检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 234-237页

作者：杜玮南孙红霞王姮强伯勤姚志建顾军熊墨淼黄薇陈竺左瑾华秀峰高伟孙琦方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的通过增加微卫星位点密度、扩大样本量,对以前定位到1号染色体上的中国北方汉族人群2型糖尿病相关易感基因研究结果进行验证。方法运用基因组扫描的方法,经多重PCR、电泳、GeneScan及Genotyper程序分析获取位点信息,最后经参数及非... 详细信息

目的通过增加微卫星位点密度、扩大样本量,对以前定位到1号染色体上的中国北方汉族人群2型糖尿病相关易感基因研究结果进行验证。方法运用基因组扫描的方法,经多重PCR、电泳、GeneScan及Genotyper程序分析获取位点信息,最后经参数及非参数连锁分析,得到相关的P值、NPL值(Z值)。结果共扫描了5个区域34个位点,检出约12000个基因型。经GENEHUNTER2.0软件分析,其中的8个位点可能与糖尿病相连锁(P<0.05,NPL值最大为2.17),它们分布于3个区域,尤其是第1个区域(1p36.3-1p36.23),其每一个位点都显示与糖尿病相连锁,前后分布于1个长达16.9cM的范围内。另外2个区域未检出阳性结果。结论证实了全基因组扫描所获得的结果。尤其是,在所研究的1P末端区域,所有研究位点都显示与疾病连锁,这些位点分布在一个很宽的范围内,提示该区域可能蛰伏着多个糖尿病易感基因。

关键词：中国汉族人群 2型糖尿病微卫星位点基因组扫描易感基因基因定位

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一个参与血糖调节的新基因

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中国医学科学院学报 2002年第5期24卷 242-245页

作者：常永生杨畅左瑾胡尧飞李桂林方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的克隆血糖调节基因。方法按本室以往建立的方法制备大鼠血糖自动调节模型,以灌输生理盐水为对照;取其骨骼肌,采用差异显示技术(DDRT-PCR),获得差异表达基因片段,经狭缝杂交和Northern杂交分析,排除假阳性片段,确定真正的差异表达序... 详细信息

目的克隆血糖调节基因。方法按本室以往建立的方法制备大鼠血糖自动调节模型,以灌输生理盐水为对照;取其骨骼肌,采用差异显示技术(DDRT-PCR),获得差异表达基因片段,经狭缝杂交和Northern杂交分析,排除假阳性片段,确定真正的差异表达序列标签(EST),并以其为探针筛选大鼠骨骼肌cDNA文库。结果获得一个新的全长cDNA,命名为Fang-2,GenBank收录号为AF399874。经采用Blast软件(NCBI)分析显示,Fang-2是人类troponinT在大鼠中的同源物,其同源性为78%,表明该家族蛋白具有保守性。在高浓度的葡萄糖刺激大鼠后,和对照大鼠相比,Fang-2的表达下降。结论从大鼠骨骼肌中克隆到一个参与血糖调节的新基因,该基因可能通过其表达下调控制或部分控制某些目前未知的机制而达到调节血糖水平的作用。

关键词： Fang-2 基因 troponinT 血糖调节差异显示技术糖尿病

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热激活Rac-MEKK-JNK信号通路与hsp90β基因表达

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 264-268页

作者：李晓燕路程吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-M... 详细信息

目的探讨Rac-MEKK-JNK(Rac-丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶-C-junN端蛋白激酶)信号通路对热诱导hsp90β基因表达的调控作用以及Hsp90蛋白对Rac信号通路传递的调节过程。方法将载体PcDNA3、显性负突变Rac(DN-Rac),显性负突变MEKK(DN-MEKK)和显性负突变JNK(DN-JNK)表达质粒分别与hsp90β基因转录调控片段介导的氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因质粒β3.1共转染Jurkat和LETPa-2细胞,采用以竞争性RT-PCR为基础的系统检测CAT报告基因转录水平。用Western印迹分析检测转染了DN-Rac、DN-MEKK和DN-JNK的细胞在热刺激前后c-Jun的表达水平和磷酸化状态。用体外激酶活性分析法检测geldanamycin(GA)对热诱导的JNK活性的影响。结果转染DN-Rac、DN-MEKK及DN-JNK均能抑制42℃1h诱导的β3.1报告基因的表达,Jurkat细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(72.8±5)%、(60±13.2)%及(47.7±12.1)%;LETPa-2细胞中CAT的热诱导表达分别为对照组的(16.17±5.1)%、(50.2±8.7)%及(47.5±10)%。转录因子c-Jun的表达和磷酸化水平也在一定程度上被抑制。GA处理细胞可明显抑制热诱导激活的JNK激酶活性和c-Jun的磷酸化水平,但不影响JNK和c-Jun的蛋白表达水平。结论Rac-MEKK-JNK通路参与hsp90β基因的热诱导表达,hsp90可能对热激活化?

关键词： Rac-MEKK-JNK信号通路 Rac蛋白丝裂原活化的蛋白激酶的激酶的激酶 C-junN端蛋白激酶 hsp90β基因基因表达调控

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人3p24-p25478kb完全基因组序列的注释

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 259-263页

作者：丁克越张以琳陈立宏沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的对我国承担的人类基因组测序项目中的3p24-p25478kb完全基因组序列进行注释。方法采用从头预测、数据库相似性比较和全长或部分mRNA序列与基因组序列的比对等手段,识别基因组序列中的编码蛋白质的基因,并采用EMBOSS软件包分析基因... 详细信息

目的对我国承担的人类基因组测序项目中的3p24-p25478kb完全基因组序列进行注释。方法采用从头预测、数据库相似性比较和全长或部分mRNA序列与基因组序列的比对等手段,识别基因组序列中的编码蛋白质的基因,并采用EMBOSS软件包分析基因组序列的组分特征。结果识别出该区域中的两个编码蛋白质的已知基因,即SLC6A1和SLC6A11(其中后者在基因组草图序列中未被定位);对这段基因组序列中组分特征预测分析结果显示,该基因组序列的平均GC含量为47%,并存在3个假想的CpG岛,其中两个CpG岛分别位于130685～131516bp及307090～307870bp,另一个位于415585～416308bp。结论采用上述方法对基因组序列3p24-p25478kb进行了正确的注释,揭示了基因组序列中的有关的基因结构、GC含量、CpG岛等信息。

关键词：人类基因组计划基因组注释 3p24-p25基因组基因结构 GC含量 CpG岛

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人Jurkat细胞GAGA样元件结合蛋白cDNA的克隆

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 269-271页

作者：莫志成陆瑜高超吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨人Jurkat细胞中是否存在与GAGA样元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系,在HTLV-1转化的Jurkat细胞cDNA文库中筛选与GAGA样元件相互作用的蛋白;提取人Jurkat细胞总RNA,应用反转录反应标记cDNA探针,与候选的阳性克隆... 详细信息

目的探讨人Jurkat细胞中是否存在与GAGA样元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系,在HTLV-1转化的Jurkat细胞cDNA文库中筛选与GAGA样元件相互作用的蛋白;提取人Jurkat细胞总RNA,应用反转录反应标记cDNA探针,与候选的阳性克隆杂交。结果共获得9个阳性克隆,其中6个阳性克隆的插入片段可以与cDNA探针杂交。结论在人Jurkat细胞中有与GAGA样元件相关的结合蛋白。

关键词： Jurkat细胞酵母单杂交体系 GAGA元件基因调控

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DR4死亡结构域结合蛋白的初步研究

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 310-314页

作者：李晓玲刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的克隆DR4死亡结构域的结合蛋白,为进一步研究DR4诱导细胞凋亡的信号传递途径提供条件。方法以TRAIL(TNF-relatedapoptosisinducingligand)死亡受体DR4的死亡结构域(DR4DD)为钓饵,采用酵母双杂交系统筛选人白细胞MATCHMAKERcDNA文库。... 详细信息

目的克隆DR4死亡结构域的结合蛋白,为进一步研究DR4诱导细胞凋亡的信号传递途径提供条件。方法以TRAIL(TNF-relatedapoptosisinducingligand)死亡受体DR4的死亡结构域(DR4DD)为钓饵,采用酵母双杂交系统筛选人白细胞MATCHMAKERcDNA文库。以DNA自动分析仪测定核苷酸序列,采用计算机软件分析核苷酸的同源性及功能结构域。并用免疫共沉淀方法分析人类甲酰肽受体1(formylpeptidereceptor-like1,FPRL1)在哺乳动物细胞内是否与DR4CD(thecytoplsmicdomainofDR4)特异性地结合。结果获得了两个阳性克隆pADB1和pADB2。DNA序列分析及同源性比较表明,pADB1的插入片段与人FPRL1的mRNA序列具有97%的同源性。pADB2的插入片段与GeneBank中的已知序列无同源性。免疫共沉淀结果表明FPRL1在哺乳动物细胞内可与DR4CD特异性地结合。结论FPRL1可与DR4的死亡结构域特异性结合,推测FPRL1与DR4的结合可能在DR4介导的细胞凋亡信号传导途径中发挥一定的作用。

关键词：类甲酰肽受体1 死亡受体4 TRAIL 酵母双杂交系统

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人肿瘤坏死因子样蛋白全长cDNA的克隆及原核表达

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 246-249页

作者：胡晓燕周严代芸陈建萌张斌彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离、克隆编码人肿瘤坏死因子样蛋白(TNFLP)的全长cDNA,并对其功能进行初步研究。方法从本室构建的λZAP表达胎脑文库中分离到编码TNFLP的全长cDNA。应用多种软件对该基因及其编码蛋白进行分析,寻找其同源蛋白,分析其亲、疏水性及... 详细信息

目的分离、克隆编码人肿瘤坏死因子样蛋白(TNFLP)的全长cDNA,并对其功能进行初步研究。方法从本室构建的λZAP表达胎脑文库中分离到编码TNFLP的全长cDNA。应用多种软件对该基因及其编码蛋白进行分析,寻找其同源蛋白,分析其亲、疏水性及其存在的结构域和基序。以Northern印迹分析检测TNFLP的mRNA的组织分布,并用谷胱苷肽-S-转移酶(GST)原核表达系统分段表达TNFLP的N端和C端蛋白。结果TNFLP全长共2112bp,编码一208个氨基酸的蛋白。亲、疏水性分析显示,TNFLP有两个疏水区,且C端95个氨基酸与小鼠的TNF-α一致性为42%。基序分析显示,TNFLP的C端有一内质网膜定位信号-TYKRL,与TNF-α完全一致。人的TNFLP位于人的16号染色体上。Northern杂交显示,TNFLP在心、脑和胰腺中呈高表达,可见一个转录本。用GST原核表达系统,分段表达了TNFLP的N端和C端。结论初步分析了TNFLP的组织表达谱,并分段表达了其N端和C端,为进一步研究其功能提供了条件。

关键词：肿瘤坏死因子 -α 肿瘤坏死因子样蛋白原核表达基因克隆

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TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中的基因差异表达

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 238-241页

作者：刘彦信胡欢开郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用... 详细信息

目的分离鉴定重组可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rsTRAIL)在诱导JurkatT淋巴细胞白血病细胞凋亡过程中差异表达的基因。方法采用抑制性差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)及PCR技术筛选差异表达的基因。采用狭缝杂交和Northern印迹技术鉴定差异基因片段;以DNA自动序列分析仪测定所获cDNA核苷酸顺序。结果获得了6个差异表达的基因片段,4个在TRAIL诱导的白血病细胞凋亡过程中被抑制,2个被激活;其中,A14、X1、D1、A23和C5等5个基因片段为新基因,其GeneBank登记号分别为AW731601、AW731602、AW731603、AW731604和BE239235。Northern印迹显示,基因D1在Jurkat和MCF-7中的表达明显高于其它肿瘤细胞,提示该基因可能具有肿瘤特异性。结论TRAIL诱导的细胞凋亡过程,涉及多种基因表达的改变。

关键词：白血病细胞凋亡肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体白血病细胞差异表达基因

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人M961全长cDNA及剪接异构体的分离与克隆

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 254-258页

作者：张斌汪俊华陶波李光涛周严彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂... 详细信息

目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂交膜分析该基因在各细胞系的表达;用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,探讨该基因在此过程中的表达变化。结果从文库中筛出长度分别为1878和1382bp的M96cDNA克隆,二者为剪接异构体,其开放阅读框分别编码491及262个氨基酸,分别命名为M961和M962(GenBank接受号分别为AF072814和AF073293)。Northern杂交结果表明,在所检测的10种血细胞系中,人淋巴细胞白血病细胞系CEM的M961基因表达量最高,在有巨核及红系特点的Hel、Dami及K562白血病细胞系中M961的表达量也较高。在K562细胞分化过程中,M961基因表达略有升高。结论M961基因在某些白血病细胞系中表达量较高。

关键词：剪接异构体 M96基因 M961基因 M962基因 PHD锌指结构基因克隆基因分离白血病

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阿霉素肾病大鼠肌肉和静脉注射心钠素基因利尿作用的比较研究

引用

生物工程学报 2002年第6期18卷 671-675页

作者：李涛梁红雁闫峰卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力 ,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法 ,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内 ,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发... 详细信息

为探讨心钠素基因经体细胞转移对阿霉素诱导的肾病动物泌尿功能的影响及其治疗肾病的潜力 ,采用肌肉或静脉内直接注射裸DNA的方法 ,将人心钠素基因的逆转录病毒载体分别导入阿霉素肾病动物体内 ,以期为其提供持续性的心钠素来源。结果发现 ,人心钠素基因经肌肉和静脉内直接注射这 2种途径导入后 ,均可使阿霉素肾病动物的尿量体重比明显增加 ,有效利尿作用时间大于 15d。试验期间 ,实验组肾病动物的体重明显增长 ,血浆中的心钠素浓度在基因转移 5d后明显升高 ,但动物尿中的K+和Na+浓度无明显变化。以上结果说明 ,心钠素基因经肌肉和静脉 2种途径导入均可明显改善肾病动物的泌尿功能。

关键词：阿霉素肾病大鼠肌肉注射静脉注射心钠素基因利尿作用比较研究基因治疗逆转录病毒载体

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