检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2002年第4期22卷 403-406页

作者：李文辉张云隋建华杨帆郭彩云王树蕙中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原生物学研究室北京100005

目的　研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果。方法　构建狂犬病毒糖蛋白 (GP)的真核表达质粒pcDNA3.1 CVS N2cGP作为核酸疫苗 ,瞬时转染COS 7细胞 ,间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1 CVS N2cGP的... 详细信息

目的　研究联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同一抗原核酸疫苗对小鼠的免疫效果。方法　构建狂犬病毒糖蛋白 (GP)的真核表达质粒pcDNA3.1 CVS N2cGP作为核酸疫苗 ,瞬时转染COS 7细胞 ,间接免疫荧光试验检测pcDNA3.1 CVS N2cGP的表达 ;以基因枪方法进行初次免疫接种和首次加强免疫 ,以表达同一抗原的复制缺陷型重组腺病毒通过鼻腔接种进行第二次加强免疫 ;ELISA试验检测血清狂犬病毒特异性IgG抗体 ,快速荧光灶抑制试验 (RFFIT)检测狂犬病毒中和抗体。结果　间接免疫荧光试验表明pcDNA3.1 CVS N2cGP能有效地表达GP于转染的细胞膜上 ,ELISA试验表明小鼠接受基因枪核酸免疫后 ,仅诱导产生低水平的特异性抗体 ,而用重组腺病毒进行加强免疫后 ,特异性抗体水平显著提高。结论　联合运用狂犬病毒糖蛋白基因重组腺病毒与同种抗原核酸疫苗可克服它们单独使用时各自的缺点 ,能有效地诱导小鼠产生抗狂犬病毒特异免疫。

关键词：糖蛋白核酸疫苗重组腺病毒联合免疫狂犬病毒狂犬病特异免疫

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应用PAMAM dendrimers作为DNA运送载体的体外研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第9期31卷 804-811页

作者：郭晨莹王恒蔺亚晖蔡启良中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院病原生物学系分子寄生虫学实验室北京100005

StarburstTMPAMAMdendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后,介导遗传物质进入细胞.研究了G3,G3 5,G5,G7,G7 5,G9各代dendrimers分子与... 详细信息

StarburstTMPAMAMdendrimers分子是一类新型的高分枝、辐射状对称的树状高分子,在生理条件下其表面具有高密度的正电荷,可以通过静电相互作用与核酸形成复合物后,介导遗传物质进入细胞.研究了G3,G3 5,G5,G7,G7 5,G9各代dendrimers分子与DNA结合后介导其转染细胞的能力,并初步评价这种复合物转染对细胞活力的影响.实验证实,全代的PAMAMdendrmers皆可与DNA结合,并可在体外培养的细胞中介导高效的DNA转染.PAMAMdendrimer/DNA复合物很稳定,在较大的pH值变化范围内(pH 2～ 10 )不解离.PAMAMdendrimers可保护与之复合的DNA分子免受限制性内切酶的降解.在一定的电荷比范围内,高代数的dendrimers分子与DNA形成的复合物对培养细胞的转染效率高于低代数dendrimer分子,复合物所介导的转染效率在不同的细胞系之间也有差异.在有效作用浓度范围内(≤ 1 3× 10 -1g/L),PAMAMdendrimers/DNA复合物对被转染细胞无毒性.但是,未与DNA复合的dendrimers分子在较低浓度时则表现出毒性,表明StarburstTM PAMAMdendrimers分子可作为新型的低毒非病毒DNA载体,用于介导DNA对体外培养细胞的转染.这些前期观察。

关键词： DNA转运 Starburst^TM PAMAM dendrimers 转染非病毒载体

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载脂蛋白B基因单体型与中国维吾尔族自然长寿的关联研究

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中国科学（C辑） 2006年第5期36卷 424-431页

作者：姜文锡邱长春程祖亨周文郁顾明亮许群方鸣武牛文全玛依拉新疆医科大学乌鲁木齐830054 中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室北京100005 中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所医学遗传学研究室昆明650118

探讨载脂蛋白B（apolipoprotein B，apoB）基因单体型与维吾尔族自然长寿之间的关系．选择新疆和田地区191名年龄90岁以上的健康维吾尔族个体为研究对象，另选53名年龄65—70岁、民族、性别、地域相匹配的正常个体为对照．采用PCR—SSP... 详细信息

探讨载脂蛋白B（apolipoprotein B，apoB）基因单体型与维吾尔族自然长寿之间的关系．选择新疆和田地区191名年龄90岁以上的健康维吾尔族个体为研究对象，另选53名年龄65—70岁、民族、性别、地域相匹配的正常个体为对照．采用PCR—SSP（sequence specific primer），PCR—RFLP（restriction fragment length polymorphism）和PCR-直接测序（PCR—sequencing）等技术对apoB基因第1外显子5＇端信号肽插入／缺失（insertion／deletion，PD）、第26外显子Xba Ⅰ限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphisms，Xba Ⅰ—RFLP）和第29外显子3＇端可变数目重复序列（vaffable number of tandemly repeat，VNTR）进行分型．经Logistic回归分析显示，长寿组apoB基因X^＋X^＋基因型频率显著高于对照组；M，L的等位基因频率和其组成的基因型频率显著增高；在单体型分析中，长寿组中由X^＋和M等位基因组成的单体型频率显著增高，而由X^-和S等位基因组成的单体型频率显著降低（均P〈0．05）．研究认为：等位基因M，L，基因型X^＋X^＋，MM，ML，LL和单体型I—X^＋-M，X^＋-M与自然长寿显著正相关，可能为长寿的保护因素，而等位基因S，基因型SS和单体型X^＋-S，D—S和D—X^＋-S则可能是影响长寿的不利因素．

关键词： apoB基因单体型等位基因基因型自然长寿维吾尔族

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apoE_4近交系转基因鼠的高脂血症表现和自发变换行为损害

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中国生物化学与分子生物学报 2002年第6期18卷 772-775页

作者：薛越强屠亚军杨鹏蒋效松廖峥嵘琦祖和中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005 河北医科大学基础医学院细胞生物学研究室石家庄050017

建立相关疾病的动物模型 ,研究apoE4在脂质代谢和早老性痴呆等疾病中的作用 .通过显微注射法建立人apoE4近交系转基因鼠 .经Southern和Northern印迹杂交 ,鉴定apoE4基因的整合与表达 .98只新生鼠中鉴定出 2只首建鼠 ,定名为TgN(apoE4) 1... 详细信息

建立相关疾病的动物模型 ,研究apoE4在脂质代谢和早老性痴呆等疾病中的作用 .通过显微注射法建立人apoE4近交系转基因鼠 .经Southern和Northern印迹杂交 ,鉴定apoE4基因的整合与表达 .98只新生鼠中鉴定出 2只首建鼠 ,定名为TgN(apoE4) 1QiL和TgN(apoE4) 2QiL .外源基因整合的拷贝数分别为 1和 2 .F1代杂合鼠的脑 ,肾脏 ,心脏和肝脏中均有人apoE4基因的表达 .血清脂质水平通过酶法检测 ,自发变换行为经Y迷宫试验检测 .转基因鼠的血清胆固醇和甘油三酯明显升高 ,自发变换行为受到损害 .结果表明 ,近交系转基因鼠过量表达人apoE4基因可导致血清脂质升高 ,并对其空间记忆能力造成损害 .

关键词： apoE4 近交系转基因鼠高脂血症自发变换行为损害

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质粒纯化利用离子交换柱的再生方法

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基础医学与临床 2005年第6期25卷 561-563页

作者：董敏王小竹李继红王恒中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病原学研究室北京100005 河北北方学院细胞生物系河北075000

目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质... 详细信息

目的为提高质粒大量提取纯化柱的使用率,降低实验成本。方法用0.5molLHCl和0.5molLNaOH溶液处理已使用过的一次性纯化柱,使之再生,继而被重复利用。结果再生纯化柱所提纯的质粒DNA经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析证实DNA纯度高,无不同质粒间污染。结论此方法操作简便、快捷,具有较高的实用价值。

关键词：再生方法离子交换 mol/L NaOH溶液凝胶电泳分析 PCR扩增质粒DNA 提取纯化实验成本重复利用实用价值使用率 HCl 一次性琼脂糖

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CDK2蛋白质分子结构与其入核转运过程关系的初步分析(英文)

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Acta Genetica Sinica 2004年第5期31卷 444-448页

作者：刘琦罗阳姜莉周伟强满晓辉张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠... 详细信息

应用重组技术构建野生型及缺失型CDK2基因的真核表达载体 ,分别使野生型及缺失型CDK2蛋白与增强型绿色荧光蛋白 (Enhanced greenFluorescentProtein ,EGFP)形成融合蛋白。通过脂质体介导的方法将载体转染人宫颈癌细胞系HeLa和中华仓鼠卵巢细胞系CHO ,经过细胞周期同步化处理后于荧光显微镜下观察EGFP的亚细胞定位以示踪野生型及缺失型CDK2基因的表达。结果表明 ,野生型CDK2基因的表达产物定位于细胞核 ,而两种缺失型CDK2基因分别编码的CDK2蛋白N 端 1～ 2 0 1及 98～ 2 98多肽均主要定位于细胞质。以上结果提示 ,CDK2蛋白序列中不含有与核定位直接相关的信号 ,其入核过程可能是由其N 端 1～ 97及 2 0 2～ 2 98多肽范围内的部分氨基酸共同形成高级结构 ,并依赖此高级结构与其他含有入核信号的蛋白形成复合物 ,从而被带动进入细胞核的。

关键词： CDK2 入核转运增强型绿色荧光蛋白质粒转染

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中国人群中STK15基因内两种非同义SNP的连锁不平衡和单体型分析

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遗传学报 2005年第4期32卷 331-336页

作者：陈立敖雪任群王振宁鲁翀徐岩姜莉罗阳徐惠绵张学中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医科大学医学基因组学研究室卫生部细胞生物学重点实验室沈阳110001 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

STK15基因编码一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,哺乳动物细胞中其过量表达将导致中心体扩增、染色体不稳定和细胞癌变.STK15基因外显子3中有3种非同义单核苷酸多态(SNP),即:91A→T(I31F)、169G→A(V57I) 和311C→T(S104L).新近研究发现,91A→... 详细信息

STK15基因编码一种丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,哺乳动物细胞中其过量表达将导致中心体扩增、染色体不稳定和细胞癌变.STK15基因外显子3中有3种非同义单核苷酸多态(SNP),即:91A→T(I31F)、169G→A(V57I) 和311C→T(S104L).新近研究发现,91A→T与人类肿瘤遗传易感性相关.应用PCR-RFLP技术确定了91A→T(I31F)和 169G→A(V57I)两种SNP在中国人群中的基因型和单体型.采用巢式PCR方法扩增了193例正常个体的DNA样品,通过错配正向巢式内引物引入EcoRⅠ酶切位点.巢式PCR扩增产物用限制性内切酶EcoRⅠ和AccⅡ双酶切消化,其中EcoRⅠ能酶切91A,AccⅡ能切开169G,用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法鉴定双酶切结果,发现了4种可能的单体型中的3种,其单体型频率分别为:p(91A-169G)=68.65%,p(91T-169A)= 10.88%,p(91T-169G)=20.47%,p(91A-169A)=0%;它们组成的6种基因型及频率分别为: 91A-169G/91A-169G (46.11%),91A-169G/91T-169A(14.51%),91A-169G/91T-169G(30.57%),91T-169G/91T-169G(3.11%),91T-169G/91T-169A (4.15%),91T-169A/91T-169A(1.55%).等位基因及单体型数据分析结果表明,91A→T(I31F)和 169G→A(V57I)之间存在连锁不平衡.

关键词： STK15基因单核苷酸多态单体型连锁不平衡

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中心体蛋白centrin在大鼠精子发生过程中的表达

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解剖学报 2001年第3期32卷 255-259页

作者：孙晓冬马静葛烨华王永潮薛社普韩代书中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所细胞生物学研究室北京100005 北京师范大学生物系细胞增殖与调控开放实验室北京100875

目的　研究中心体蛋白centrin在大鼠生精细胞中的表达情况 ,以深入了解centrin在精子发生过程中的作用。　方法　通过重力沉降法分离大鼠不同发育阶段的生精细胞 ,用免疫荧光和蛋白印迹实验检测各级生精细胞中centrin蛋白的表达 ,用定量... 详细信息

目的　研究中心体蛋白centrin在大鼠生精细胞中的表达情况 ,以深入了解centrin在精子发生过程中的作用。　方法　通过重力沉降法分离大鼠不同发育阶段的生精细胞 ,用免疫荧光和蛋白印迹实验检测各级生精细胞中centrin蛋白的表达 ,用定量RT PCR检测centrin同源基因centrin1和centrin2mRNA的表达水平。　结果　间接免疫荧光和蛋白印迹显示精母细胞、圆形、长形精子细胞均有centrin蛋白存在 ,位于中心粒上 ,而在附睾的成熟精子中centrin则消失。RT PCR研究发现 ,centrin1在睾丸组织中特异性表达 ,centrin2在多种组织中均有表达。在睾丸中 ,centrin1仅在生精细胞进入减数分裂后转录 ,其mRNA水平在圆形精子细胞中最高 ,而centrin2在精原细胞中即有表达 ,减数分裂后其mRNA难以检测到。　结论　centrin蛋白在大鼠雄性配子的发育过程中最终丢失 ;该基因家族中同源基因centrin1和centrin2表达呈现组织特异性和发育阶段特异性 ,在精子发生过程中发挥不同功能 ,centrin1蛋白可能与减数分裂及鞭毛生成相关。

关键词： centrin 精子发生中心体大鼠

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促性腺激素释放肽(GnRH)受体配体介导的恶性肿瘤靶向基因治疗

促性腺激素释放肽(GnRH)受体配体介导的恶性肿瘤靶向基因治疗

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第二届北京生命科学领域联合年会

作者：杨奎王湛杨晶刘玉琴顾蓓陈伟京李涛路金枝卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所生化与分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所病理研究室

本文探索了一种安全、有效地导入靶细胞,从而杀灭肿瘤靶细胞而又避免毒素蛋白对正常细胞的毒副作用与免疫原性的方法.文中设计了一套非病毒载体靶向杀伤肿瘤细胞的基因治疗方案.把原来以毒素蛋白质导入血循环的形式改为以编码毒素蛋白... 详细信息

本文探索了一种安全、有效地导入靶细胞,从而杀灭肿瘤靶细胞而又避免毒素蛋白对正常细胞的毒副作用与免疫原性的方法.文中设计了一套非病毒载体靶向杀伤肿瘤细胞的基因治疗方案.把原来以毒素蛋白质导入血循环的形式改为以编码毒素蛋白的基因重组体(DNA)导入血循环的形式,即利用非病毒载体将对细胞有强烈杀伤作用的PEⅢmut(绿脓毒素第三区段的突变基因片段)以表达型重组体的形式靶向导入肿瘤细胞,致使PEⅢmut仅在肿瘤细胞中表达,从而杀灭该细胞.同时,利用肿瘤细胞是缺氧细胞的特点,以缺氧条件作为基因可控表达的控制条件.

关键词：恶性肿瘤基因治疗靶向性促性腺激素释放肽编码毒素蛋白基因重组体

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Taal限制酶分析快速检测BRAF中599位密码子点突变

Taal限制酶分析快速检测BRAF中599位密码子点突变

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中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会

作者：杨威任群敖杨张学中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室中国医科大学医学基因组学研究室沈阳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传学系医学分子生物学国家重点实验室

目的:近期报道BRAF基因激活突变在恶性黑色素瘤频率高达66%,在其它多种肿瘤中有稍低的频率。两种涉及599位密码子的错义突变T1796A、TG1796-1797AT,共占BRAF基因突变的81%,而在黑色素瘤这两种突变频率占95%。Helen Davies等人筛查BRAF... 详细信息

目的:近期报道BRAF基因激活突变在恶性黑色素瘤频率高达66%,在其它多种肿瘤中有稍低的频率。两种涉及599位密码子的错义突变T1796A、TG1796-1797AT,共占BRAF基因突变的81%,而在黑色素瘤这两种突变频率占95%。Helen Davies等人筛查BRAF基因突变的技术方法是对全部外显子及外显子内含子交界处扩增行异源双链毛细管电泳及随后的PCR产物直接测序。我们则欲针对已知的密码子V599高频突变,在更多种肿瘤标本中进行快速简便的筛查,因此针对这一突变设计了特异的限制酶分析方法。

关键词：密码子点突变酶分析快速检测

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