目的探讨利拉鲁肽通过沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)通路改善小鼠肝脏脂质变性的机制。方法将24只健康雄性6周龄C57BL/6J小鼠...
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目的探讨利拉鲁肽通过沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)通路改善小鼠肝脏脂质变性的机制。方法将24只健康雄性6周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、模型+利拉鲁肽组、模型+SIRT1组、模型+SIRT1+利拉鲁肽组、模型+SIRT1-NC组,每组4只。对照组普通饲料饲养,予以等容积生理盐水皮下注射,模型组高脂饲养12周建立代谢相关脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)模型,之后3周尾静脉注射SIRT1干扰慢病毒及利拉鲁肽。检测各组小鼠血清甘油三酯和丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平,采用HE染色和油红O染色观察肝组织病理,采用实时荧光定量RT-PCR检测AMPK、SIRT1、肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)和去乙酰化固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)基因表达水平,采用Western blot检测蛋白表达水平。结果利拉鲁肽可降低高脂喂养的C57BL/6J小鼠体质量、肝湿重、血清甘油三酯及ALT水平,油红O染色可见肝细胞脂滴减少。与模型组相比,模型+利拉鲁肽组SIRT1(0.212±0.110比0.076±0.010)、AMPK(0.518±0.051比0.248±0.023)、LKB1(1.023±0.039比0.576±0.029)基因表达量和AMPK(0.212±0.026比0.100±0.006)、LKB1(0.413±0.016比0.221±0.015)蛋白表达水平均上调,而SREBP-1c基因(0.727±0.249比9.007±1.530)和蛋白(0.187±0.008比0.824±0.114)表达水平均下调(P均<0.05)。与模型组相比,模型+SIRT1组SIRT1(0.029±0.003比0.076±0.010)、AMPK(0.105±0.013比0.248±0.023)、LKB1(0.333±0.106比0.576±0.029)基因表达量均下调(P均<0.05)。与模型+SIRT1组相比,模型+SIRT1+利拉鲁肽组LKB1(0.945±0.110比0.333±0.106;0.380±0.004比0.145±0.014)、AMPK(0.319±0.051比0.105±0.013;0.181±0.039比0.051±0.012)基因表达量和蛋白表达量均上调,而SREBP-1c基因表达量(4.239±0.554比12.740±0.976)下调(P均<0.05)。结论利拉鲁肽改善C57BL/6J小鼠肝脏脂毒性可能通过直接上调SIRT1/AMPK通路信号分子基因和蛋白表达水平,或间接激活LKB1并增强AMPK基因和蛋白表达、拮抗SREBP-1c基因和蛋白表达,从而降低脂质合成相关分子水平,而干扰SIRT1表达削弱了利拉鲁肽上调SIRT1/AMPK通路改善肝脏脂肪变性的作用。
目的探究Tim-3/Galectin-9负性信号通路在亲缘HLA单倍体相合外周血造血干细胞移植中的变化特点及其临床意义。方法以行单倍体造血干细胞移植的36例患者和20例健康者为研究对象,通过FCM监测患者及健康对照组外周血中CD4^(+)T细胞和Tim-3分子的表达情况,ELISA法检测移植后患者细胞因子Galectin-9、IFN-γ、IL-4、TGF-β和IL-17的动态变化。结果根据西雅图国际诊断标准,移植术后有14例患者发生aGVHD,22例患者未发生aGVHD。①未发生aGVHD患者移植后30~90 d CD4^(+)T细胞百分比均低于健康对照组(P<0.05);未发生aGVHD患者移植后血清中细胞因子Galectin-9、TGF-β、IFN-γ、IL-4和IL-17水平呈现逐渐增高的趋势,Galectin-9和TGF-β水平在移植后60 d达到正常值(P>0.05),IFN-γ、IL-4和IL-17在移植后第90天恢复到正常水平(P>0.05)。Spearman相关分析结果显示Galectin-9与TGF-β变化水平呈正相关(r=0.651,P=0.001);②发生aGVHD患者外周血中Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞的百分比和IFN-γ、IL-17水平明显高于不发生aGVHD患者(P<0.01);不发生aGVHD患者的Galectin-9和TGF-β水平更高(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞的百分比与IFN-γ水平呈正相关(r=0.631,P=0.015)。结论单倍体相合外周血造血干细胞移植后细胞因子Galectin-9和TGF-β的早期快速重建可以避免或减缓aGVHD的发生,移植后动态监测Tim-3^(+)CD4^(+)T细胞持续较多而血清中Galectin-9水平下降可能预示着aGVHD的发生。
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