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中国疼痛医学杂志 2025年第3期31卷 196-201页

作者：张泾纬刘尧高灿徐州医科大学江苏省麻醉学重点实验室徐州221004 徐州医科大学江苏省麻醉与镇痛应用技术重点实验室徐州221004 徐州医科大学生命科学学院徐州221004

认知功能障碍是神经病理性疼痛的常见并发症,表现为注意力、记忆力及判断力下降,严重影响病人的生活质量。尽管已有研究揭示神经病理性疼痛与认知功能障碍之间的密切联系,然而其共病的机制尚不完全明确,导致临床治疗策略有限。神经病理... 详细信息

认知功能障碍是神经病理性疼痛的常见并发症,表现为注意力、记忆力及判断力下降,严重影响病人的生活质量。尽管已有研究揭示神经病理性疼痛与认知功能障碍之间的密切联系,然而其共病的机制尚不完全明确,导致临床治疗策略有限。神经病理性疼痛引起的神经元和胶质细胞功能紊乱、神经活性物质的改变及神经回路重塑等现象是潜在的病理基础。本文综述了神经病理性疼痛与认知功能障碍共病的细胞和分子机制,提出了未来研究的潜在方向,并为治疗方法的创新提供了思路。

关键词：神经病理性疼痛认知功能障碍神经元胶质细胞神经活性物质突触可塑性

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结核分枝杆菌echA1蛋白的结构特征和抗原性分析

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中国人兽共患病学报 2023年第6期39卷 556-562,569页

作者：张娇马国荣朱娜杨玉荣宁夏医科大学基础医学院病原生物与免疫学系银川750004

目的对结核分枝杆菌Rv0222基因及其编码蛋白echA1进行生物信息学分析,制备该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究其功能、筛选候选治疗靶点和免疫诊断提供基础。方法利用TMHMM、SignalP6.0、Net Phos3.1、Protpapram、Protscale和sopma等在... 详细信息

目的对结核分枝杆菌Rv0222基因及其编码蛋白echA1进行生物信息学分析,制备该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究其功能、筛选候选治疗靶点和免疫诊断提供基础。方法利用TMHMM、SignalP6.0、Net Phos3.1、Protpapram、Protscale和sopma等在线分析软件分析echA1蛋白的理化性质等信息。抗原表位则利用IEDB网站中的在线分析软件和NetCTL-1.2进行分析。利用分子克隆技术构建pET-30a-Rv0222表达载体并转化入*** BL21(DE3)中,IPTG诱导echA1蛋白表达后经His亲和层析柱纯化并免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。收集结核病患者及健康人血清,ELISA法检测样本中特异性抗体水平。结果Rv0222基因编码的echA1蛋白由262个氨基酸组成,为一种亲脂性蛋白。echA1蛋白二级结构包括α-螺旋(43.51%)、β-折叠(13.74%)、β-转角(9.92%)和无规则卷曲(32.82%)。该蛋白无跨膜区和信号肽,含16个磷酸化位点,并可与fadB、fadB2、fadE1、和accD1等10多种蛋白发生相互作用。表位预测分析显示该蛋白含有多个B细胞表位和T细胞表位。纯化的echA1蛋白可有效引起小鼠的免疫应答,获得的多克隆抗体具有良好的抗原特异性,效价在102400和204800之间。结核病患者抗体检测敏感度为64.6%,健康人抗体检测特异度为94.6%,结核病患者与健康者相比,差异具有统计学意义(t=10.66,P<0.0001)。结论EchA1蛋白为一种稳定性的亲脂性蛋白,含有多个潜在优势B和T细胞表位,并可以与多个脂肪代谢相关蛋白相互作用;制备的多克隆抗体具有很高的抗原特异性;该蛋白在结核病血清学诊断方面具有一定应用价值。

关键词：结核分枝杆菌生物信息学原核表达多克隆抗体 echA1

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泛素连接酶SMURF1催化ADAR1的多聚泛素化修饰

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中国生物化学与分子生物学报 2023年第11期39卷 1630-1637页

作者：周文淼王红霞刘昆梅刘菁屈昱良郭乐宁夏医科大学临床医学院银川750004 宁夏医科大学检验学院银川750004 宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室银川750004

既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕... 详细信息

既往研究发现,SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1(SMAD specific E3 ubiquitin protein ligase 1,SMURF1)通过其E3泛素连接酶活性介导自噬进程,然而SMURF1的泛素化底物蛋白质仍有待进一步挖掘。本文利用免疫共沉淀(Co-IP)联合蛋白质谱分析捕获并鉴定THP-1细胞中SMURF1的相互作用蛋白质集合物,发现在THP-1细胞中SMURF1可与222种蛋白质物理性结合,RNA腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)具有较高的肽段结合分数。构建SMURF1过表达载体并转染到HEK-293T细胞中,Co-IP和Western印迹检测验证外源性SMURF1与内源性ADAR1存在相互作用。qRT-PCR和Western印迹检测结果显示,在HEK-293T细胞中过表达SMURF1后ADAR 1 mRNA水平差异无统计学意义、蛋白质水平明显降低(P<0.05)。用放线菌酮(CHX)分别处理正常和过表达SMURF1的HEK-293T细胞,Western印迹检测显示,过表达SMURF1后ADAR1的半衰期缩短(P<0.05)。进一步在HEK-293T细胞中共转染泛素(Ub)过表达载体和SMURF1过表达载体,通过Co-IP和Western印迹检测结果证实,过表达SMURF1后ADAR1的多聚泛素化水平显著增加(P<0.05)。在蛋白酶体抑制剂(MG132)作用后,Western印迹检测结果表明,蛋白酶体降解途径受抑制后SMURF1对ADAR1的负调控作用减弱(P<0.05)。本研究表明,SMURF1可以与ADAR1相互作用,催化ADAR1的多聚泛素化修饰并介导其蛋白酶体途径降解,为探索SMURF1通过影响ADAR1蛋白质稳定性而具备的多种生物学功能提供理论基础。

关键词： SMAD特异性E3泛素蛋白连接酶1 RNA腺苷脱氨酶1 泛素化翻译后修饰

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多状态Markov模型在阿尔茨海默病自然史中的应用

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中国卫生统计 2024年第2期41卷 227-230,234页

作者：秦瑶韩红娟刘龙陈杜荣王浩基崔靖白文琳余红梅山西医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室 030001 山西医科大学基础医学院数学教研室山西医科大学公共卫生学院儿少卫生学教研室重大疾病风险评估山西省重点实验室

目的将多状态Markov模型应用于阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)自然史研究,为慢性病自然史研究提供方法学借鉴。方法基于美国公共数据库ADNI,构建正常认知(normal cognition,NC)-轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)... 详细信息

目的将多状态Markov模型应用于阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)自然史研究,为慢性病自然史研究提供方法学借鉴。方法基于美国公共数据库ADNI,构建正常认知(normal cognition,NC)-轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)-AD多状态Markov模型,估计不同状态间的转移强度、转移概率、影响因素和各状态的逗留时间,绘制生存曲线,并进行模型拟合优度评价。结果性别、年龄、FAQ、MMSE、CDRSB、ADAS13、TMT-B-Time是AD自然史中重要的影响因素;NC与MCI状态的平均逗留时间分别为7.502年,11.621年。多状态Markov模型拟合结果较好。结论多状态Markov模型在AD等多状态慢性病转归研究中具有很好的应用价值。

关键词：多状态Markov模型阿尔茨海默病慢性病自然史

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snx8a基因在早期斑马鱼胚胎中空间和时间特异性表达

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贵州医科大学学报 2025年第1期50卷 18-23页

作者：张乙进杨雁竹罗红莫大双舒莉萍江滟贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院免疫学教研室&细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室&贵州省再生医学重点实验室贵州贵阳550004 中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室贵州贵阳550004 贵州医科大学实验动物中心贵州贵阳550025 贵州医科大学附属医院临床检验中心微生物免疫科贵州贵阳550004

目的探索snx8a基因在斑马鱼早期胚胎中的表达情况。方法使用Snap Gene 6.0.2软件对由NCBI数据库上拷贝的人类SNX8、斑马鱼Snx8a和Snx8b氨基酸序列进行氨基酸序列比对,利用转化连接、TA克隆等分子生物学方法构建原位杂交探针质粒;通过收... 详细信息

目的探索snx8a基因在斑马鱼早期胚胎中的表达情况。方法使用Snap Gene 6.0.2软件对由NCBI数据库上拷贝的人类SNX8、斑马鱼Snx8a和Snx8b氨基酸序列进行氨基酸序列比对,利用转化连接、TA克隆等分子生物学方法构建原位杂交探针质粒;通过收集不同发育时相的野生斑马鱼胚胎进行全胚胎原位杂交,观察斑马鱼早期胚胎中snx8a的空间表达情况、使用RT-qPCR检测斑马鱼早期发育不同时期snx8a基因的表达情况。结果氨基酸序列比对结果显示斑马鱼Snx8a较Snx8b与人的SNX8同源性更高;对构建的原位杂交探针质粒双酶切鉴定及测序结果显示,构建的探针质粒序列正确、质粒可用;全胚胎原位杂交结果显示,斑马鱼snx8a基因在胚胎一细胞期就开始表达,之后特异表达于斑马鱼头部及尾部造血区;RT-qPCR结果显示,snx8a基因表达逐渐升高,在胚胎12 hpf时达到峰值(P<0.05)。结论斑马鱼snx8a基因为母源性基因,其可能与斑马鱼神经发育和造血发育相关。

关键词：斑马鱼 snx8a基因生物信息学分析全胚胎原位杂交胚胎发育

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GP35蛋白在牛支原体中互作分子的挖掘

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中国兽医科学 2025年第2期55卷 151-162页

作者：尹号尤留超黄蓉韩瑞高鹏程支飞杰马轲付磊储岳峰中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

通过在牛支原体中表达GP35蛋白,利用IP-MS筛选其在牛支原体中的互作分子,将互作分子及GP35蛋白进行原核表达后展开互作验证。结果表明,牛支原体中的IP-MS筛选到了SSB蛋白和RmuC蛋白,前者为参与DNA复制过程的重要蛋白,而后者与DNA重组过... 详细信息

通过在牛支原体中表达GP35蛋白,利用IP-MS筛选其在牛支原体中的互作分子,将互作分子及GP35蛋白进行原核表达后展开互作验证。结果表明,牛支原体中的IP-MS筛选到了SSB蛋白和RmuC蛋白,前者为参与DNA复制过程的重要蛋白,而后者与DNA重组过程相关。完成对GP35、SSB和RmuC蛋白的原核表达后,通过pull-down确定了GP35蛋白与SSB蛋白和RmuC蛋白存在互作关系,结果将有助于解析GP35蛋白在牛支原体中介导重组的机制。

关键词：牛支原体 GP35重组酶互作分子同源重组

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短链脂肪酸在食物过敏中的免疫调节作用研究进展

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中国免疫学杂志 2024年第7期40卷 1553-1558页

作者：于泳璐谢海徐灵芝山东第二医科大学基础医学院山东省高等学校免疫微环境与炎症性疾病研究特色实验室潍坊261053

食物过敏(FA)是一种潜在致命的免疫病理反应,其发病率持续上升,已成为影响儿童和成人的重要公共卫生问题。肠道厌氧共生细菌通过发酵代谢膳食纤维产生的短链脂肪酸(SCFAs)发挥重要的免疫调节功能,参与FA的发生与发展。本综述将在FA的背... 详细信息

食物过敏(FA)是一种潜在致命的免疫病理反应,其发病率持续上升,已成为影响儿童和成人的重要公共卫生问题。肠道厌氧共生细菌通过发酵代谢膳食纤维产生的短链脂肪酸(SCFAs)发挥重要的免疫调节功能,参与FA的发生与发展。本综述将在FA的背景下讨论SCFAs对肠上皮细胞及多种免疫细胞的免疫调节作用及相关分子机制,以期为FA的预防和治疗提供新思路。

关键词：短链脂肪酸食物过敏肠上皮细胞免疫细胞免疫调节

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用于单细胞RNA分析的循环肿瘤细胞团捕获和单细胞分离方法的质量评估

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分析化学 2023年第4期51卷 513-520页

作者：逄淑云徐澍徐朝跞初亚男马雪萍武海萍邹秉杰周国华南京大学医学院附属金陵医院(东部战区总医院)临床药学科中国药科大学基础医学与临床药学学院南方医科大学药学院中国药科大学药学院南京大学化学化工学院生命分析化学国家重点实验室

循环肿瘤细胞团（Circulating tumor cell cluster, CTC cluster）的单细胞分析对CTC cluster的生物学效应分析极其重要。为了使CTC cluster单细胞分析可以获得最有效的结果，分析前的捕获和单细胞分离的过程必须能够保持CTC cluster的... 详细信息

循环肿瘤细胞团（Circulating tumor cell cluster, CTC cluster）的单细胞分析对CTC cluster的生物学效应分析极其重要。为了使CTC cluster单细胞分析可以获得最有效的结果，分析前的捕获和单细胞分离的过程必须能够保持CTC cluster的完整性和细胞内部RNA的完整。本研究通过单细胞RNA测序中的逆转录方法逆转录并定量3个看家基因进行RNA质控，同时测量CTC cluster的横向直径用于评估CTC cluster的完整性，从而测定CTC cluster捕获和单细胞分离过程对CTC cluster单细胞分析结果的影响。分别采用胰酶-EDTA和非酶细胞解离溶液（Non-enzymatic cell dissociation solution, NECDS）分离CTC cluster中的单细胞，并考察了单细胞分离过程对胞内RNA的影响。考察了负向富集、正向富集和膜过滤捕获方案中不同操作流程对CTC cluster完整性和单细胞内RNA完整性的影响。结果表明，NECDS可快速分离CTC cluster中的单细胞且不会对细胞内RNA产生影响。捕获CTC cluster时，发现旋转孵育以及红细胞裂解处理都会破坏CTC cluster的完整性。因此，含有类似操作步骤的捕获方案均不适合CTC cluster，而操作流程精简的正向捕获方案具有最好的CTC cluster捕获效果，并且不会影响胞内RNA的质量。因此，CTC cluster的单细胞RNA研究需要温和的捕获和单细胞分离方案。本研究为CTC cluster单细胞分析提供了有效的样品制备策略。

关键词：循环肿瘤细胞团单细胞分析单细胞分离细胞团捕获

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多元纵向测量的潜在过程模型在轻度认知障碍逆转研究中的应用

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中国卫生统计 2024年第1期41卷 64-67,71页

作者：秦瑶韩红娟刘龙陈杜荣马艺菲崔靖白文琳张荣余红梅山西医科大学公共卫生学院卫生统计学教研室 030001 山西医科大学基础医学院数学教研室山西医科大学公共卫生学院儿少卫生学教研室重大疾病风险评估山西省重点实验室

目的将多元纵向测量的潜在过程模型应用于轻度认知障碍向认知正常逆转的研究,为慢性病纵向研究提供方法学借鉴。方法基于多个纵向认知标记物共同代表同一个潜在认知过程的假设,构建多元纵向测量的潜在过程模型,捕捉潜在认知过程随时... 详细信息

目的将多元纵向测量的潜在过程模型应用于轻度认知障碍向认知正常逆转的研究,为慢性病纵向研究提供方法学借鉴。方法基于多个纵向认知标记物共同代表同一个潜在认知过程的假设,构建多元纵向测量的潜在过程模型,捕捉潜在认知过程随时间的变化轨迹,量化不同纵向认知标记物解释潜在认知过程的贡献,讨论不同认知标记物用以衡量认知功能的敏感性,及其协变量效应。参数估计采用极大似然法,采用残差分析和不同纵向认知标记物解释潜在认知过程所占百分比进行拟合优度评价。结果性别(P=0.004),受教育年限(P=0.002),随访时间(P<0.001)和随访时间的二次方(P<0.001)与潜在认知过程显著相关。性别(P=0.048)与受教育年限(P=0.013)的不同纵向认知标记物之间有统计学差异。残差分析和潜在过程解释纵向测量变异的比例说明模型拟合良好。结论多元纵向数据潜在过程模型在痴呆等慢性病研究中具有很好的应用价值。

关键词：潜在过程纵向数据轻度认知障碍逆转

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达格列净减轻氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡和功能障碍

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中国组织工程研究 2024年第1期28卷 80-85页

作者：赵权威李辉刘大男龚才伟陈龙贵州医科大学附属医院心血管内科贵州医科大学医学科学研究所贵州省贵阳市550004

背景:达格列净是钠-葡萄糖共转运蛋白2的抑制剂,可以通过调节糖代谢和抑制炎症改善内皮细胞功能,从而延缓动脉粥样硬化的进展。目的:观察达格列净对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡和内皮功能障碍的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞分... 详细信息

背景:达格列净是钠-葡萄糖共转运蛋白2的抑制剂,可以通过调节糖代谢和抑制炎症改善内皮细胞功能,从而延缓动脉粥样硬化的进展。目的:观察达格列净对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡和内皮功能障碍的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞分为3组:对照组不进行任何干预,模型组加入氧化低密度脂蛋白处理24 h,达格列净组在加入氧化低密度脂蛋白的基础上给予达格列净干预24 h,CCK-8检测内皮细胞增殖活性,ELISA检测细胞培养上清液中细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1和单核细胞趋化蛋白1水平;硝酸还原酶法检测细胞一氧化氮水平;Hoechst 33342/PI荧光双染和乳酸脱氢酶释放实验检测内皮细胞焦亡情况和焦亡特征;Western blot检测内皮细胞焦亡因子NLRP3、caspase-1、GSDMD、白细胞介素18和白细胞介素1β蛋白表达。结果与结论:①氧化低密度脂蛋白可以导致内皮细胞焦亡和功能障碍;②与对照组相比,模型组细胞活性和一氧化氮水平下降(P<0.05),而乳酸脱氢酶、细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1以及单核细胞趋化蛋白1显著增多(P<0.05);与模型组相比,达格列净组细胞活性和一氧化氮水平明显增加(P<0.05),而乳酸脱氢酶、细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1以及单核细胞趋化蛋白1显著下降(P<0.05);③与模型组相比,达格列净组细胞焦亡率以及焦亡因子NLRP3、caspase-1、GSDMD、白细胞介素18和白细胞介素1β蛋白表达明显减少(P<0.05);④以上结果表明,达格列净可以抑制氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞焦亡并改善内皮细胞功能障碍。

关键词：达格列净焦亡氧化低密度脂蛋白 NLRP3炎症小体人脐静脉内皮细胞内皮细胞功能动脉粥样硬化

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