检索结果-内蒙古大学图书馆

哺乳动物多能干细胞:在创建疾病模型、发病机制、药物发现和个性化治疗中的作用

中国组织工程研究 2025年第1期29卷 136-146页

作者：许文强陈浩林颜昌徐涛谢雅彬李雪玲内蒙古自治区低氧转化医学重点实验室医学技术与麻醉学院基础医学与法医学院包头医学院内蒙古自治区包头市014060 草原家畜生殖调控与繁育国家重点实验室内蒙古大学内蒙古自治区呼和浩特市010010 大连医科大学附属第一医院大连医科大学辽宁省大连市116000

背景:多能干细胞的自我更新和多向分化的特征有可能彻底改变人们对生物学、医学、发育和疾病的理解。干细胞在胚胎发育的早期发挥着重要作用,研究干细胞可以深入理解生物体发育和组织器官形成的基本原理,探索各种疾病的潜在机制,研究受... 详细信息

背景:多能干细胞的自我更新和多向分化的特征有可能彻底改变人们对生物学、医学、发育和疾病的理解。干细胞在胚胎发育的早期发挥着重要作用,研究干细胞可以深入理解生物体发育和组织器官形成的基本原理,探索各种疾病的潜在机制,研究受损组织和器官的修复和再生,以及推动药物发现和个性化治疗。目的:回顾多能干细胞的研究历程,并对多能干细胞的基本类别进行归纳总结,同时阐述常见哺乳动物中各类多能干细胞的建系情况。方法:应用计算机检索PubMed、Web of Science、中国知网和万方数据库,检索词为“多能干细胞,胚胎干细胞,诱导多能干细胞,扩展多能干细胞,家畜多能干细胞,Pluripotent stem cells,Embryonic stem cells,Induced pluripotent stem cells,Expanded potential stem cells,Livestock pluripotent stem cells等”,根据纳入标准和排除标准系统地筛选与哺乳动物多能干细胞相关的文献99篇进行综述分析。结果与结论:(1)小鼠胚胎干细胞经典理论认为,干细胞的多能态分为“初始”(na?ve)态和“始发”(primed)态两种,na?ve态对应于早期胚胎未植入子宫壁前的囊胚内细胞团;primed态对应于植入后的上胚层,二者在表观遗传特征、转录活性、外部信号依赖性和代谢表型等方面存在显著的特征差异;后来研究发现在初始态和始发态之间,还存在一个过渡状态——“形成态”(formative态);事实上,胚胎干细胞的多能性属于连续阶段的发展进程,而不是某种独立的细胞状态。(2)除了从囊胚内细胞团获得多能干细胞之外,还有多种多能干细胞获得方式和建系方法:如利用来源于小鼠胎儿原始生殖细胞所建立的胚胎生殖干细胞;利用Oct3/4,Sox2,c-Myc和Klf4因子诱导成年小鼠和人的成纤维细胞去分化所建立的诱导多能干细胞;体细胞核移植,孤雌激活,以及从新生或成体睾丸组织或卵巢组织中分离并进行类胚胎干细胞培养所建立的胚胎干细胞样细胞系;来源于多种成体组织的极小胚胎样干细胞和来源于前囊胚期的扩展多能干细胞,这些多能干细胞的共同特征为不断自我更新,表达核心多能因子,并具备原始三胚层分化能力。(3)目前,多能干细胞正在被用于疾病建模,以便研究不同疾病的机制并开发新的药物。同时,科学家正在尝试用多能干细胞培养各种组织和器官,为再生医学和移植提供新的可能性。然而,多能干细胞的临床应用面临着安全性挑战,包括细胞畸变和免疫排斥问题。不断改进多能干细胞的产生方法,将使其更安全、高效地适用于临床。(4)借鉴小鼠和人多能干细胞的获得方式和建系方法,研究者们已经在家畜中建立了各类多能干细胞,包括胚胎干细胞、诱导性多能干细胞、生殖细胞谱系的多能干细胞和扩展多能干细胞,这将为动物繁殖育种、基因工程、疾病模型、新药筛选和野生濒危动物保护提供新的途径。

关键词：多能干细胞胚胎干细胞诱导多能干细胞扩展多能干细胞家畜多能干细胞患者特异性多能干细胞

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股前外侧皮瓣常用术语的中西方表达差异计量学分析

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中国临床解剖学杂志 2024年第5期42卷 586-588页

作者：毛以华赵丽娜张鑫鑫戴旌羽丁茂超崔怀瑞温州医科大学基础医学院人体解剖学教研室浙江温州325035

目的以股前外侧皮瓣(anterolateral thigh flap,ALT)的全球推广为背景,初探ALT常用术语的中西方表达差异,为医学领域的精准交流和ALT技术的更广泛应用提供清晰的概念区分和理论支持。方法通过中国知网、中国科学院—术语在线、PubMed、G... 详细信息

目的以股前外侧皮瓣(anterolateral thigh flap,ALT)的全球推广为背景,初探ALT常用术语的中西方表达差异,为医学领域的精准交流和ALT技术的更广泛应用提供清晰的概念区分和理论支持。方法通过中国知网、中国科学院—术语在线、PubMed、Gray’s Anatomy、Wikipedia以及Research gate等检索平台进行ALT相关主题词的检索,并对检索结果进行计量学分析。结果在ALT研究领域,经不同的主题词检索出的文献数量有显著差异。结论由于不同国家和地区的医学教育体系、临床实践传统以及语言文化背景的差异,导致了ALT常用术语表达上的多样性,国人向外界投稿时应尽可能地使用本领域的特色术语,从而让ALT技术得到更好的推广与应用。

关键词：股前外侧皮瓣文献检索常用术语表达差异

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吐根碱通过GLP-1R促进大鼠胰岛组织胰岛素分泌作用的研究

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中国药理学通报 2024年第7期40卷 1267-1272页

作者：薛欢路志红王彬余思婷张茜胡斌曾庆轩章毅山西医科大学基础医学院药理学教研室山西太原030001 山西医科大学药学院山西太原030001 山西医科大学教育部医药基础研究创新中心山西太原030001

目的探讨吐根碱通过胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R)促进离体大鼠胰岛组织胰岛素分泌作用。方法分离大鼠胰岛组织进行胰岛素分泌实验,根据实验设计使用不同浓度的吐根碱(2、10、50μmol·L^(-1))、... 详细信息

目的探讨吐根碱通过胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R)促进离体大鼠胰岛组织胰岛素分泌作用。方法分离大鼠胰岛组织进行胰岛素分泌实验,根据实验设计使用不同浓度的吐根碱(2、10、50μmol·L^(-1))、不同浓度葡萄糖(2.8、11.1、16.7 mmol·L^(-1))以及特异性GLP-1R拮抗剂Exendin(9-39)孵育胰岛组织。酶联放射免疫的检测方法测定每组上清液胰岛素分泌量。使用SYBYL-X2.0软件将小分子化合物与GLP-1R(PDB代码:5NX2)进行对接。结果胰岛素分泌实验结果显示在高糖(11.1 mmol·L^(-1))条件下,胰岛素分泌量在吐根碱作用下明显升高,且具有剂量依赖性。低糖(2.8 mmol·L^(-1))条件下,胰岛素分泌量在吐根碱干预下没有明显变化,但在高糖(11.1、16.7 mmol·L^(-1))条件下,胰岛素分泌量在吐根碱作用下明显升高,具有类似GLP-1R激动剂葡萄糖浓度依赖性促胰岛素分泌特点。吐根碱与GLP-1R对接打分是Total Score=6.82,C Score=5,表明吐根碱与GLP-1R有良好的亲和力。当GLP-1R被Exendin(9-39)阻断后,吐根碱促胰岛素分泌作用明显降低。结论吐根碱通过激活GLP-1R发挥促离体大鼠胰岛组织胰岛素分泌作用。

关键词：胰高血糖素样肽-1受体分子对接 2型糖尿病吐根碱胰岛素分泌小分子化合物

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肝硬化合并新型冠状病毒感染的研究进展

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中国感染与化疗杂志 2024年第4期24卷 476-483页

作者：王雅婷张策吕梦瑶申川赵彩彦河北医科大学第三临床医学院石家庄050051 河北医科大学第二医院消化内科河北医科大学第三医院感染科河北省感染性疾病临床医学研究中心河北省重大传染病诊治与应急防控重点实验室

由新型冠状病毒(新冠病毒)引发的新冠病毒感染(COVID-19)至今仍呈全球流行,虽然其对人类的威胁在逐渐减弱,但老年人、免疫功能缺陷人群以及伴有严重基础疾病患者的重症率、病死率仍高于一般人群。肝硬化是一种进展期慢性肝病,全球共有1... 详细信息

由新型冠状病毒(新冠病毒)引发的新冠病毒感染(COVID-19)至今仍呈全球流行,虽然其对人类的威胁在逐渐减弱,但老年人、免疫功能缺陷人群以及伴有严重基础疾病患者的重症率、病死率仍高于一般人群。肝硬化是一种进展期慢性肝病,全球共有1.12亿例患者,每年约200万例死于失代偿并发症及肝细胞癌[1],造成了沉重的健康和经济负担。肝硬化患者因存在免疫功能障碍,感染新冠病毒后将加快患者肝硬化病程,促进急性失代偿事件的发生[2]。尽管对COVID-19的认识不断增加,但有关肝硬化合并COVID-19这一特殊人群的具体管理流程仍在不断探索和优化中。因此,本文就肝硬化患者合并COVID-19的流行病学、发病机制、高危因素及预后评估、临床特点、治疗及疫苗预防的进展展开综述。

关键词：肝硬化新型冠状病毒感染治疗

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SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域编码基因的体外转录及其在293T细胞中的表达

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中国动物传染病学报 2023年

作者：周雪高磊张瑾宬袁思凌操蓉刘丽娜贵州医科大学基础医学院/生物与工程学院贵州省感染免疫与抗体工程特色重点实验室贵州省细胞免疫治疗工程研究中心贵州医科大学生物与医学工程重点实验室贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室

为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）刺突蛋白受体结合结构域（RBD）的体外转录mRNA，将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD；重组质粒转染哺乳动物细胞2... 详细信息

为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）刺突蛋白受体结合结构域（RBD）的体外转录mRNA，将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD；重组质粒转染哺乳动物细胞293T后，Western blot检测重组蛋白RBD的表达；以表达RBD的重组质粒为模板，PCR扩增包含T7启动子的RBD基因片段作为体外转录模板，之后利用T7转录试剂盒体外转录获得修饰的RBD mRNA，添加多聚腺苷酸尾后使用RNA纯化试剂盒进行纯化，纯化后的RBD mRNA转染至293T细胞中，利用Western blot进行目的蛋白表达鉴定。结果显示，编码RBD的重组质粒构建成功并能在293T细胞中表达外源蛋白，体外转录获得修饰的RBD mRNA能在哺乳动物细胞中翻译，表达的RBD蛋白能与抗RBD的单克隆抗体反应，具有免疫反应原性，为SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗的研制奠定了基础。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2 刺突蛋白受体结合结构域体外转录真核表达

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一株耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌噬菌体的分离鉴定和临床应用

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微生物学通报 2023年第7期50卷 3035-3048页

作者：刘自强潘勇军谭新杨永清熊敏周宁侯洁薇丁训梅马迎飞余加林重庆医科大学附属儿童医院新生儿科国家儿童健康与疾病临床医学研究中心儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童感染免疫重庆市重点实验室重庆404100 中国科学院深圳先进技术研究院深圳合成生物学创新研究院中国科学院定量工程生物学重点实验室广东深圳518055 南方科技大学医院广东深圳518055

【背景】耐药菌感染是人类生命健康的重要威胁,寻找抗生素替代或辅助疗法迫在眉睫,噬菌体是细菌的天敌,有很大的开发潜力。【目的】分离针对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii, CRAB)的烈性噬菌体... 详细信息

【背景】耐药菌感染是人类生命健康的重要威胁,寻找抗生素替代或辅助疗法迫在眉睫,噬菌体是细菌的天敌,有很大的开发潜力。【目的】分离针对耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii, CRAB)的烈性噬菌体,治疗患者CRAB肺部感染,为噬菌体疗法的推广积累经验。【方法】用CRAB临床菌株NAB11B做宿主菌,从医院污水中分离新噬菌体,进行生物学特征和基因组特点的表征、分析后制备成高纯度的噬菌体制剂,通过雾化吸入的方式治疗肺部CRAB感染,评估噬菌体疗法的有效性和安全性。【结果】分离到一株新噬菌体,命名为AB_SZL4,其潜伏期短、增殖速度快、抑菌能力强、生物学稳定性高且不携带有害基因。在临床应用中,噬菌体鸡尾酒联合抗生素疗法能快速清除肺部病原菌,且未见明显噬菌体相关不良反应。【结论】AB_SZL4是一株有极大临床应用潜力的烈性噬菌体。

关键词：耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌噬菌体生物学特性基因组学分析噬菌体疗法

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天麻素与薯蓣皂苷元配伍抗大鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤的作用

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医药导报 2024年

作者：王志昊祝娜唐茂红付饶阿热依·巴哈提李彦文黄秀兰李志勇中国中医科学院中药研究所中央民族大学药学院山西中医药大学基础医学院中国中医科学院中医药信息研究所

摘要目的探讨天麻素（Gas）、薯蓣皂苷元（Dio）及其组合物（GDC）对大鼠缺氧损伤脑微血管内皮细胞（BMECs）的保护作用及对脑微血管新生的影响及其作用机制。方法将BMECs分为5组：正常对照组，模型对照组，Gas组(1、2、4、8、16、32μm... 详细信息

摘要目的探讨天麻素（Gas）、薯蓣皂苷元（Dio）及其组合物（GDC）对大鼠缺氧损伤脑微血管内皮细胞（BMECs）的保护作用及对脑微血管新生的影响及其作用机制。方法将BMECs分为5组：正常对照组，模型对照组，Gas组(1、2、4、8、16、32μmol·L-1)，Dio组(0.25、0.5、1、2、4、8μmol·L-1)和GDC组(Gas:Dio=1:0.25、2:0.5、4:1、8:2、16:4、32:8μmol·L-1)。分组给药12h后，对模型对照组、Gas组、Dio组和GDC组通过氧糖剥夺法建立BMECs缺氧模型。检测乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、白细胞介素1β（IL-1β）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）浓度；采用Hoechst33258、FITC-AnnexinV/PI染色，检测细胞侵袭能力、迁移能力、血管形成能力，考察Gas、Dio及GDC对缺氧损伤BMECs的保护作用及促进血管新生作用。进一步利用网络药理学和分子对接方法研究GDC抗脑缺血的作用机制。结果Gas、Dio以（2:0.5）μmol·L-1比例组合时，可显著提高缺氧损伤BMECs细胞活力（P<0.05），促进细胞增殖；与模型对照组比较，Gas组LDH漏出率降低（P<0.05）；Gas组、Dio组与GDC组IL-1β含量均显著下降（均P<0.05），Gas组、GDC组SOD活力升高（P<0.05），Gas组、Dio组以及GDC组凋亡小体明显减少，Gas、Dio具有抗炎、抗氧化和抗细胞凋亡活性。GDC可促进BMECs缺氧模型的增殖、侵袭、迁移以及小管形成，表明其在细胞水平上具有一定程度的促进血管新生作用。网络药理学研究发现，Gas与胱天蛋白酶3（CASP3）、过氧化物酶体增生激活受体γ（PPARG）、F2、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶（Akt）1蛋白具有良好的结合活性，Dio与内皮一氧化氮合成酶（NOS3）、KDR蛋白具有良好的结合活性，Gas、Dio可能主要通过血管内皮生长因子（VEGF）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、磷酯酰肌醇3-激酶（PI3K）-Akt信号通路以及缺氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路调控脑缺血后血管新生。结论 Gas、Dio及GDC具有抗缺氧损伤作用并可促进缺氧损伤后血管新生，作用机制可能与其作用于Akt 1、NOS3、VEGFR2等蛋白，调控VEGF/Akt/MAPK等信号通路促进血管新生有关。

关键词：天麻素薯蓣皂苷元脑缺血脑微血管内皮细胞血管新生

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亚慢性砷暴露对大鼠肝脏糖代谢影响

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中国公共卫生 2022年第9期38卷 1193-1198页

作者：杨秀丽吴先进安仙蓉杨慧兰管俊欢梁冰贵州医科大学基础医学院药理学教研室贵阳550025 贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室

目的探讨亚慢性砷暴露对大鼠肝脏糖代谢的影响及相关分子机制。方法以SD大鼠为研究对象,实验设对照组(灌胃蒸馏水)、亚砷酸钠(NaAsO_(2))高、中、低剂量组(8、4、2 mg/kg,灌胃NaAsO_(2))。连续12周。记录大鼠体重,第12周口服葡萄糖耐... 详细信息

目的探讨亚慢性砷暴露对大鼠肝脏糖代谢的影响及相关分子机制。方法以SD大鼠为研究对象,实验设对照组(灌胃蒸馏水)、亚砷酸钠(NaAsO_(2))高、中、低剂量组(8、4、2 mg/kg,灌胃NaAsO_(2))。连续12周。记录大鼠体重,第12周口服葡萄糖耐量试验(OGTT)检测葡萄糖耐受情况。12周后处死大鼠,取毛发和肝脏,检测毛发砷含量、肝脏糖原含量、己糖激酶和丙酮酸激酶活性;观察肝脏病理变化;检测糖代谢相关蛋白磷脂酰肌醇–3–激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶–3β(GSK3β)、磷酸化糖原合成酶激酶–3β(P-GSK3β)、葡萄糖转运体2(GLUT2)、葡萄糖转运体4(GLUT4)表达情况。结果统计大鼠体重变化发现,亚砷酸钠高、中剂量组雄性和雌性大鼠体重在第8、12周时有所降低;与对照组[0.43±0.08]mg/kg相比,NaAsO_(2)高、中、低剂量组[(49.24±8.02)、(21.06±3.42)、(14.59±2.00)mg/kg]毛发砷含量明显升高(P<0.05);大鼠葡萄糖耐量异常、肝脏糖原含量降低;与对照组己糖激酶、丙酮酸激酶[(2.84±0.08)、(55.95±0.96)(U/mg)]活性相比,NaAsO_(2)高、中剂量组己糖激酶[(1.94±0.11)、(2.14±0.03)(U/mg)]、丙酮酸激酶[(43.64±1.05)、(44.26±0.10)(U/mg)]活性降低(P<0.05);病理结果显示,NaAsO_(2)高、中剂量组肝细胞轻度脂肪变性,有较多圆形空泡产生;WB结果表明,与对照组[PI3K(1.03±0.02)、AKT(1.36±0.02)、P-GSK3β/GSK3β(0.96±0.04)、GLUT2(1.24±0.12)、GLUT4(1.80±0.15)]相比,NaAsO_(2)高剂量组PI3K[0.76±0.06]、 AKT[1.19±0.04]、 P-GSK3β/GSK3β[0.76±0.03]、 GLUT2[0.82±0.11]和GLUT4[0.88±0.14]蛋白表达降低,NaAsO_(2)中剂量组AKT[1.08±0.10]、 GLUT4[1.38±0.10]蛋白表达降低,NaAsO_(2)低剂量组GLUT4[1.10±0.12]蛋白表达降低(P<0.05)。结论亚慢性砷暴露可致大鼠肝脏糖代谢紊乱,其机制可能与改变糖原含量、影响糖代谢相关酶活性和相关蛋白表达有关。

关键词：亚砷酸钠 SD大鼠肝脏糖代谢

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藻蓝蛋白调控Wip1/p53通路诱导人肝癌细胞系HepG2凋亡的作用

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中国生物化学与分子生物学报 2025年第5期41卷 741-752页

作者：贾云晰霍达姚超李敏刘富灵苑红薛慧婷扈瑞平内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010059 内蒙古医科大学公共卫生学院呼和浩特010110

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)早期难以发现且现有治疗方法副作用大、易产生耐药性。本文旨在探讨藻蓝蛋白(phycocyanin,PC)对人肝癌细胞系HepG2凋亡的影响及潜在的作用机制。研究利用0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10μg/mL P... 详细信息

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)早期难以发现且现有治疗方法副作用大、易产生耐药性。本文旨在探讨藻蓝蛋白(phycocyanin,PC)对人肝癌细胞系HepG2凋亡的影响及潜在的作用机制。研究利用0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10μg/mL PC分别处理HepG2细胞12 h,10μg/mL PC和2.5μmol/L Wip1抑制剂(Wip1i)GSK 2830371单独以及联合处理HepG2细胞12 h和24 h,以CCK-8细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞增殖水平;采用Annexin V-FITC/Propidium Iodide双染法结合流式细胞术检测细胞凋亡水平;应用TMT蛋白质定量技术分析蛋白质组学的差异表达情况;Western印迹检测细胞Wip1、p53和磷酸化-p53(Ser15)蛋白质表达水平。CCK-8结果显示,PC在一定浓度范围内能够有效抑制HepG2细胞增殖,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度为19.37μg/mL。流式细胞术结果显示,PC能够显著诱导细胞凋亡,凋亡率为30.40%。定量蛋白质组学分析显示,PC能够诱导p53通路活化。CCK-8结果显示,Wip1i能够增强PC对HepG2细胞的杀伤作用。利用Western印迹分析发现,PC抑制Wip1表达,诱导p53蛋白磷酸化,促进p53总蛋白质表达。同时,Wip1i能够进一步促进PC活化p53通路,增加p53和pP53(S15)的表达。综上所述,PC可能通过抑制p53负调节因子Wip1的活性,进而通过Wip1/p53通路诱导细胞凋亡。

关键词：肝细胞癌藻蓝蛋白凋亡 p53 蛋白质组学

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幽门螺杆菌荧光蛋白报告系统的构建

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中国病原生物学杂志 2022年第6期17卷 643-648页

作者：管玉祝王鑫鑫吴道艳洪伟向松吴晓娟张玉典崔古贞陈峥宏贵州省病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室地方病与少数民族疾病教育部重点实验室

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)两种报告系统。方法利用PCR方法扩增幽门螺杆菌内源组成型尿素酶基因启动子(PureA),利用重叠延伸PCR方法将PureA启动子分别与绿色荧光蛋白基因(gfp)和红... 详细信息

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)绿色荧光蛋白(GFP)和红色荧光蛋白(RFP)两种报告系统。方法利用PCR方法扩增幽门螺杆菌内源组成型尿素酶基因启动子(PureA),利用重叠延伸PCR方法将PureA启动子分别与绿色荧光蛋白基因(gfp)和红色荧光蛋白基因(rfp)连接,构建两类荧光蛋白基因表达盒PureA-gfp和PureA-rfp。利用无缝组装技术将PureA-gfp和PureA-rfp表达盒分别与EcoRI单切的自杀质粒载体pSD连接,构建两类荧光蛋白基因表达报告质粒pSD-GFP和pSD-RFP。将上述两类荧光蛋白报告质粒分别转化幽门螺杆菌26695,涂布卡那霉素抗性平板,利用同源重组方法构建两类荧光蛋白基因工程菌株Hp::gfp和Hp::rfp。利用卡那霉素抗性和PCR方法筛选阳性工程菌株,并利用荧光显微镜检测两种荧光蛋白在幽门螺杆菌中的表达状况。结果工程菌株能够在卡那霉素抗性平板生长,PCR扩增目的基因片段与预期结果一致,表明gfp和rfp基因表达盒成功插入到幽门螺杆菌染色体靶位点。荧光显微镜下分别观察到明亮的绿色荧光和红色荧光,而野生型对照菌株无任何荧光,表明gfp和rfp基因在幽门螺杆菌中成功表达。结论在幽门螺杆菌中成功构建GFP和RFP两种荧光蛋白报告系统,为幽门螺杆菌的转录调控及致病机制研究提供了良好的检测手段。

关键词：幽门螺杆菌绿色荧光蛋白红色荧光蛋白基因表达报告系统

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