析人脐静脉内皮细胞系 (ECV) 30 4经高密度脂蛋白诱导后表... 详细信息

目的　研究高密度脂蛋白 (HDL)抗动脉粥样硬化 (AS)的分子机理 ,克隆并分析血管内皮细胞在HDL作用下差异表达的已知和未知基因。方法　应用差异显示逆转录聚合酶链反应技术 ,分析人脐静脉内皮细胞系 (ECV) 30 4经高密度脂蛋白诱导后表达明显差异的cDNA。对差异基因进行序列测定和同源性比较 ,Northern印迹分析部分差异基因的表达情况。结果　HDL诱导ECV 30 4细胞出现一些上调和下调表达的cDNA ,差异表达明显的已知基因有 9个 ,其中上调表达的基因包括STE2 0样激酶、PBK1蛋白、转谷氨酰胺酶、肌球蛋白轻链、apobec 1结合蛋白、DAP蛋白 ;下调表达的基因有核糖体蛋白L7a (RPL7A)、线粒体外膜电压依赖性阴离子通道蛋白基因、甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶。差异表达明显的未知基因 4个。Northern印迹证实 ,转谷氨酰胺酶基因表达上调5 0 % ,apobec 1结合蛋白基因表达上调 70 %。结论　HDL可诱导ECV 30 4细胞转谷氨酰胺酶、apobec 1结合蛋白表达水平上调。这两个基因表达水平的升高可能与HDL抗动脉粥样硬化作用相关。

关键词：高密度脂蛋白逆转录聚合酶链反应 HDL 基因表达动脉粥样硬化

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皮下移植心钠素基因表达细胞胶囊对高血压大鼠的降血压效应

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中华医学杂志 2002年第16期82卷 1086-1089页

作者：李涛梁红雁卢果史瑞文卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所中国医学科学院中国协和医科大学

目的　研究微孔胶囊介导的心钠素基因表达细胞的皮下移植对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响。方法　借助于逆转录病毒载体及其包装细胞系的作用 ,将人心钠素基因的逆转录病毒表达重组体和未携带目的基因的逆转录病毒空载体pLNCX分... 详细信息

目的　研究微孔胶囊介导的心钠素基因表达细胞的皮下移植对幼龄自发性高血压大鼠(SHR)血压的影响。方法　借助于逆转录病毒载体及其包装细胞系的作用 ,将人心钠素基因的逆转录病毒表达重组体和未携带目的基因的逆转录病毒空载体pLNCX分别导入SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中 ,制备可从孔中排出心钠素多肽的微孔胶囊 ,并将表达和不表达人心钠素的新生鼠皮肤成纤维细胞分别装入不同的胶囊中 ,封闭后分别植于实验组和对照组幼龄SHR(各 1 0只 )的皮下。移植后每周测定大鼠血浆心钠素水平、血压、尿量、尿液钾、钠浓度和体重 ,连续 7周。结果　在逆转录病毒载体的介导下 ,人心钠素基因既可在逆转录病毒载体的包装细胞系中表达 [(5 84± 0 0 7)ng·1 0 - 6 细胞·2 4h 1 ] ,也可在SHR新生鼠的皮肤成纤维细胞中表达 [(1 3 37± 2 36)ng·1 0 - 6 细胞·2 4h 1 ]。皮下移植胶囊后第 1周 ,实验组大鼠血浆中的心钠素浓度 (1 31pg/ml± 8pg/ml)明显高于对照组 (1 0 4pg/ml± 7pg/ml,t=8 62 ,P <0 0 1 )。 7周观察期间 ,两组大鼠的血压均随个体发育而逐渐升高 ,但实验组血压[(1 2 9± 9)～ (1 69± 9)mmHg]却始终明显低于对照组 [(1 4 5± 1 0 )～ (1 81± 9)mmHg ,P <0 0 5～0 0 1 ) ] ,其中第

关键词：皮下移植心钠素基因表达细胞降血压效应高血压心钠素基因治疗微孔胶囊

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应用基因表达谱芯片研究人腹主动脉瘤细胞周期和细胞凋亡相关基因

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中华外科杂志 2002年第11期40卷 817-819,W003页

作者：郑月宏管珩李拥军刘昌伟刘暴盛齐缪时英中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院血管外科 100730 中国医学科学院基础医学研究所国家分子生物学重点实验室

目的　筛选腹主动脉瘤发生过程中与正常组织差异表达的细胞周期和细胞凋亡相关基因并作初步功能分析。　方法　应用Trizol一步法抽提 2块腹主动脉瘤壁及 2块正常主动脉组织总RNA后 ,OligotexmRNASpin Column操作法分离纯化组织mRNA ;经... 详细信息

目的　筛选腹主动脉瘤发生过程中与正常组织差异表达的细胞周期和细胞凋亡相关基因并作初步功能分析。　方法　应用Trizol一步法抽提 2块腹主动脉瘤壁及 2块正常主动脉组织总RNA后 ,OligotexmRNASpin Column操作法分离纯化组织mRNA ;经逆转录合成荧光分子 (Cy3/Cy5)标记cDNA探针 ,与微矩阵排列的含有 4 0 96种cDNA基因的表达谱芯片杂交 ,利用GenePixPro 3 0软件分析动脉瘤与正常组织中差异表达的基因 ,对所获得的基因进行分子生物信息学分析。　结果　腹主动脉瘤与正常组织间差异表达的细胞周期和细胞凋亡基因有 1 8条 ,占芯片基因总数的 0 44%。其中与细胞周期相关的基因 1 1条 ,与细胞凋亡相关的基因 7条。在动脉瘤组织中表达上调的基因 9条 ,平均Ratio值为 3 860 ,表达下调的 9条 ,平均Ratio值为 0 2 94。生物信息学分析显示 ,该 1 8条差异表达细胞周期和细胞凋亡基因与腹主动脉瘤中平滑肌细胞的生长和凋亡有关。　结论　腹主动脉瘤的发生、发展过程中存在多基因表达调控的改变 ,细胞周期和细胞凋亡基因与腹主动脉瘤中平滑肌细胞等的生长和凋亡有相关性。

关键词：基因表达谱芯片腹主动脉瘤细胞周期细胞凋亡相关基因脱噬作用发病机制

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干细胞因子的研究及其应用

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基础医学与临床 2002年第5期22卷 385-390页

作者：陈松森熊安琪中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

人干细胞因子 (hSCF)是新近发现的重要造血细胞因子 ,它是酪氨酸激酶受体c Kit的配体。SCF主要作用于早期造血干细胞、原始造血祖细胞 ,并且诱导这些细胞的存活、增殖和分化。SCF单独使用生物学作用低 ,但它与其它细胞因子具有强的协同... 详细信息

人干细胞因子 (hSCF)是新近发现的重要造血细胞因子 ,它是酪氨酸激酶受体c Kit的配体。SCF主要作用于早期造血干细胞、原始造血祖细胞 ,并且诱导这些细胞的存活、增殖和分化。SCF单独使用生物学作用低 ,但它与其它细胞因子具有强的协同作用。在临床Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期研究中 ,SCF和G CSF联合应用 ,与单独使用G CSF比较 ,CD34+ 细胞数增加 2～ 3倍。安进公司采用基因重组技术在大肠杆菌中生产的重组人SCF (r methSCF )商品名为STEMGENTM。SCF临床使用 ,包括体内干细胞扩增治疗 (exvivo)和用于基因治疗的体外培养造血干细胞。SCF与G CSF联合使用刺激扩增外周血干祖细胞 (PBPC) ,可用于干祖细胞移植 ,以增加患者所需PBPC的比例 ,减少收集PBPC的次数。本综述主要介绍了人SCF的功能。

关键词：人干细胞因子功能基因克隆生物学活性 hSCF

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疾病基因组学研究——后基因组时代的主旋律

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 217-218页

作者：王琳芳方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

２００１年２月份，６国科学共同体（美、英、日、法、德、中）和Celera公司同时宣告人类基因组测序计划基本完成犤１，２犦，这意味着人类基因组研究取得了“结构基因组学”研究的阶段性突破，进入了以研究基因组功能为主要内容的新阶... 详细信息

２００１年２月份，６国科学共同体（美、英、日、法、德、中）和Celera公司同时宣告人类基因组测序计划基本完成犤１，２犦，这意味着人类基因组研究取得了“结构基因组学”研究的阶段性突破，进入了以研究基因组功能为主要内容的新阶段，这个新阶段，有人将之称为“后基因组时代（postgenomicera）”。由于基因组研究首先是从人类基因组计划开始的，而人类基因组计划的动因是从根本上解决复杂性状疾病的发病机理，因此在后基因组时代，生物医学将成为基因组学研究的“主战场”，疾病基因组学研究则将成为“主旋律”。它们将会因直接利用人类基因组计划的现有成果而大大受益。其中受益最深者当属观念的转变。有人指出后基因组

关键词：后基因组学人类基因组计划病理学疾病基因组学

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全反式维甲酸与单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对胶质瘤的协同杀伤作用

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癌症 2002年第5期21卷 473-479页

作者：张雪峰任祖渊方福德左瑾苏长保王任直马文斌中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院神经外科北京100730 基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

背景与目的:细胞间缝隙连接通讯(gapjunctionalintercellularcommunication,GJIC)是介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(herpessimplixvirusthymidinekinase,HSV-tk)基因治疗中旁观者效应的重要机制。全反式维甲酸(all-trans-retinoticacid,ATRA)可能通过上调胶质瘤细胞GJIC和抑制肿瘤细胞生长的双重作用,促进HSV-tk基因治疗的疗效。本研究的目的在于证实HSV-tk和ATRA联合应用对胶质瘤细胞的协同杀伤作用。方法:分别以1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L3种浓度的ATRA作用于培养的大鼠C6胶质瘤细胞,并研究ATRA对C6胶质瘤细胞分化、增殖、GJIC及connexin43(Cx43)基因转录等方面的影响。将C6细胞与稳定表达HSV-tk基因的C6tk细胞按不同比例混合,分别在含GCV和不同浓度ATRA或仅含GCV的培养基中培养,并于药物作用7天后用MTT法检测旁观者效应。结果:经3种浓度的ATRA作用后,C6胶质瘤细胞均显示出细胞分化的形态学特征。C6细胞的增殖也明显受到ATRA的抑制,绝大多数的活细胞都静止于G1期,100μmol/LATRA对C6细胞增殖的抑制尤其明显,并诱导细胞凋亡。经3种浓度的ATRA分别作用后,C6细胞的GJIC也明显提高,而Cx43基因的转录未受明显影响。旁观者效应实验的结果显示,3种浓度的ATRA均可以明显增强旁观者效应。

关键词：全反式维甲酸单纯疱疹病毒胸苷激酶丙氧鸟苷胶质瘤基因治疗

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小剂量亚硒酸钠和全反式维甲酸联合使用诱导NB4细胞的凋亡及分化

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中华血液学杂志 2002年第12期23卷 628-630页

作者：孙义民左路许彩民沈悌潘华珍张之南中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院

目的　研究小剂量亚硒酸钠 (2～ 5 μmol/L)与全反式维甲酸 (ATRA)联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法　采用膜联蛋白Ⅴ (Annexin Ⅴ )荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻率和DNA片段化的琼... 详细信息

目的　研究小剂量亚硒酸钠 (2～ 5 μmol/L)与全反式维甲酸 (ATRA)联合使用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡及分化的影响。方法　采用膜联蛋白Ⅴ (Annexin Ⅴ )荧光标记试剂盒检测细胞的磷脂酰丝氨酸 (PS)外翻率和DNA片段化的琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,通过流式细胞术检测粒系分化细胞表面特异抗原CD11b表达 ,NBT还原实验检测细胞分化。结果　阴性对照组细胞PS外翻率为 1.2 % ,5 μmol/L亚硒酸钠处理NB4细胞 4 8h后PS外翻率为 0 .8% ,0 .1μmol/LATRA诱导 4 8h后PS外翻率为 2 .0 % ,与对照组相比 ,差异均无显著性 ,而两者联合作用NB4细胞 2 4 ,36 ,4 8h后的PS外翻率分别达到 18.3%、2 5 .9%、5 0 .0 % ,DNA电泳呈典型的梯形带。小剂量 (2 μmol/L)亚硒酸钠没有诱导NB4细胞分化的能力 ,但其与 0 .1μmol/L的ATRA联合使用同单独使用 0 .1μmol/L的ATRA相比 ,CD11b表达阳性细胞率进一步增加 ,NBT还原能力也进一步增强。结论　小剂量的亚硒酸钠与ATRA联合使用可诱导NB4细胞发生凋亡及分化。

关键词：亚硒酸钠全反式维甲酸细胞凋亡细胞分化 NB4细胞株急性白血病

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北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶的cDNA和蛋白质的结构分析

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第1期18卷 64-69页

作者：曾武威张坚陈保生吴钢张可满薛红中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为获得不易感动脉粥样硬化动物北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 .以从北京鸭肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了北京鸭LCAT的cDNA序列 ,推导出其蛋白质氨基酸序... 详细信息

为获得不易感动脉粥样硬化动物北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 (LCAT)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 .以从北京鸭肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了北京鸭LCAT的cDNA序列 ,推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较 .北京鸭LCATcDNA (在GenBank中的注册号为AF32 4 887)全长 195 3bp ,其中开放阅读框架 135 6bp ,编码 4 5 1个氨基酸 ,包括一个由 2 3个氨基酸构成的疏水性信号肽和一个由 4 2 8个氨基酸组成的成熟蛋白 .该成熟蛋白比人LCAT在C端多 12个氨基酸 ,其与鸡、人、家兔的同源性依次为 98%、83%和 82 % .与其它种属LCAT蛋白序列的比较结果表明 ,北京鸭LCAT蛋白质序列虽然在长度上和结构上与其它种属有一定的差异。

关键词：北京鸭卵磷脂胆固醇酰基转移酶 cDNA 蛋白质结构

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