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免疫学杂志 1996年第4期12卷 215-219页

作者：刘锰郑珊珊中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所世界卫生组织免疫学研究合作中心

将分别含有重组人ＩＬ－１２（ｒｈＩＬ－１２）两个亚单位ｃＤＮＡ的真核细胞高效表达载体，通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导，共转染至ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞中。经选择性培养基培养、细胞染色体ＤＮＡｄｏｔｂｌｏｔ实验、Ｎｏｒｔｈ... 详细信息

将分别含有重组人ＩＬ－１２（ｒｈＩＬ－１２）两个亚单位ｃＤＮＡ的真核细胞高效表达载体，通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导，共转染至ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞中。经选择性培养基培养、细胞染色体ＤＮＡｄｏｔｂｌｏｔ实验、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验鉴定，筛选出能表达ｒｈＩＬ－１２的细胞株，经氨甲喋呤加压诱导，表达量约为１５０ｕ／ｍｌ，且经液氮冻存３ｍｏ以上仍有表达。本实验还研究了表达产物对人ＰＢＭＣ的促增殖作用和增加ＮＫ细胞毒活性作用，为进一步研究ｒｈＩＬ－１２的生物学功能奠定了基础。

关键词：真核基因表达 CHO细胞 rhIL-12 白细胞介素12

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结构域蛋白质组学研究进展

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基础医学与临床 2003年第2期23卷 132-135页

作者：李英娜高友鹤崔莲仙中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所蛋白质组学研究中心北京100005

蛋白质的结构域是蛋白质中具有特异结构和独立功能的区域。与蛋白质本身的数量相比 ,结构域的数量是有限 ,每个结构域所包含的成员数目也是有限的。在蛋白质组学研究的现阶段 ,研究方法上的限制尚无法全面实时地研究哺乳动物细胞的整个... 详细信息

蛋白质的结构域是蛋白质中具有特异结构和独立功能的区域。与蛋白质本身的数量相比 ,结构域的数量是有限 ,每个结构域所包含的成员数目也是有限的。在蛋白质组学研究的现阶段 ,研究方法上的限制尚无法全面实时地研究哺乳动物细胞的整个蛋白质组。由于结构域在功能上的重要性和其数量的有限性决定了以结构域为研究对象在蛋白质组学规模上进行研究不失为现阶段蛋白质组学研究的一种现实的选择。本文综述一些在这些方面所做出的早期的尝试。研究人员分别以SH3、PDZ和WW等结构域为对象进行蛋白质组学规模上的研究 ,并建立和完善了一些研究方法。总之。

关键词：结构域蛋白质组学研究进展 SH3 PDZ WW

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粘脂质贮积症Ⅱ型的病例诊断及产前诊断

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中华儿科杂志 1996年第4期34卷 232-235页

作者：张为民施惠平高淑英荆玮罗会元孙念怙赵时敏中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传室北京市计划生育技术研究所北京协和医院

为了准确诊断粘脂质贮积症Ⅱ型（又称Ⅰ细胞病），应用酶活性测定法，对疑诊粘脂质贮积症Ⅱ型的２个家系外周血清及培养的皮肤成纤维细胞中多种溶酶体酶活性进行了分析；对其中１例再次妊娠的先证者母亲取孕中期羊水，检测羊水上清液及... 详细信息

为了准确诊断粘脂质贮积症Ⅱ型（又称Ⅰ细胞病），应用酶活性测定法，对疑诊粘脂质贮积症Ⅱ型的２个家系外周血清及培养的皮肤成纤维细胞中多种溶酶体酶活性进行了分析；对其中１例再次妊娠的先证者母亲取孕中期羊水，检测羊水上清液及增殖后羊水细胞中的酶活性。结果：先证者的血清中酶活性明显增高，而皮肤成纤维细胞中酶活性明显降低，粘脂质贮积症Ⅱ型诊断明确；产前诊断羊水上清液及增殖后羊水细胞中酶活性在正常范围，先证者母亲继续妊娠，胎儿出生后表型正常。结果表明，酶学检查方法是本病诊断的可靠手段，鉴于对本病目前尚无有效的治疗手段，故准确的产前诊断是防止患儿出生、降低患病率的唯一有效途径。

关键词：粘脂质累积病粘多糖累积病产前诊断

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尖锐湿疣病变的人乳头瘤病毒6型L1序列多态性分析

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病毒学报 2002年第2期18卷 102-107页

作者：洪少林王家璧李平川周玲司静懿许雪梅郭秀婵曾毅中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院北京100730 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

采用PCR方法从协和医院尖锐湿疣患者皮损中检测人乳头瘤病毒 (HPV) ,并通过限制性片断长度多态性分析分型发现 ,HPV6型为主要感染型别 ,其次是HPV11型。根据临床特征选择主要致病型HPV6 8个分离株 ,扩增L1晚期基因 ,构建重组测序质粒 ,... 详细信息

采用PCR方法从协和医院尖锐湿疣患者皮损中检测人乳头瘤病毒 (HPV) ,并通过限制性片断长度多态性分析分型发现 ,HPV6型为主要感染型别 ,其次是HPV11型。根据临床特征选择主要致病型HPV6 8个分离株 ,扩增L1晚期基因 ,构建重组测序质粒 ,双脱氧法测序并分析L1区的核苷酸和氨基酸序列变异状况。结果表明 ,HPV6L1基因序列发生碱基替换的区域主要有四个区 ,包括SR1(5 911～ 6 10 4 ) ,SR2 (6 2 17～ 6 2 73) ,SR3(6 5 4 0～6 6 6 1)和SR4 (70 6 2～ 72 5 0 )。少数的碱基替换导致错义突变 ,推导的蛋白质一级结构中有 0～ 3个氨基酸发生变异。

关键词：尖锐湿疣病变人乳头瘤病毒6型 L1序列多态性聚合酶链式反应 L1开放读码框基因序列多态性

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载脂蛋白B基因单体型与中国维吾尔族自然长寿的关联研究

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中国科学（C辑） 2006年第5期36卷 424-431页

作者：姜文锡邱长春程祖亨周文郁顾明亮许群方鸣武牛文全玛依拉新疆医科大学乌鲁木齐830054 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所医学遗传学研究室昆明650118

探讨载脂蛋白B（apolipoprotein B，apoB）基因单体型与维吾尔族自然长寿之间的关系．选择新疆和田地区191名年龄90岁以上的健康维吾尔族个体为研究对象，另选53名年龄65—70岁、民族、性别、地域相匹配的正常个体为对照．采用PCR—SSP... 详细信息

探讨载脂蛋白B（apolipoprotein B，apoB）基因单体型与维吾尔族自然长寿之间的关系．选择新疆和田地区191名年龄90岁以上的健康维吾尔族个体为研究对象，另选53名年龄65—70岁、民族、性别、地域相匹配的正常个体为对照．采用PCR—SSP（sequence specific primer），PCR—RFLP（restriction fragment length polymorphism）和PCR-直接测序（PCR—sequencing）等技术对apoB基因第1外显子5＇端信号肽插入／缺失（insertion／deletion，PD）、第26外显子Xba Ⅰ限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphisms，Xba Ⅰ—RFLP）和第29外显子3＇端可变数目重复序列（vaffable number of tandemly repeat，VNTR）进行分型．经Logistic回归分析显示，长寿组apoB基因X^＋X^＋基因型频率显著高于对照组；M，L的等位基因频率和其组成的基因型频率显著增高；在单体型分析中，长寿组中由X^＋和M等位基因组成的单体型频率显著增高，而由X^-和S等位基因组成的单体型频率显著降低（均P〈0．05）．研究认为：等位基因M，L，基因型X^＋X^＋，MM，ML，LL和单体型I—X^＋-M，X^＋-M与自然长寿显著正相关，可能为长寿的保护因素，而等位基因S，基因型SS和单体型X^＋-S，D—S和D—X^＋-S则可能是影响长寿的不利因素．

关键词： apoB基因单体型等位基因基因型自然长寿维吾尔族

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Confirmation of susceptibility gene loci on chromosome 1 in Northern China Han families with type 2 diabetes

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Chinese Medical Journal 2001年第8期114卷 93-95,112页

作者：杜玮南孙红霞熊墨淼左瑾方福德王■ 孙琦强伯勤沈岩姚志建顾军黄薇陈竺华秀峰高伟中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院内分泌科北京100730 国家人类基因组北方研究中心北京100176 国家人类基因组南方研究中心上海201203 山东烟台毓璜顶医院内分泌科烟台264006

Objective　To confirm previous effort to identify type 2 diabetes susceptibility genes in a Northern Chinese population by conducting a new genome scan with both an increased number of type 2 diabetes families and a new set of microsatellite markers within the previously localized ***　A genome scan method was applied. After multiplexed PCR, electrophoreses, genescan and genotyping analysis, we obtained size information for all loci , and then a further study was done by both parametric and non-parametric linkage analysis to investigate the P values and Z values of these ***　We surveyed 34 microsatellite markers which distributed within 5 regions along chromosome 1, and a total of 12?000 genotypes were screened. Evidence of linkage with diabetes was identified for 8 of the 34 loci. All P values of the 8 loci were lower than 0.05, and the highest Z value was 2.17. A very interesting finding is that all 5 markers at the p- terminal 1p36.3-1p36.23 region, spanning a long range of 16.9?cM, were identified to have a low P value of less than 0.05, which suggests that this region may contain multiple susceptibility genes. Regions 4 and 5 also confirmed the previous findings, and we narrowed these two regions to a 2.7?cM and 2.5?cM regions, ***　We further confirmed the results gained in the previous genome-wide scan using an increased number of NIDDM families and a new set of microsatellite markers lying within the initially localized regions. The fact that all 5 loci at the p- terminal region displayed a low P value of less than 0.05 suggests that more than 1 susceptibility gene may reside in this region.

关键词： type 2 diabetes · microsatellte mark ers · genome screening · susceptibility genes · gene mapping

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初发系统性红斑狼疮患者外周血CD4+CD25+Foxp3+和CD4+CD25-Foxp3+T细胞

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中国免疫学杂志 2008年第9期24卷 831-836页

作者：张飚张炬唐福林朱立平刘音天津市第一中心医院工作天津300000 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学系北京100005

目的:研究初发系统性红斑狼疮患者(Systemic lupus erythematous,SLE)外周血CD4+T细胞中CD25和Foxp3表达及其在SLE发病中的意义.方法:根据SLE疾病活动积分(SLEDAI)将初发SLE患者分为活动组(10例)和不活动组(11例),流式细胞仪检测治疗前... 详细信息

目的:研究初发系统性红斑狼疮患者(Systemic lupus erythematous,SLE)外周血CD4+T细胞中CD25和Foxp3表达及其在SLE发病中的意义.方法:根据SLE疾病活动积分(SLEDAI)将初发SLE患者分为活动组(10例)和不活动组(11例),流式细胞仪检测治疗前后外周血CD4+T细胞中CD25、Foxp3和CD127表达百分率,并对其与SLE临床活动度、尿蛋白、补体和anti-ds-DNA相关性进行研究.结果:初发活动组和不活动组SLE患者CD4+CD25+Foxp3+T细胞表达百分率分别为(1.91%～6.75%)和(2.74%～7.01%),与正常对照(2.11%～9.90%)相比没有统计学差异(P=0.524,P=0.794);且初发SLE患者外周血CD4+CD25+T细胞在体外增殖反应和增殖抑制功能与正常对照相比无明显差别(P=0.174,P=0.689);外周血CD4+CD25-Foxp3+T细胞百分率在初发活动组(3.71%～10.94%)和不活动组(2.97%～7.69%)SLE患者均比正常对照(1.01%～3.62%)显著增高(P＜0.01和P＜0.01);而CD4+CD25+Foxp3-T百分率在初发活动组SLE患者(1.19%～9.23%)显著低于正常对照(2.67%～11.26%)和初发不活动组SLE患者(3.73～8.27%)(P=0.039,P=0.048);与CD4+CD25+Foxp3+T细胞类似,90%左右的CD4+CD25-Foxp3+T细胞不表达或低表达CD127,其百分率与anti-ds-DNA浓度呈正相关,且尽管未达到统计学意义,但激素和免疫抑制治疗后其水平下降.结论:初发未经治疗的SLE患者CD4+CD25+F003+T细胞数量和功能无明显异常,而CD4+CD25-Foxp3+T细胞数量增多,与SLE疾病活动相关,可能具有调节功能.

关键词：红斑狼疮系统性 CD4 CD25 Foxp3 CD127

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蛋白芯片技术在自身抗体检测中的应用

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中华检验医学杂志 2006年第12期29卷 1116-1119页

作者：李永哲赵智贤佟大伟张蜀澜胡朝军高扬杨卫平于孟学朱立平程京中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 100730 生物芯片北京国家工程研究中心博奥生物有限公司中国医学科学院中国协和医大学基础医学研究所免疫学系中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院风湿免疫科 100730

目的建立应用蛋白芯片技术检测抗核抗体谱中11种自身抗体的方法,并对蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性和特异性进行评价。方法通过蛋白芯片技术与间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)自身抗体检测试剂盒进行比对,验证抗核抗... 详细信息

目的建立应用蛋白芯片技术检测抗核抗体谱中11种自身抗体的方法,并对蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性和特异性进行评价。方法通过蛋白芯片技术与间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法(ELISA)自身抗体检测试剂盒进行比对,验证抗核抗体谱检测蛋白芯片(抗SSA-52抗体、抗SSA-60抗体、抗SSB抗体、抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗Scl-70抗体、抗Jo-1抗体、抗dsDNA抗体、抗rRNP抗体、抗着丝点抗体和抗核抗体)在临床应用中的敏感性和特异性。除抗Jo-1抗体阳性样品较罕见,仅检测阳性样品32份,其他10种自身抗体,每种选择各阳性样本70份,阴性样本294份;并对检测结果进行统计学分析。结果除抗SSA52抗体和抗SSB抗体的检测敏感度分别为95·7%和98·6%外,其他9种自身抗体的检测敏感度均为100%;除抗SSB抗体、抗RNP-68抗体、抗Scl-70抗体、抗dsDNA抗体、抗CENP-B抗体、抗核抗原提取物抗体(ANA)的检测特异度分别为98·0%、98·0%、99·7%、99·7%、99·7%、98·3%外,其他5种自身抗体的检测特异度均为100%。结论蛋白芯片技术检测11种抗核抗体谱自身抗体的检测敏感度(均>95·0%)和特异度(均>98·0%)均较高,且与IIF和ELISA法有较高的符合率,能满足临床检测自身抗体谱的要求。此外,蛋白芯片技术检测自身抗体时具有高通量、简单快速、敏感度好和特异度强等优点,值得临床推广应用。

关键词：自身抗体抗体抗核蛋白芯片自身免疫性疾病

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转染反义Fas阻断T细胞凋亡及对肿瘤的治疗意义

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解剖学报 2001年第1期32卷 55-60页

作者：张虹冯捷付天云叶雪章静波北京大学第二临床医学院妇科肿瘤中心北京100034 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的　通过阻断 T细胞的 Fas信号传递途径 ,探讨消除肿瘤对 T细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。　方法　流式细胞术、RT- PCR方法检测卵巢癌细胞表达 Fas和 Fas L。构建 pc DNA3-反义 Fas真核表达载体 ,经脂质体转染 Jurkat细胞 ,流式... 详细信息

目的　通过阻断 T细胞的 Fas信号传递途径 ,探讨消除肿瘤对 T细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义。　方法　流式细胞术、RT- PCR方法检测卵巢癌细胞表达 Fas和 Fas L。构建 pc DNA3-反义 Fas真核表达载体 ,经脂质体转染 Jurkat细胞 ,流式细胞仪检测 Fas表达变化。以 Annexin- V和 MTT法检测转染反义 Fas基因对 Ju-rkat细胞凋亡的影响。采用 MTT体外杀伤实验观察 3AO对 Jurkat细胞杀伤变化。　结果　 6种卵巢癌细胞均表达Fas和 Fas L。pc DNA3-反义 Fas基因可以使 Jurkat细胞表达 Fas量下降并部分阻断 Fas单抗诱导的 Jurkat细胞凋亡 ,3AO对其杀伤减弱。　结论　卵巢癌细胞表达 Fas L可能是其逃逸免疫监视并产生对淋巴细胞攻击的原因之一 ;应用反义技术阻断 Fas表达 ,可部分阻断 Fas单抗诱导 Jurkat细胞凋亡 ,可削弱肿瘤细胞对淋巴细胞的攻击。

关键词： T淋巴细胞卵巢癌细胞凋亡 FsaL Fas基因基因转染信号传递

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汉族人载脂蛋白B基因EcoRⅠ MspⅠ多态性与冠心病的关系研究

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中华检验医学杂志 2003年第3期26卷 148-152页

作者：鄢盛恺李秀玲薛红宋耀虹杨树德陈保生中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科 100730 北京生物制品研究所中国医学科学院基础医学研究所卫生部临床检验中心

目的　探讨我国北方地区汉族人载脂蛋白B(apoB)基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性与冠心病的关系。方法　应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术 ,检测了 12 0名对照组和 137例冠心病组apoB基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性基因型和等位... 详细信息

目的　探讨我国北方地区汉族人载脂蛋白B(apoB)基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性与冠心病的关系。方法　应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术 ,检测了 12 0名对照组和 137例冠心病组apoB基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性基因型和等位基因频率分布。研究了apoB基因多态性对血脂、脂蛋白和载脂蛋白水平的影响。结果　冠心病组与对照组apoB基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性基因型和等位基因频率分布差异无显著性 ,且与性别、家族史、吸烟史、体重指数及冠脉病变程度无明显关系。两组间罕见的E -和M -等位基因存在连锁不平衡。冠心病组中E -等位基因携带者血清血清总胆固醇 (TC)、低密度脂蛋白 (LDL C)明显高于仅含E +等位基因者。M -等位基因与各项血脂水平无明显相关性。结论　apoB基因EcoRⅠ、MspⅠ多态性对人群血脂水平有一定影响 ,但不是我国北方地区汉族人冠心病发生的独立危险因素。

关键词：汉族人载脂蛋白B基因 EcoRⅠMspⅠ 多态性冠心病聚合酶链反应

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