检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2005年第10期25卷 948-952页

作者：莫志成张勇李宏帆吴宁华沈(王羽)琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的为制备体外组装染色质所需的核心组蛋白及蛋白因子。方法应用密度梯度离心和羟基磷灰石柱分离小牛胸腺细胞核心组蛋白H2A、H2B、H3及H4;应用昆虫表达体系表达了染色质组装相关子NAP-1、ACF(包括Acf-1和ISWI两个同时表达的组分),并... 详细信息

目的为制备体外组装染色质所需的核心组蛋白及蛋白因子。方法应用密度梯度离心和羟基磷灰石柱分离小牛胸腺细胞核心组蛋白H2A、H2B、H3及H4;应用昆虫表达体系表达了染色质组装相关子NAP-1、ACF(包括Acf-1和ISWI两个同时表达的组分),并用离子交换或亲和层析方法进行了纯化。结果本实验报道了制备几种核内蛋白因子的表达与纯化方法和条件,为体外组装染色质模板提供了必要基础。

关键词：染色质组装组蛋白 NAP-1 Acf-1 ISWI

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人载脂蛋白A-I的原核表达及二级结构和功能鉴定

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基础医学与临床 2006年第4期26卷 376-380页

作者：祝学卫吴钢曾武威薛红陈保生中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)。方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层... 详细信息

目的为获得高产量并具有正常结构和生物学活性的原核表达人载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)。方法利用DNA重组技术对人apoA-Ⅰ的前8个氨基酸引入沉默突变,以pET-30b(+)为原核表达载体,在apoA-Ⅰ多肽链C-末端引入6×组氨酸标签,采用镍亲和层析对表达蛋白进行纯化。分别使用圆二色分析、浊度澄清试验和胆固醇外流试验对重组apoA-Ⅰ的α螺旋含量、脂质结合动力学及促细胞胆固醇外流能力进行评价。结果获得高表达产量的重组apoA-Ⅰ(12 mg纯化apoA-Ⅰ蛋白/L菌液);重组蛋白的α螺旋含量为(54±4)%,脂质结合动力学速率常数k1/2为0.059±0.002 min-1,胆固醇外流百分比为(16.68±1.77)%。结论可获得高产量并具有生物学活性的重组人apoA-Ⅰ;为构建apoA-Ⅰ其他突变体提供模式。

关键词：人载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达 α螺旋含量脂质结合细胞胆固醇外流

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精子膜蛋白YWK-Ⅱ与穆勒管抑制物质的结合及结合区域的确定

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中国医学科学院学报 2001年第3期23卷 239-242页

作者：田新勇缪时英王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的验证精子膜蛋白YWK-Ⅱ与穆勒管抑制物质（MIS）的结合作用, 并确定在MIS上的结合区域。方法将YWK-Ⅱ蛋白胞外区一段63个氨基酸的片段在大肠杆菌中表达并纯化，运用Pull-down实验研究纯化的蛋白质与MIS的作用，并采用酵母双杂交系统... 详细信息

目的验证精子膜蛋白YWK-Ⅱ与穆勒管抑制物质（MIS）的结合作用, 并确定在MIS上的结合区域。方法将YWK-Ⅱ蛋白胞外区一段63个氨基酸的片段在大肠杆菌中表达并纯化，运用Pull-down实验研究纯化的蛋白质与MIS的作用，并采用酵母双杂交系统确定YWK-Ⅱ蛋白在MIS上的结合区域。结果重组YWK-Ⅱ蛋白能与大鼠睾丸提取液中的MIS结合，结合部位位于MIS 的N肽段中一段较保守区域内。结论精子膜上的YWK-Ⅱ蛋白可能是卵巢分泌的MIS的受体。

关键词：精子膜蛋白 YWK-Ⅱ蛋白穆勒管抑制物质结合区域

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FasL N-端编码序列对其表达的影响

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基础医学与临床 2005年第7期25卷 624-627页

作者：李健郑德先刘彦信中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨Fas配体(Fas ligand, FasL)胞内区氨基酸组成对膜型FasL蛋白表达的影响.方法 PCR技术扩增FasL胞内区产生不同缺失的cDNA,构建重组表达质粒;使用脂质体转染法将表达质粒导入靶细胞;RT-PCR分析FasL mRNA水平;荧光抗体染色、流式... 详细信息

目的探讨Fas配体(Fas ligand, FasL)胞内区氨基酸组成对膜型FasL蛋白表达的影响.方法 PCR技术扩增FasL胞内区产生不同缺失的cDNA,构建重组表达质粒;使用脂质体转染法将表达质粒导入靶细胞;RT-PCR分析FasL mRNA水平;荧光抗体染色、流式细胞仪和Western免疫印迹技术检测细胞中FasL蛋白的表达.结果 FasL N-端缺失第2～16氨基酸残基后,FasL蛋白在细胞中的表达水平显著增加,但mRNA水平不变.结论 FasL N-端第2～16氨基酸残基对FasL蛋白表达水平具有自我调节作用.

关键词： FasL 胞内区表达调控

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三核苷酸重复序列扩增与精神系统疾病

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基础医学与临床 2005年第11期25卷 982-985页

作者：陶玉斌许琪中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

三核苷酸重复序列扩增是三核苷酸重复序列的拷贝数在世代传递中逐渐增加的一种基因动态突变,现已发现近20种疾病的发生与这一突变相关。本文就近年来国际上关于三核苷酸重复序列扩增与精神系统疾病研究的一些成果进行综述,主要内容包括... 详细信息

三核苷酸重复序列扩增是三核苷酸重复序列的拷贝数在世代传递中逐渐增加的一种基因动态突变,现已发现近20种疾病的发生与这一突变相关。本文就近年来国际上关于三核苷酸重复序列扩增与精神系统疾病研究的一些成果进行综述,主要内容包括:①三核苷酸重复序列扩增相关疾病的分类;②三核苷酸重复序列扩增与疾病的早现遗传现象;③三核苷酸重复序列扩增与精神系统疾病的发病机制研究;④精神系统疾病相关基因内三核苷酸重复序列的研究。

关键词：三核苷酸重复序列扩增精神系统疾病

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肿瘤的基因预防

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中国医学科学院学报 1999年第5期21卷 399-401页

作者：张敏磊方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

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用酵母单杂交系统筛选人IL-2Rα基因NIRS元件结合蛋白的cDNA

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基础医学与临床 2005年第3期25卷 214-218页

作者：盛德乔陆瑜李宏帆吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和... 详细信息

目的筛选与白细胞介素2受体(IL2R)α基因NIRS元件相互作用的结合蛋白。方法采用酵母单杂交体系从HTLV1转化的人外周血淋巴细胞MATCHMAKERcDNA文库中筛选与NIRS相互作用的蛋白。结果经过筛选并排除假阳性后有9个阳性克隆仍保持His+表型和βgal活性;测序后分析发现它们分别属于4个不同蛋白的cDNA克隆。其中一个是已知的反式作用因子Ku抗原,另一个是RNA聚合酶Ⅰ的转录终止因子。它们的C末端分别含有SAP和SANTDNA结合结构域。结论在Jurkat细胞中存在与NIRS元件相互作用的结合蛋白,相关的研究正在进行中。

关键词： NIRS 结合蛋白人IL-2 筛选 Ra基因杂交系统酵母白细胞介素2受体人外周血淋巴细胞 DNA结合结构域 Jurkat细胞相互作用 HTLV-1 cDNA文库 cDNA克隆反式作用因子 RNA聚合酶阳性克隆 Ku抗原杂交体 gal 假阳性 SAP C末端

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应用简并引物RT-PCR扩增锌指结构域筛选新基因

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中国医学科学院学报 2001年第3期23卷 281-284页

作者：杜占文张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的应用简并引物RT-PCR扩增并克隆TF-ⅢA型锌指蛋白基因表达序列标签（EST），以最终获得新的锌指蛋白基因。方法分别用TPA和Hemin诱导人红白血病（HEL）细胞，提取总RNA。根据TF-ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物，并以之进行RT-PC... 详细信息

目的应用简并引物RT-PCR扩增并克隆TF-ⅢA型锌指蛋白基因表达序列标签（EST），以最终获得新的锌指蛋白基因。方法分别用TPA和Hemin诱导人红白血病（HEL）细胞，提取总RNA。根据TF-ⅢA型锌指蛋白保守序列设计简并引物，并以之进行RT-PCR扩增，然后将其克隆到pGEM-T easy载体中测序，应用DNAsis软件分析序列并通过GenBank blast进行序列比较。结果克隆并测序了30个扩增片段，22个是锌指蛋白基因的EST,其中17个是新的锌指蛋白基因EST。结论应用简并引物RT-PCR克隆一些具有保守氨基酸顺序结构域的蛋白基因EST是可行的，并具有简便、高效等优点。此外，还可有目的地克隆一些具有重要功能结构域的蛋白质基因。

关键词：锌指蛋白简并引物 RT-PCR 基因克隆造血细胞分化

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体外转运富含GPI-蛋白的红细胞囊泡改善PNH溶血的探索

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中国医学科学院学报 1999年第4期21卷 278-281页

作者：杨洋许彩民潘华珍吕照江张之南中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　在体外观察是否能将富含ＣＤ５９的红细胞囊泡转运到缺失ＣＤ５９的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞膜上，以改善ＰＮＨ溶血，为ＰＮＨ的治疗提供新的线索。方法　采用免疫亲和层析分离技术分离ＰＮＨＣＤ５９－红... 详细信息

目的　在体外观察是否能将富含ＣＤ５９的红细胞囊泡转运到缺失ＣＤ５９的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞膜上，以改善ＰＮＨ溶血，为ＰＮＨ的治疗提供新的线索。方法　采用免疫亲和层析分离技术分离ＰＮＨＣＤ５９－红细胞，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析、流式细胞仪及蛇毒因子溶血实验等检测和分析红细胞与囊泡的结合。结果　Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析显示，红细胞囊泡含有ＣＤ５９；流式细胞仪测定表明，ＰＮＨＣＤ５９－红细胞与囊泡结合后，ＣＤ５９的荧光标记率明显增高（Ｐ＜０００１）；蛇毒因子溶血实验显示，加入囊泡后ＰＮＨＣＤ５９－红细胞溶血度也显著下降（Ｐ＜００５）。结论　红细胞囊泡上的ＣＤ５９可以在体外转运到ＰＮＨＣＤ５９－红细胞上，并产生抑制补体溶血的作用，使ＰＮＨＣＤ５９－

关键词：红细胞囊泡 PNH 糖肌醇磷脂血红蛋白尿症

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炎性因子遗传多态性与Alzheimer病

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基础医学与临床 2004年第1期24卷 7-11页

作者：李晓青张俊武中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

炎性因子在Alzheimer病 (简称AD)中的作用越来越受到研究者的重视 ,成为研究AD发病机制的又一热点。近来的研究表明 ,炎性因子遗传多态性与AD的发病和发展相关 ,为寻找AD相关基因提供了新的线索。本文总结分析了各种炎性因子IL 1、IL 6... 详细信息

炎性因子在Alzheimer病 (简称AD)中的作用越来越受到研究者的重视 ,成为研究AD发病机制的又一热点。近来的研究表明 ,炎性因子遗传多态性与AD的发病和发展相关 ,为寻找AD相关基因提供了新的线索。本文总结分析了各种炎性因子IL 1、IL 6、TNF α、趋化因子及补体等参与AD发病的机制。

关键词：炎性因子遗传多态性 Alzheimer病发病机制白介素1 白介素6 肿瘤坏死因子老年痴呆

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