检索结果-内蒙古大学图书馆

基础医学与临床 2008年第2期28卷 144-148页

作者：罗丝杨克恭刘长征邓艳春苏林孔燕陈松森中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在***21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯... 详细信息

目的研究人造血增效因子(hHSF)C末端结构与其趋化活性的关系。方法用PCR方法合成编码3种hHSFC末端截短变异体DNA片段,分别重组到pET30a或pET42a中,并在***21(DE3)中进行表达。hHSF1-66和hHSF1-59用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化,融合蛋白GST-hHSF1-5 3经亲和层析、肠激酶(EK)酶切和凝胶过滤法进行分离纯化。hHSF3种缺失变异体进行Western blot鉴定,用飞行时间质谱法测定其相对分子质量,用改良的Boyden小室法测定其对人外周血中性粒细胞(PMN)趋化活性。结果测序证实合成的hHSF 1-66、hHSF1-59和hHSF1-53序列与设计一致,hHSF1-66/1-59表达量占菌体总蛋白的20%左右,主要以包涵体形式存在。GST-hHSF1-53表达量占菌体总蛋白的30%以上,主要以可溶形式存在。3种目的蛋白纯度均达95%左右,它们的相对分子质量分别为7206.0、6401.2和5697.3 D,均具有全长hHSF的免疫学活性。与全长hHSF相比,hHSF1-66(缺失3个氨基酸)对人PMN最大趋化活性(CI)(50 nmol/L)没有明显差异,hHSF1-59(缺失10个氨基酸)和hHSF1-53(缺失16个氨基酸,α螺旋完全缺失)最大趋化活性分别下降34.3%和70.5%。结论hHSF C末端结构,特别是α螺旋结构对维持和稳定hHSF的空间构象起着重要作用。

关键词：人造血增效因子 C末端缺失变异体趋化活性

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糖皮质激素受体基因ER22/23EK多态性与新疆维吾尔族人自然长寿的关系及与汉族人群的比较

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基础医学与临床 2008年第2期28卷 113-118页

作者：姜文锡程祖亨牛文全邱长春新疆医科大学新疆乌鲁木齐830054 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的探讨糖皮质激素受体基因（GR）第2外显子ER22／23EK多态性与维吾尔族人自然长寿的关系及种族差异。方法选择新疆维吾尔族191名年龄〉90岁的健康个体为长寿组，另选53名年龄（65-70岁）、性别、地域相匹配已自然死亡的正常个体为对... 详细信息

目的探讨糖皮质激素受体基因（GR）第2外显子ER22／23EK多态性与维吾尔族人自然长寿的关系及种族差异。方法选择新疆维吾尔族191名年龄〉90岁的健康个体为长寿组，另选53名年龄（65-70岁）、性别、地域相匹配已自然死亡的正常个体为对照组；同时随机调查移居新疆和田地区30年以上的（65-70岁）汉族老年人82人。采用序列特异引物PCR（PCR-SSP）、PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RELP）和PCR-直接测序（PCR-sequeneing）等技术对GR基因进行分型。结果191名自然长寿老人和53名对照组中，ER22／23EK的等位基因和基因型频率无差异。新疆汉族老人GR基因ER22／23EK携带者显著高于维吾尔族老人，其WM、MM基因型（P〈0．001）和M等位基因频率（P〈0．0001）均显著高于维吾尔族老人，而册基因型和形等位基因频率则显著降低。结论ER22／23EK的等位基因和基因型频率可能与维吾尔族自然长寿无关联，但有显著的种族差异。

关键词：糖皮质激素受体基因自然长寿维吾尔族汉族

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小鼠胸腺雄激素受体的定位及其与新分子Rwdd1的关系

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基础医学与临床 2008年第7期28卷 696-701页

作者：陈岱康宁汤龙刘庆丰胡愉崔莲仙何维中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的研究雄激素受体(AR)在胸腺萎缩中的作用机制。方法用免疫组化和RT-PCR观察AR在小鼠胸腺内的分布;用刀豆蛋白A(ConA)诱导胸腺细胞增殖,观察睾酮对细胞增殖的影响;构建AR和Rwdd1的真核表达载体pcDNA3.1-AR和pcDNA3.1-Rwdd1-V5,共转染2... 详细信息

目的研究雄激素受体(AR)在胸腺萎缩中的作用机制。方法用免疫组化和RT-PCR观察AR在小鼠胸腺内的分布;用刀豆蛋白A(ConA)诱导胸腺细胞增殖,观察睾酮对细胞增殖的影响;构建AR和Rwdd1的真核表达载体pcDNA3.1-AR和pcDNA3.1-Rwdd1-V5,共转染293T细胞,通过免疫共沉淀(CoIP)法观察二者之间在细胞内是否存在相互作用。结果AR广泛分布在胸腺皮质和髓质,且主要定位于胞核。在不同胸腺细胞亚群中均有AR表达,其中以CD4-CD8-(DN)细胞表达水平最高。3种胸腺上皮细胞系中仅皮质来源的427.1细胞系存在AR表达。胸腺细胞中存在功能性AR。AR与Rwdd1之间不存在直接相互作用。结论小鼠胸腺细胞中存在AR的表达,目前尚不能证明AR与Rwdd1存在直接的相互作用。

关键词：雄激素受体胸腺 Rwdd1

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人乳头瘤病毒16型L1-E7c嵌合基因的构建表达及免疫学效应的研究

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免疫学杂志 2008年第3期24卷 254-258页

作者：刘朝奇许雪梅徐建青李昆司静懿刘世德三峡大学分子生物学研究所湖北宜昌443003 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100005

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L... 详细信息

目的构建人乳头瘤病毒16型(HPV16) L1-E7c嵌合基因并表达融合蛋白,以期获得防治HPV16感染及相关肿瘤的疫苗。方法以HPV16型的中国人野毒株为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16 L1-E7c嵌合基因,并转入原核表达载体pET28a(+),获得pET28a(+)-L1-E7c表达质粒。以Western blot方法鉴定融合蛋白与HPV16L1和E7抗体的特异性结合。应用蛋白纯化仪纯化HPV16 L1-E7c融合蛋白,经过复性后,电镜观察病毒样颗粒(cVLP)的形态结构。纯化的蛋白免疫动物,测定疫苗抗肿瘤的细胞免疫及抗体产生情况。结果经过序列分析和酶切鉴定表明成功构建了HPV16 L1-E7c嵌合基因,并在大肠杆菌中可高效表达L1-E7c融合蛋白。此融合蛋白具有HPV16 L1和E7的抗原性,纯化的蛋白复性后可形成嵌合病毒样颗粒(cVLP),纯化的蛋白免疫动物后,产生特异性细胞和体液免疫反应,具有抗肿瘤活性。结论构建的嵌合基因HPV16 L1-E7c可有效表达HPV16 L1-E7c重组蛋白并形成cVLP。此蛋白在动物实验中具有疫苗的免疫保护作用,为HPV16疫苗的研究奠定了实验基础。

关键词：人乳头瘤病毒16型 L1 E7 蛋白表达免疫原性

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hNOK抗体的制备及肺癌组织中NOK的表达检测

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生物工程学报 2008年第3期24卷 480-484页

作者：徐方李颖华王银银任芳丽刘力常智杰清华大学医学院清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室北京100084 中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所北京100005

Novel Oncogene with Kinase-domain(NOK)是一个新的肿瘤相关基因,其结构上与受体蛋白相似,具有一个蛋白激酶结构域。过量表达NOK会导致肿瘤的产生与转移。为了更进一步研究生理状态下NOK的功能,需要制备NOK特异性的抗体。利用GST融合... 详细信息

Novel Oncogene with Kinase-domain(NOK)是一个新的肿瘤相关基因,其结构上与受体蛋白相似,具有一个蛋白激酶结构域。过量表达NOK会导致肿瘤的产生与转移。为了更进一步研究生理状态下NOK的功能,需要制备NOK特异性的抗体。利用GST融合蛋白制备了人源NOK的多克隆抗体,并进行了纯化。检测表明所得的抗体具有很高的滴度,能够特异性检测NOK蛋白的表达。使用该抗体进行了人肺癌组织的免疫组化检测,发现该抗体能够高效识别组织内源性表达的NOK蛋白,可为肺癌的诊断提供依据。

关键词：蛋白激酶多克隆抗体 NOK 肺癌

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河南省人口老龄化发展趋势预测

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郑州大学学报（医学版） 2008年第2期43卷 289-291页

作者：谢婧盛利施学忠郑州大学公共卫生学院卫生统计学教研室郑州450001 中国协和医科大学基础医学院中国医学科学院基础医学研究所北京100005

目的:对河南省人口老龄化发展趋势进行预测,建立模型,定量研究河南省老年人口的变化趋势。方法:采用人口普查资料、卫生事业发展资料,利用SAS9.0软件,根据人口学家Coale和Demeny提出的平均期望生命增长规律和查瑞传修订的迭代模型,预测... 详细信息

目的:对河南省人口老龄化发展趋势进行预测,建立模型,定量研究河南省老年人口的变化趋势。方法:采用人口普查资料、卫生事业发展资料,利用SAS9.0软件,根据人口学家Coale和Demeny提出的平均期望生命增长规律和查瑞传修订的迭代模型,预测河南省平均期望寿命,利用线性回归模型预测老年人口系数。结果:预计到2010年、2020年、2030年、2040年和2050年,河南省女性平均预期寿命分别为71.90岁、72.64岁、73.24岁、73.73岁和74.11岁;男性平均预期寿命分别约为76.22岁、77.37岁、78.16岁、78.62岁和78.83岁;河南省老年人口系数将分别达到8.47、9.73、10.99、12.25和13.51。河南省老年人口系数随着人均GDP增长和年代的增加呈线性增长趋势,回归方程分别为Y=5.528+0.000288X和Y=-244.793+0.126X。结论:河南省平均期望寿命不断增加,但增加幅度逐渐缩小,人口老龄化趋势明显。

关键词：人口老龄化预测模型

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人干燥综合征A抗原克隆表达与重组蛋白及其临床应用研究

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标记免疫分析与临床 2008年第2期15卷 99-104,118页

作者：李倩高扬倪安平李永哲于孟学刘音朱立平林嘉友甘晓丹中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院检验科中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所北京100730

克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原建立ELISA法用于自身抗体的临床检测。根据GenBank中检索到的人SSA-60kD cDNA序列,在5’和3’非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,经RT-PCR扩增S... 详细信息

克隆人干燥综合征A抗原基因(SSA-60kD),为SSA抗原的表达和使用重组抗原建立ELISA法用于自身抗体的临床检测。根据GenBank中检索到的人SSA-60kD cDNA序列,在5’和3’非编码区设计特异性引物,提取人源HeLa细胞总RNA作为模板,经RT-PCR扩增SSA-60kD抗原cDNA。PCR产物纯化后连接至载体PET-30a,导入大肠杆菌DH5α,构建重组质粒PET-30a-SSA-60kD。对后者进行酶切鉴定、测序和分析。在大肠杆菌中表达,产生重组融合蛋白。RT-PCR扩增产物为1632bp。PET-30a-SSA-60kD经EcoR I和V双酶切证实含目的基因片段。序列分析提示与GenBank中一致。利用金属螯合亲和层析法和纯化,得到了高纯度的SSA-60kD重组蛋白。成功克隆人SSA-60kD基因,并构建PET-30a-SSA-60kD,建立了ELISA方法,检测了风湿病患者血清中抗SSA-60kD自身抗体。

关键词：人干燥综合征A抗原 cDNA克隆重组体 ELISA

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异基因造血干细胞移植治疗两例粘多糖累积症患儿

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中华医学遗传学杂志 2008年第6期25卷 675-677页

作者：陈静江华董璐王耀平罗长缨周敏张为民黄尚志顾学范邱文娟张惠文顾龙君上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心 200127 上海交通大学医学院附附属上海市儿科研究所 200127 中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院基础医学研究所

目的探索造血干细胞移植治疗粘多糖累积症（mucopolysaccharidosis，MPS）的效果。方法两例MPs患儿分别为MPS-ⅠH型和MPS-Ⅵ型，移植时年龄为23个月和18个月，均采用白舒菲20mg／kg＋环磷酰胺200mg／kg进行预处理，干细胞分别来自9／10... 详细信息

目的探索造血干细胞移植治疗粘多糖累积症（mucopolysaccharidosis，MPS）的效果。方法两例MPs患儿分别为MPS-ⅠH型和MPS-Ⅵ型，移植时年龄为23个月和18个月，均采用白舒菲20mg／kg＋环磷酰胺200mg／kg进行预处理，干细胞分别来自9／10相合的无关供体和全相合同胞供体。结果移植后11d中性粒细胞达到0．5×10^9/L，14d短串联重复序列-聚合酶链反应证实100％血细胞来自供体，移植后3个月疾病相关的酶活性分别达到70nmol／h·mg和66nmol／h·mg，移植后2年酶活性仍然维持在50．9nmol／h·mg和44．5nmol／h·mg。MPS-VI型患儿移植过程相当顺利，目前已随访28个月，健康状况良好。尽管MPS-ⅠH患儿移植中曾两次因肺炎合并急性心功能衰竭，但经紧急气管插管、机械通气等综合治疗后好转，随访至今也已25个月，目前心肺功能明显改善，肝脏缩小至正常大小，角膜混浊明显减轻，手指僵硬也有所改善。结论异基因造血干细胞移植可用于治疗MPS-Ⅰ、MPS-Ⅵ；尽早移植可望减少移植相关并发症；移植所产生的临床效果需要更长时间的随访。

关键词：异基因造血干细胞移植儿童粘多糖累积症

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重组脂联素融合蛋白的表达及其生物学活性测定

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中国现代医药杂志 2008年第3期10卷 8-11页

作者：王胜芬韩佩珍穆传杰赵明辉卢圣栋中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所核医学室天津市分子核医学重点实验室天津300192 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

目的表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实。将目的序列(18-247氨基酸)亚克隆至... 详细信息

目的表达重组脂联素融合蛋白(adiponectin-Trx),并测定其生物学活性。方法从小鼠脂肪组织提取总RNA,应用序列特异性引物经RT-PCR方法扩增获得全长脂联素基因序列,克隆至pGEM-T载体,序列经DNA测序证实。将目的序列(18-247氨基酸)亚克隆至pET-32(a)表达载体,重组质粒adiponectin/pET32(a)的序列经测序证实。将adiponectin/pET32(a)转化表达宿主菌OrigamiTM(DE3),在27℃以1mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE和氨基酸测序检测目的蛋白的表达,目的蛋白经组氨酸镍螯和树脂亲和纯化。以不同浓度的融合蛋白adiponectin-Trx和Trx蛋白处理体外培养的人脐静脉内皮细胞,细胞增殖法测定其生物学活性。结果小鼠脂肪组织脂联素基因的编码序列,337位点上的碱基A被G置换,导致在113位的蛋氨酸被缬氨酸取代。序列测定表明,构建的重组表达载体adiponectin/pET32a序列完全正确,诱导工程菌主要表达可溶性的融合蛋白adiponectin-Trx,部分以包含体形式表达。表达产物的相对分子量(Mr)同预期分子量相同,adiponectin-Trx Mr为43000,Trx Mr为19000。在低浓度时融合蛋白刺激人脐静脉内皮细胞增殖。结论小鼠脂肪组织脂联素基因编码序列与来自3T3-L1脂肪细胞的编码序列不同。成功地在***中表达了重组脂联素融合蛋白并具有生物学活性。

关键词：重组脂联素融合蛋白可溶性生物学活性

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DR5介导T淋巴瘤细胞死亡的分子机制研究

DR5介导T淋巴瘤细胞死亡的分子机制研究

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第六届全国免疫学学术大会

作者：陈采凤刁智娟郭雅彬刘彦信郑德先中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

研究背景:TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)是TNF(tumor necrosis factor)家族新成员,能够特异诱导多数肿瘤细胞凋亡,而对大多数正常细胞没有毒性。AD5-10是TRAIL的功能性受体DR5(death receptor 5)免... 详细信息

关键词：淋巴瘤细胞 DR5 Jurkat 分子机制

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