检索结果-内蒙古大学图书馆

中国微生态学杂志 2022年第5期34卷 540-543页

作者：邓国英刘欣杨淑凤大连医科大学基础医学院微生物学教研室辽宁大连116044

目的确定卡介苗(BCG)中荚膜中糖成分阿拉伯甘露聚糖(AM)的功能。方法本研究从我国目前普遍使用的BCG中,利用氯仿甲醇抽提方法分离纯化荚膜AM,经AM单克隆抗体鉴定后,腹腔注射BCG致敏小鼠,体内外评价AM的免疫调节功能。结果AM能在小鼠体... 详细信息

目的确定卡介苗(BCG)中荚膜中糖成分阿拉伯甘露聚糖(AM)的功能。方法本研究从我国目前普遍使用的BCG中,利用氯仿甲醇抽提方法分离纯化荚膜AM,经AM单克隆抗体鉴定后,腹腔注射BCG致敏小鼠,体内外评价AM的免疫调节功能。结果AM能在小鼠体内增强BCG诱导的迟发型超敏反应(P<0.01),体外免疫指标检测发现AM提高小鼠脾细胞Th1类细胞因子IFN-γ和TNF-α的表达水平(P<0.05)。结论BCG的荚膜AM是潜在的保护性抗原,并为优化BCG提供理论依据。

关键词：荚膜多糖阿拉伯甘露聚糖卡介苗

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细粒棘球绦虫EgG1Y162新型多表位疫苗的设计及其免疫特性研究

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中国病原生物学杂志 2023年第12期18卷 1424-1429,1433页

作者：张涛郭久鹏魏来热甫克提·艾尼瓦尔努尔阿米乃姆·库杜斯于明凯李玉娇新疆医科大学第一临床学院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院新疆医科大学第一附属医院

目的应用软件和在线网络分析EgG1Y162的氨基酸序列,了解其理化性质及二、三级结构特点;预测该抗原的T、B细胞表位,筛选优势表位并将其与热休克蛋白HSP70进行联合重组表达,验证该新型多表位疫苗刺激机体产生的免疫反应。方法通过NCBI检... 详细信息

目的应用软件和在线网络分析EgG1Y162的氨基酸序列,了解其理化性质及二、三级结构特点;预测该抗原的T、B细胞表位,筛选优势表位并将其与热休克蛋白HSP70进行联合重组表达,验证该新型多表位疫苗刺激机体产生的免疫反应。方法通过NCBI检索获取EgG1Y162和HSP70的氨基酸序列,利用Protparam、NetPhos、TMHMM-2.0等在线程序分析EgG1Y162蛋白的分子质量、等电点、氨基酸组成、跨膜结构域、磷酸化位点,预测其二、三级结构及T、B细胞表位。结合预测结果优化确定最终的表位信息,将优化的优势表位信息与HSP70分子对接,构建重组HSP70-EgG1Y162,通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测对比分析HSP70蛋白、EgG1Y162和HSP70-EgG1Y162诱导产生的免疫反应强度。结果预测EgG1Y162蛋白由120 aa组成,HSP70由762 aa组成。在线分析EgG1Y162蛋白的二级结构中α-螺旋约占22.50%,延长链约占28.33%,β-转角约占6.67%,无规则卷曲约占42.50%。筛选EgG1Y162抗原的优势T、B细胞表位,然后以HSP70蛋白为载体与EgG1Y162抗原T-B细胞联合表位及连接蛋白Linker-GGGS构建HSP70-EgG1Y162多表位疫苗,免疫小鼠后取脾细胞进行ELISPOT检测,反应斑点的灰度值较对照组显著增高,即HSP70-EgG1Y162具有免疫原性。结论生物信息学方法分析预测细粒棘球绦虫EgG1Y162蛋白含有丰富的T、B细胞表位,筛选的优势表位与热休克蛋白HSP70融合后能够增强该新型包虫多表位抗原的免疫原性,ELISPOT证实以HSP70蛋白和EgG1Y162构建的HSP70-EgG1Y162多表位疫苗免疫原性增强,该设计方法有望成为设计优势疫苗的一种新方法,为包虫病的预防提供新思路。

关键词： EgG1Y162 T细胞表位 B细胞表位分子对接

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卵巢癌细胞外泌体抑制外周单个核细胞源性树突状细胞成熟的机制研究

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中华肿瘤防治杂志 2023年第9期30卷 520-526页

作者：董育清王怡李丽华司胜斌汤业珍董晓微盛青松赵薇宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系宁夏银川750001 宁夏回族自治区人民医院中心实验室宁夏银川750011 中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院妇产科福建福州350001

目的探究卵巢癌细胞源性外泌体对人外周血树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠从中分选出CD14^(+)的细胞;采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联... 详细信息

目的探究卵巢癌细胞源性外泌体对人外周血树突状细胞(DCs)成熟的影响。方法从健康人外周血中分离单个核细胞(PBMC),利用免疫磁珠从中分选出CD14^(+)的细胞;采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联合刺激的办法诱导CD14^(+)/PBMC分化为未成熟树突状细胞(iDCs),光镜确认细胞形态;超速离心提取卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体(A2780cis-外泌体),蛋白质印迹法检测其特征性蛋白标志物,透射电镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒跟踪分析仪(NTA)检测外泌体粒径分布;iDCs与A2780cis-外泌体共培养后给予重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)诱导,流式细胞术检测CD83^(+)/HLA-DR^(+)/CD1a^(+)细胞比例变化。结果超速离心提取的卵巢癌顺铂耐药细胞外泌体,TEM下可检测到直径约为60 nm的“杯盏状”外泌体颗粒。蛋白质印迹法结果显示A2780cis细胞各蛋白表达均为1,A2780cis-外泌体中CD9、CD81和CD63相对表达量分别为1.08±0.07、0.67±0.04和1.78±0.19,t值分别为2.928、13.760和7.900,P值分别为0.043、<0.001和0.001;但A2780cis-外泌体无Calnexin表达。NTA检测显示,外泌体粒径范围主要集中于(56.80±1.60)nm。经流式细胞术检测CD14磁珠分选前后CD14^(+)/PBMC比例分别为(10.20±0.53)%和(97.60±0.26)%,t=255.900,P<0.001。rhGM-CSF和rhIL-4联合诱导的CD14^(+)/PBMC,细胞胞体变大,伸出半圆形、梭形、星形等毛刺状突起,形态不规则,表现为iDCs形态特征;rhTNF-α刺激iDCs后,细胞毛刺状突起明显增多,细胞贴壁能力增强,而A2780cis-外泌体与iDCs共培养组接受rhTNF-α刺激后,细胞毛刺状突起较少,细胞贴壁能力减弱。流式细胞术检测结果显示,rhTNF-α诱导前细胞CD86、CD40、HLA-DR、CD1a和CD83比例分别为(86.27±2.25)%、(67.43±0.64)%、(69.50±0.46)%、(68.20±0.46)%和(5.87±0.55)%,符合iDCs抗原表型特征;TNF-α诱导48 h后,CD86、CD40、HLA-DR、CD1a和CD83比例分别为(93.00±2.72)%、(72.67±0.50)%、(75.17±0.55)%、(74.87±0.21)%和(67.23±0.59)%,t值分别为3.300、11.100、13.700、22.940和132.200,CD86组P=0.030,其他组均为P<0.001,符合成熟DCs分化特征。iDCs接受rhTNF-α刺激后CD83、HLA-DR和CD1a比例分别为(67.23±0.59)%、(75.17±0.55)%和(74.87±0.21)%,A2780cis-外泌体共刺激后分别为(37.07±0.15)%、(71.43±0.38)%和(70.30±0.90)%,t值分别为86.290,9.675和8.563,均P<0.001。结论卵巢癌细胞源性外泌体对体外培养的iDCs成熟具有抑制作用。

关键词：顺铂耐药卵巢癌细胞株外泌体体外培养树突状细胞流式细胞术

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蓝舌病毒血清1型VP5蛋白的截短表达及其单克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2025年

作者：刘学春户鑫兵宋昱庆孟凡华田占成关贵全殷宏独军政中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学

参考GenBank中蓝舌病毒血清1型（BTV-1）标准参考株VP5蛋白氨基酸序列，缺失N端1～79位氨基酸，按照大肠杆菌偏嗜性进行基因密码子优化后，合成编码BTV-1 VP5截短蛋白的基因VP5Δ79aa，将其克隆到表达载体pET-28a-sumo上，构建了重组质... 详细信息

参考GenBank中蓝舌病毒血清1型（BTV-1）标准参考株VP5蛋白氨基酸序列，缺失N端1～79位氨基酸，按照大肠杆菌偏嗜性进行基因密码子优化后，合成编码BTV-1 VP5截短蛋白的基因VP5Δ79aa，将其克隆到表达载体pET-28a-sumo上，构建了重组质粒pET-sumo-VP5Δ79aa。将该重组质粒转化到BL21(DE3)感受态细胞中，用0.5 mmol/L IPTG分别在37 ℃和16 ℃条件下进行诱导表达和可溶性分析，经SDS-PAGE检测，重组VP5Δ79aa蛋白主要以包涵体形式表达。用Ni-NTA亲和层析法纯化重组VP5Δ79aa蛋白，得到与预期大小相符的单一目的条带。纯化后的重组VP5Δ79aa蛋白经不同浓度梯度的尿素透析复性后，将其免疫雌性BALB/c小鼠（6～8周龄），取免疫后脾细胞与骨髓瘤细胞融合，获得能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经间接ELISA、免疫荧光和Western-blot分析，筛选得到2株反应性和特异性良好的单克隆抗体4A10和5H11，其不仅能与重组VP5Δ79aa截短蛋白以及重组全长VP5蛋白反应，而且能特异识别BTV-1感染细胞中的天然VP5蛋白，这为深入研究BTV VP5蛋白的生物学功能及其抗原表位鉴定奠定了基础。

关键词：蓝舌病毒 VP5蛋白截短表达单克隆抗体

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circHERC4_041通过编码蛋白质抑制心肌成纤维细胞纤维化表型作用

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中国生物化学与分子生物学报 2025年第3期41卷 393-403页

作者：高原周川孟伍华燕王娅吴茹诗关佩莹方俊涛徐金东刘宇鹏胡志琴单志新南方医科大学附属广东省人民医院医学研究部广州510080 华南理工大学医学院基础医学系广州510006 南方医科大学附属广东省人民医院心内科广州510080 南方医科大学附属广东省人民医院麻醉科广州510080 广州医科大学附属第五医院药学部广州510799

越来越多的研究表明,环状RNA在心肌纤维化中发挥重要调节作用。人环状RNA表达谱芯片检测结果提示,环状RNA circHERC4_041在心衰患者心肌中表达增加,RT-qPCR验证发现,与健康器官捐献者(n=18)心肌组织相比,心衰患者(n=19)中circ HERC4_04... 详细信息

越来越多的研究表明,环状RNA在心肌纤维化中发挥重要调节作用。人环状RNA表达谱芯片检测结果提示,环状RNA circHERC4_041在心衰患者心肌中表达增加,RT-qPCR验证发现,与健康器官捐献者(n=18)心肌组织相比,心衰患者(n=19)中circ HERC4_041的表达显著升高。荧光原位杂交(FISH)检测证实,circHERC4_041在人心肌细胞AC16胞质中丰富存在。利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circHERC4_041可抑制mCFs中纤维化相关蛋白质表达。细胞增殖检测实验、细胞划痕和Transwell实验结果显示,过表达circHERC4_041时,mCFs的增殖和迁移能力被抑制(P<0.001)。序列分析提示,circHERC4_041包含潜在的核糖体进入序列和开放阅读框,蛋白质免疫印迹检测证实,circHERC4_041可翻译516个氨基酸的HERC4-516aa蛋白质,其主要定位于细胞胞质中。细胞功能实验证实,circHERC4_041通过特异翻译HERC4-516aa来抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型(P<0.05)。通过IP-MS筛选和Co-IP鉴定证实,HERC4-516aa与转谷氨酰胺酶2(TGM2)具有特异的相互结合作用,并通过蛋白酶体途径促进TGM2降解。而利用腺病毒介导在mCFs中过表达TGM2可逆转HERC4-516aa对mCFs纤维化表型的抑制作用。本文证实,circHERC4_041翻译的HERC4-516aa蛋白质通过与TGM2相互作用,有效抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型。

关键词：心肌纤维化环形RNA circHERC4_041 翻译心肌成纤维细胞

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AI赋能高校实验教学的人文失范、规约及应对

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高等工程教育研究 2025年第2期 73-78页

作者：刘建明朱雪波温州医科大学医学人文与管理学院山东第二医科大学温州医科大学

实验教学是培养具有实践能力和创新精神的高素质人才的重要环节,AI和虚拟仿真技术在实验教学的广泛应用,推进了实验教学的智能化、效率化和个性化,提升了实验教学的效果。同时,技术的“盲目膨胀”也引发了实验教学中学生人文精神培养的... 详细信息

实验教学是培养具有实践能力和创新精神的高素质人才的重要环节,AI和虚拟仿真技术在实验教学的广泛应用,推进了实验教学的智能化、效率化和个性化,提升了实验教学的效果。同时,技术的“盲目膨胀”也引发了实验教学中学生人文精神培养的新问题。为此,文章重新梳理了AI时代技术与人文的关系,在分析联合国教科文组织关于人工智能与教育相关报告的基础上,从实验的主体、设计、过程、数据、评价和监管六个方面提出AI赋能实验教学的人文规约模型;重点围绕教育影响因素中的技术、场景、教育关系、数据依赖等方面进行了人文失范的分析;最后,从实验规范和教育三要素入手,给出实验教学中AI技术应用引发人文精神培养弱化的应对措施,为智能化时代的实验教学改革和学生人文精神培养提供参考。

关键词：人工智能实验教学人文失范人文规约应对措施

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腹腔注射富氢生理盐水促进高脂血症金黄地鼠胆固醇逆向转运和血脂水平降低

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中国动脉硬化杂志 2024年第12期32卷 1041-1050页

作者：陈微王新程陈远秦树存山东第一医科大学第二附属医院山东省泰安市271000 山东第一医科大学临床与基础医学院山东省泰安市271000 山东第一医科大学泰山氢生物医学研究院山东省泰安市271000

[目的]观察腹腔注射富氢生理盐水(HRS)对高脂饲料饲喂金黄地鼠胆固醇逆向转运的影响。[方法]将雄性金黄地鼠分为三组:正常饮食组、高脂饮食组和高脂饮食+HRS组。高脂饲料饲喂和HRS同时持续干预12周后,将3H-胆固醇标记的巨噬细胞注射到... 详细信息

[目的]观察腹腔注射富氢生理盐水(HRS)对高脂饲料饲喂金黄地鼠胆固醇逆向转运的影响。[方法]将雄性金黄地鼠分为三组:正常饮食组、高脂饮食组和高脂饮食+HRS组。高脂饲料饲喂和HRS同时持续干预12周后,将3H-胆固醇标记的巨噬细胞注射到金黄地鼠体内,检测血液、肝脏、胆汁和粪便中的放射性;通过RT-qPCR和Western blot检测肝脏组织中胆固醇逆向转运相关基因转录水平和蛋白表达水平。[结果]长期的高脂饲料饲喂诱导金黄地鼠出现明显的高脂血症和肝脏脂质蓄积。与高脂饮食组相比,高脂饮食+HRS组金黄地鼠体质量下降(P<0.01),血浆总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)显著降低(P<0.05),甘油三酯(TG)略有降低(P=0.11),高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)显著升高(P<0.01),血浆和肝脏中氧化应激指标丙二醛(MDA)显著降低(P<0.05或P<0.01),抗氧化指标谷胱甘肽(GSH)显著升高(P<0.01),肝体比略下降(P=0.05),肝脏中TC和TG分别下降10.8%(P=0.05)和20.1%(P<0.01),肝脏脂肪变性明显缓解,但是炎症因子水平没有明显变化。同位素示踪结果显示,与高脂饮食组相比,HRS组金黄地鼠血浆3H放射性在24 h和48 h分别下降16.5%(P<0.01)和8.9%(P<0.05),肝脏、胆汁和粪便中的3H放射性分别升高了1.2倍(P<0.05)、1.2倍(P=0.08)和1.1倍(P=0.08)。RT-qPCR和Western blot结果显示,HRS干预使高脂饲料饲喂金黄地鼠肝脏CD36、清道夫受体B1(SR-B1)和低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白水平分别降低39.5%(P<0.05)、40.5%(P<0.01)和28.0%(P<0.01),ATP结合盒转运体G5(ABCG5)和固醇调节元件结合蛋白2(SREBP2)蛋白水平分别升高1.5倍(P<0.05)和1.3倍(P<0.01),同时ATP结合盒转运体A1和G8的mRNA水平分别升高2.9倍(P<0.05)和3.2倍(P<0.01)。[结论]腹腔注射HRS可促进高脂饲料饲喂金黄地鼠胆固醇逆向转运,并发挥降血脂效应;此外,腹腔注射HRS也可能通过抑制肝脏对脂质的摄取和促进肝脏胆固醇外排来缓解肝脏脂质蓄积。

关键词：富氢生理盐水高脂血症金黄地鼠胆固醇逆向转运血脂

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miR-195-3p在同型半胱氨酸诱导的肝氧化应激损伤中的调控作用研究

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中国临床药理学杂志 2022年第17期38卷 2044-2048页

作者：张宏红谢琳盛思琪焦运姜怡邓杨安宁李桂忠宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委员会代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学总医院感染科

目的探讨miR-195-3p在同型半胱氨酸（Hcy）诱导的肝氧化应激损伤中的作用。方法小鼠分为CBS+/+组、CBS+/-组、Lv-miR-195-3p组(CBS+/-小鼠经尾静脉注射病毒滴度为2×10～7 TU·mL-1的miR-195-3p重组慢病毒)、Lv-GFP组(CBS+/-... 详细信息

目的探讨miR-195-3p在同型半胱氨酸（Hcy）诱导的肝氧化应激损伤中的作用。方法小鼠分为CBS+/+组、CBS+/-组、Lv-miR-195-3p组(CBS+/-小鼠经尾静脉注射病毒滴度为2×10～7 TU·mL-1的miR-195-3p重组慢病毒)、Lv-GFP组(CBS+/-小鼠经尾静脉注射等体积病毒滴度为1×10～8 TU·mL-1的绿色荧光蛋白慢病毒)和PBS组(CBS+/-小鼠经尾静脉注射等体积磷酸盐缓冲液),每组10只。体外培养人源肝细胞（HL-7702）,分为对照组(0μmol·L-1Hcy)、Hcy组(100μmol·L-1Hcy)、mimic-NC组（转染模拟物对照组）、mimic-NC+Hcy组(转染模拟物对照组+100μmol·L-1Hcy)、miR-195-3p-mimic组（转染miR-195-3p模拟物）、miR-195-3p-mimic+Hcy组(转染miR-195-3p模拟物+100μmol·L-1Hcy)、inhibitor-NC组（转染抑制物对照组）、inhibitor-NC+Hcy组(转染抑制物对照组+100μmol·L-1Hcy)、miR-195-3p-inhibitor组（转染miR-195-3p抑制物）、miR-195-3p-inhibitor+Hcy组(转染miR-195-3p抑制物+100μmol·L-1Hcy)。用实时荧光定量聚合酶链反应检测肝组织和肝细胞中miR-195-3p的表达水平，用试剂盒检测肝组织及肝细胞中丙二醛（MDA）含量和总超氧化物歧化酶（T-SOD）活性。结果 Lv-miR-195-3p组、Lv-GFP组和PBS组肝组织中miR-195-3p相对表达量分别为2.29±0.67,0.73±0.09和0.57±0.27,MDA含量分别为（1.82±0.19）,（0.99±0.13）和（1.19±0.18）nmol·mg-1prot, T-SOD活性分别为（229.64±63.62）,（377.08±75.58）和（336.19±71.49）U·mg-1prot, Lv-miR-195-3p组的上述指标与Lv-GFP组或PBS组比较，差异均有统计学意义（均P<0.05）。对照组和Hcy组的miR-195-3p相对表达量分别为2.88±0.41和6.51±2.21,差异有统计学意义（P<0.05）。mimic-NC+Hcy组、miR-195-3p-mimic+Hcy组、inhibitor-NC+Hcy组和miR-195-3p-inhibitor+Hcy组的MDA含量分别为（1.18±0.17）,（2.58±0.24）,（1.92±0.11）和（0.97±0.10）nmol·mg-1prot, T-SOD活性分别为（50.37±5.61）,（31.74±2.50）,（32.45±2.30）和（41.18±2.55）U·mg-1prot, miR-195-3p-mimic+Hcy组的上述指标与mimic-NC+Hcy组，miR-195-3p-inhibitor+Hcy组的上述指标与inhibitor-NC+Hcy比较，差异均有统计学意义（均P<0.01）。结论 miR-195-3p通过促进Hcy诱导的肝氧化应激，从而加重肝损伤。

关键词：微小RNA miR-195-3p 同型半胱氨酸氧化应激肝损伤

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环状RNA circ＿BRAF＿2在子痫前期胎盘滋养细胞自噬中的作用

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中国临床药理学杂志 2022年第23期38卷 2860-2864页

作者：朱亚飞张玉月谢琳殷荷王艳华吴凯姜怡邓张慧萍宁夏医科大学护理学院宁夏医科大学基础医学院宁夏医科大学国家卫生健康委代谢性心血管疾病研究重点实验室宁夏医科大学宁夏血管损伤与修复研究重点实验室宁夏医科大学临床医学院宁夏医科大学总医院妇科湖南省妇幼保健院医学遗传科

目的研究子痫前期（PE）患者胎盘组织中环状RNA circ＿BRAF＿2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响。方法选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例；将HTR-8/SVneo细胞分为对照组（常规培养）、pLV-NC组（转染空载体）、pLV-circ＿BRAF＿... 详细信息

目的研究子痫前期（PE）患者胎盘组织中环状RNA circ＿BRAF＿2的表达及其对胎盘滋养细胞自噬的影响。方法选取妊娠对照组与PE组胎盘组织各22例；将HTR-8/SVneo细胞分为对照组（常规培养）、pLV-NC组（转染空载体）、pLV-circ＿BRAF＿2组（转染circ＿BRAF＿2）、缺氧组（缺氧处理）、pLV-NC+缺氧组（转染空载并进行缺氧处理）、pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组（转染circ＿BRAF＿2并进行缺氧处理）。用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胎盘组织及HTR-8/SVneo细胞中circ＿BRAF＿2的表达，用PCR及Sanger测序对HTR-8/SVneo细胞中circ＿BRAF＿2进行鉴定，用核质分离法检测circ＿BRAF＿2在HTR-8/SVneo细胞胞质和细胞核中的表达，用透射电镜观察细胞自噬体的形成，用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、P62的表达。用qRT-PCR检测miR-15a-5p的表达水平。结果妊娠对照组、PE组、对照组及缺氧组circ＿BRAF＿2的相对表达水平分别为0.89±0.05,0.32±0.03,0.04±0.05×10-1和0.02±0.03×10-1,PE组与妊娠对照组相比，缺氧组与对照组相比，差异均有统计学意义（均P<0.01）;通过外扩型引物只能在cDNA中扩增出circ＿BRAF＿2,而采用内扩型引物能同时在cDNA和gDNA中扩增出其线性转录本BRAF;circ＿BRAF＿2在HTR-8/SVneo细胞胞质中的表达(0.02±0.02×10-1)显著高于在胞核中的表达(0.02×10-2±0.03×10-3,P<0.01);对照组、pLV-NC组、pLV-circ＿BRAF＿2组、缺氧组、pLV-NC+缺氧组、pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组LC3-Ⅱ蛋白相对表达水平分别为0.75±0.25,0.73±0.23,0.75±0.23,1.17±0.30,1.19±0.32和0.42±0.06,P62蛋白相对表达水平分别为0.72±0.07,0.75±0.09,0.72±0.08,0.45±0.11,0.44±0.10和0.62±0.07,缺氧组的上述指标与对照组相比，pLV-circ＿BRAF＿2+缺氧组的上述指标与pLV-NC+缺氧组相比，差异均有统计学意义（P<0.01,P<0.05）;这6组的单个细胞内自噬体数量变化及miR-15a-5p的相对表达水平变化与LC3-Ⅱ蛋白表达变化水平相同。结论过表达circ＿BRAF＿2可抑制缺氧诱导的HTR-8/Svneo细胞自噬，其作用可能与竞争性结合miR-15a-5p有关。

关键词：子痫前期环状RNA circ＿BRAF＿2 滋养细胞微小RNA-15a-5p 自噬

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猪伪狂犬病病毒US9和US2蛋白原核表达及多克隆抗体制备

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中国兽医科学 2025年

作者：张娟张宇曹丽艳段月月李璐瑶袁聪孔祥雨郑海学王琦新疆农业大学动物医学学院中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室中国农业科学院都市农业研究所

多种商品化猪伪狂犬病病毒(PRV)疫苗毒株基因组缺失US9和US2基因。为探究US9和US2蛋白在鉴别PRV野毒株感染及疫苗毒株免疫猪的血清，以及抗US9和US2蛋白多克隆抗体在鉴别PRV野毒株及疫苗毒株感染细胞的可行性，本研究通过原核表达系统表... 详细信息

多种商品化猪伪狂犬病病毒(PRV)疫苗毒株基因组缺失US9和US2基因。为探究US9和US2蛋白在鉴别PRV野毒株感染及疫苗毒株免疫猪的血清，以及抗US9和US2蛋白多克隆抗体在鉴别PRV野毒株及疫苗毒株感染细胞的可行性，本研究通过原核表达系统表达PRV US9和US2蛋白，纯化后免疫小鼠制备多克隆抗体。研究结果表明，经纯化处理的US9和US2蛋白在间接酶联免疫吸附试验(ELISA)中表现出特异性识别能力，能够与感染野毒株PRV CD22的猪血清产生免疫反应，但与接种疫苗毒株PRV Bartha-K61的猪血清不反应。此外，试验制备的小鼠抗US9和US2蛋白多克隆抗体在蛋白质印迹试验(Western-blot)和间接免疫荧光试验(IFA)中均能特异性识别PRV CD22感染的细胞，而不与疫苗毒株PRV Bartha-K61感染的细胞发生反应。本研究成功获得了具有鉴别诊断价值的PRV US9和US2蛋白及其多克隆抗体，为深入探索PRV US9和US2蛋白的功能特性，以及开发基于PRV疫苗毒株的新型诊断试剂奠定了重要基础。

关键词：猪伪狂犬病病毒 US9蛋白 US2蛋白原核表达多克隆抗体

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