检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 1999年第18期44卷 1981-1985页

作者：陈雨亭 B. Bardoni 余珉朱宁吴冠芸 J.L. Mandel 沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 IGBMC CNRS-INSERM-ULP 67404 Illkirch France

脆性X智力低下蛋白FMRP表达的缺乏可以导致最常见的遗传性智力低下疾病--脆性X综合征. 用酵母双杂交体系筛选与FMRP相互作用的蛋白质,以期通过相互作用的蛋白质研究与FMRP相关的生化途径. 从小鼠胚胎cDNA文库中得到一个与FMRP特异相互... 详细信息

脆性X智力低下蛋白FMRP表达的缺乏可以导致最常见的遗传性智力低下疾病--脆性X综合征. 用酵母双杂交体系筛选与FMRP相互作用的蛋白质,以期通过相互作用的蛋白质研究与FMRP相关的生化途径. 从小鼠胚胎cDNA文库中得到一个与FMRP特异相互作用蛋白的cDNA ( Genbank号af102875 ). 该cDNA编码的蛋白与人的G/T错配DNA胸腺嘧啶糖苷酶( hTDG )高度同源. 通过多种FMRP选择剪接异构体或缺失体与一系列TDG缺失体间相互作用的研究,确定了FMRP与TDG的相互作用发生在FMRP第13外显子(第397～425氨基酸残基)和TDG第122～346氨基酸残基区域内. 上述结果有助于深入研究FMRP涉及的生化途径.

关键词：脆性X智力低下蛋白质 (FMRP) G/T错配DNA胸腺嘧啶糖苷酶(TDG) 酵母双杂交蛋白质相互作用

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人GRY-RBP基因的表达及其RNA结合活性的初步鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 1999年第6期15卷 866-870页

作者：杜光伟陈建和周严汪俊华黄晓玮袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用．人ＧＲＹ－ＲＢＰ是我们实验室最近克隆的一个新的全长ｃＤＮＡ，编码一个ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白．ＧＲＹ－ＲＢＰ的全编码区用ＰＣＲ扩增后，克隆到ｐＥＴ３０ａ＋表达... 详细信息

ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白在基因的转录后调控中起着重要作用．人ＧＲＹ－ＲＢＰ是我们实验室最近克隆的一个新的全长ｃＤＮＡ，编码一个ＲＲＭＲＮＡ结合蛋白．ＧＲＹ－ＲＢＰ的全编码区用ＰＣＲ扩增后，克隆到ｐＥＴ３０ａ＋表达载体中，在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得了高效表达，表达的ＧＲＹ－ＲＢＰ重组蛋白占细菌总蛋白的２１％．利用融合在ＧＲＹ－ＲＢＰＮ端的Ｈｉｓ．Ｔａｇ，采取亲和层析的方法纯化了表达的重组蛋白．为了检测ＧＲＹ－ＲＢＰ的ＲＮＡ结合活性及其所结合的ＲＮＡ性质，将表达的蛋白与ｐｏｌｙ（Ａ）－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ结合，发现ＧＲＹ－ＲＢＰ能与ｐｏｌｙＡ（Ａ）结合，结合活性能被可溶性的ｐｏｌｙ（Ａ）、ｐｏｌｙ（Ｃ）减弱．改变ＮａＣｌ浓度和加入不同浓度的酵母ｔＲＮＡ竞争物后，ｐｏｌｙ（Ａ）结合活性不变．

关键词： RNA结合蛋白 RNA结合活性转录后调控 GRY-RBP

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中国人2型糖尿病的基因分型和定位

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解剖学报 1999年第4期30卷 289-292页

作者：赵进英王姮左瑾李玉秀孙琦黄薇陈竺蔡有余方福德中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 北京协和医院上海第二医科大学瑞金医院中国医学科学院实验动物研究所

目的　对中国人２型糖尿病即非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系基因组ＤＮＡ进行基因分型及基因定位。　方法　采用分布于１～２２号染色体及Ｘ染色体上的３５８对荧光标记的微卫星引物，进行多重ＰＣＲ，ＰＣＲ扩增产物用聚... 详细信息

目的　对中国人２型糖尿病即非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系基因组ＤＮＡ进行基因分型及基因定位。　方法　采用分布于１～２２号染色体及Ｘ染色体上的３５８对荧光标记的微卫星引物，进行多重ＰＣＲ，ＰＣＲ扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）分离，然后进行电泳图谱及信息收集。应用ＧｅｎｅｓｃａｎＴＭ３．０软件和Ｇｅｎｏ－ｔｙｐｅＴＭ２．１软件进行基因分型和基因定位。　结果　在３５个家系中共有１９３个微卫星标志能准确进行基因分型。共得４１４９５个基因型。经过多点连锁分析和患病同胞对分析，初步确定在１，１０，１２，１８，２０号染色体上存在ＮＩＤＤＭ相关基因位点。　结论　用全基因组扫描技术可以对中国人２型糖尿病相关基因位点进行基因分型和基因定位。

关键词：糖尿病 Ⅱ型基因分型基因定位

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重组人甲胎蛋白基因顺式调控元件功能的研究

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基础医学与临床 1999年第1期19卷 38-42页

作者：全硕潘国宗刘东远鲁重美左瑾方福德中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院消化内科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室

将６种含有人甲胎蛋白（ＡＦＰ）基因启动子、增强了和／或沉寂子不同组合的荧光素酶报告基因真核表达载体分别转染３种人肝癌细胞系及１种肺腺癌细胞系，测定瞬时表达的荧光素酶活性。结果显示６种重组人ＡＦＰ基因顺式作用元件在ＡＦ... 详细信息

将６种含有人甲胎蛋白（ＡＦＰ）基因启动子、增强了和／或沉寂子不同组合的荧光素酶报告基因真核表达载体分别转染３种人肝癌细胞系及１种肺腺癌细胞系，测定瞬时表达的荧光素酶活性。结果显示６种重组人ＡＦＰ基因顺式作用元件在ＡＦＰ阳性肝癌细胞均具有特异启动活性，而在ＡＦＰ阴性的肝癌细胞和非肝癌细胞无启动活性。在这６种重组人ＡＦＰ顺式元件中，以２．２ｋｂ的调控元件（去除了ＡＦＰ基因沉寂子。保留其启动子和增强子序列）启动活性最高，从而为下一步的靶向性肝癌基因治疗提供了较理想的肝癌细胞特异性启动元件。

关键词：肝癌甲胎蛋白转录调控元件

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Dnmt3b cDNA及其在小鼠胚胎组织中选择剪接异构体的克隆

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云南大学学报（自然科学版） 1999年第S3期21卷 339-340页

作者：尹斌陈雨亭朱敏罗一菁朱宁徐世才吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

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Bcl-2抑制CD3ε分子介导的T淋巴细胞凋亡

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中国医学科学院学报 1999年第6期21卷 421-424页

作者：刘彦信郑德先杨学辉中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 河北医科大学生物化学教研室石家庄050017

目的研究Bcl-2过量表达对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的影响.方法采用电穿孔法将bcl-2基因表达载体转染CD8ε阳性的人Jurkat T淋巴细胞(TJK),获得稳定表达Bcl-2的细胞株(TJK/Bcl-2)后,用抗CD8单克隆抗体刺激和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果Bc... 详细信息

目的研究Bcl-2过量表达对人Jurkat T淋巴细胞凋亡的影响.方法采用电穿孔法将bcl-2基因表达载体转染CD8ε阳性的人Jurkat T淋巴细胞(TJK),获得稳定表达Bcl-2的细胞株(TJK/Bcl-2)后,用抗CD8单克隆抗体刺激和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果Bcl-2过量表达可显著抑制TJK细胞凋亡.结论Bcl-2参与CD3ε介导的T淋巴细胞凋亡的调控.

关键词： Bcl-2基因过量表达 CD3εT淋巴细胞凋亡

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rhM-CSFsR在大肠杆菌中的表达及其配基结合活性分析

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中国生物化学与分子生物学报 1999年第5期15卷 709-713页

作者：罗寿青郑德先饶青刘彦信马正宇吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)胞外具有结合活性区域的cDNA,经平端连接将其克隆到原核表达载体pET-28a的His-Tag下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,重组的人可溶型M-CSFR(rhM-CSFsR... 详细信息

从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)胞外具有结合活性区域的cDNA,经平端连接将其克隆到原核表达载体pET-28a的His-Tag下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导,重组的人可溶型M-CSFR(rhM-CSFsR)在宿主菌中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的38%.重组蛋白经Ni2+组氨酸结合树脂螯合层析柱纯化,获得了纯化的rhM-CSFsR,经SDS-PAGE显示为单一区带,其表观分子量为34kD.用酶联免疫吸附分析(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)证明rhM-CSFsR有明显的M-CSF专一结合活性,Kd值为7.8nmol/L,只有一个M-CSF结合位点.本实验结果显示原核表达的rhM-CSFsR具有明显的配基结合活性,提示M-CSFR的糖基化程度对于其配基结合活性不是必不可少的。

关键词：基因表达重组巨噬细胞集落刺激因子受体

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重组诱导型一氧化氮合酶在NG108-15细胞中稳定表达及其生物学特性

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实验生物学报 1999年第4期32卷 335-347页

作者：臧梦维汪青沈琦刘景生彭学贤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所药理室医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国科学院微生物研究所北京100080

本文用重组iNOS基因真核表达载体转染NG108-15神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交细胞株,获得G418抗性克隆。在稳定表达iNOS基因2~#克隆中,胞浆相酶活性增加,伴有NO_2^-含量和胞内cGMP水平增高,提示iNOS基因表达参与NO-cGMP信号转导通路,且可... 详细信息

本文用重组iNOS基因真核表达载体转染NG108-15神经母细胞瘤和神经胶质瘤杂交细胞株,获得G418抗性克隆。在稳定表达iNOS基因2~#克隆中,胞浆相酶活性增加,伴有NO_2^-含量和胞内cGMP水平增高,提示iNOS基因表达参与NO-cGMP信号转导通路,且可被L-NNA和MB所阻断。蛋白表达产物的亚细胞定位分析显示功能性iNOS主要位于细胞胞浆中。对转染细胞做外源基因整合、转录和翻译水平鉴定,证实均有较高水平iNOS mR-NA转录和特异性蛋白表达,成功地建立了稳定表达iNOS基因的工程细胞。

关键词： iNOS NG108-15 基因表达基因转移抑制剂

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神经营养因子受体Trk和p75NTR的信号传递途径

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医学研究杂志 1999年第12期33卷 1-5,8页

作者：明洪黄秉仁医学分子生物学国家重点实验室中国协和医科大学基础医学院/中国医学科学院基础医学研究所北京100005

神经营养因子是一类对特定类型的中枢和外周神经系统神经元的生存和发展至关重要的生长因子家族。

关键词：神经营养因子受体信号传递途径相互作用死亡结构域神经元存活受体酪氨酸激酶胞内区亲和力磷酸化外周神经系统

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酵母双杂交体系的新发展

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国外医学（遗传学分册） 1999年第5期22卷 225-227页

作者：张树民陈英碚中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005

酵母双杂交系统是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法。本文简要介绍了双杂交体系的原理、应用和自身存在的问题，并对其是新发展做了重声、阐述。

关键词：酵母双杂交系统蛋白质间相互作用

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