检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2007年第8期34卷 830-835页

作者：宋存先张琳华张超 LEVY RJ 中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物材料重点实验室 Childrens Hospital of Philadephia PA19104USA

基因治疗是未来临床医学最具潜力的治疗方式,目前阻碍临床基因治疗发展的主要因素是缺乏安全和高效的基因载体,因此研究理想的非病毒转基因载体具有重要的意义.构建了由质粒DNA(D)-抗DNA抗体(A)-阳离子脂质体(C)组成的三元复合纳米基因... 详细信息

基因治疗是未来临床医学最具潜力的治疗方式,目前阻碍临床基因治疗发展的主要因素是缺乏安全和高效的基因载体,因此研究理想的非病毒转基因载体具有重要的意义.构建了由质粒DNA(D)-抗DNA抗体(A)-阳离子脂质体(C)组成的三元复合纳米基因载体(DAC),研究表明,三组分在磷酸缓冲液中可通过分子组装形成复合纳米胶束,DAC在细胞培养中表现出显著高效的基因表达,DAC在血管平滑肌细胞中的基因转染效率比不含抗DNA抗体的二元组合(DC)高4倍,比不含阳离子脂质体的二元组合(DA)约高11倍.激光共聚焦荧光显微观察证明,DAC细胞摄取量和DNA进入细胞核的量均明显高于对照组,而DC二元组合(不含抗DNA抗体)的DNA很少进入细胞核,细胞在DAC存在下生长正常.未发现细胞毒性.研究结果提示,DAC的作用机理主要是三元复合胶束中DNA的装载量比二元载体大得多,抗DNA抗体与阳离子脂质体的协同作用明显有利于DNA被细胞摄取和胞吞,从而提高了基因的转染和表达.

关键词：抗DNA抗体质粒DNA 阳离子脂质体三元复合纳米基因载体

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金纳米粒子与单链DNA的相互作用

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高等学校化学学报 2009年第1期30卷 95-99页

作者：孙莉萍张建锋李辉王秀燕张召武王霜张其清厦门大学材料学院生物医学工程研究中心厦门市生物医学工程技术研究中心福建省生物医学工程重点实验室厦门361005 中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物医学材料重点实验室天津300192

研究了金纳米粒子与单链DNA在不同pH值时的相互作用以及金纳米粒子与不同碱基序列单链DNA的相互作用.结果表明,在pH为12.6的强碱性条件下,单链DNA能使金纳米粒子稳定分散在溶液中;在pH为1.4的强酸性条件下,单链DNA能保护金纳米粒子不发... 详细信息

研究了金纳米粒子与单链DNA在不同pH值时的相互作用以及金纳米粒子与不同碱基序列单链DNA的相互作用.结果表明,在pH为12.6的强碱性条件下,单链DNA能使金纳米粒子稳定分散在溶液中;在pH为1.4的强酸性条件下,单链DNA能保护金纳米粒子不发生融合,而只发生团聚,且团聚现象具有可逆性.不同寡核苷酸对金纳米粒子的亲和力按poly dA>poly dC>poly dT的顺序依次减弱.单链DNA对纳米金的保护作用强度与单链DNA的长度成正比.

关键词：金纳米粒子单链DNA 相互作用 ssDNA

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壳聚糖载基因纳米粒子的研究

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生物医学工程学杂志 2005年第6期22卷 1171-1176页

作者：李大伟张海玲马洁宋丽萍郭志义冷希岗中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物医学材料重点实验室天津300192

以壳聚糖为基质研究载基因纳米粒子的制备及其对血管平滑肌细胞的转染效率.制备载绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)和组织因子途径抑制因子(Tissue factor pathway inhibitor, TFPI)质粒DNA的壳聚糖纳米粒子,透... 详细信息

以壳聚糖为基质研究载基因纳米粒子的制备及其对血管平滑肌细胞的转染效率.制备载绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)和组织因子途径抑制因子(Tissue factor pathway inhibitor, TFPI)质粒DNA的壳聚糖纳米粒子,透射电镜观察两种纳米粒子皆呈球形,光子相关色谱仪(PCS)测定显示纳米粒子的平均粒径为149 nm,粒径分布在80～250 nm 之间;载基因纳米粒子的DNA包埋效率和DNA含量分别为96%±1.38%和37%±3.0%.载基因壳聚糖纳米粒子可以有效地保护DNA,防止核酸酶对其的降解作用.血管平滑肌细胞转染实验表明,纳米粒子对细胞基本无毒性,其转染效率与阳离子脂质体转染试剂LipofectAMINETM相近.

关键词：壳聚糖纳米粒子基因组织因子途径抑制因子细胞转染

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人组织因子途径抑制因子在毕赤酵母中的表达与纯化

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中国医学科学院学报 2007年第2期29卷 222-227页

作者：罗师平宋丽萍余波张海玲刘兰霞冷希岗中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物医学材料重点实验室天津300192

目的利用毕赤酵母高效表达人组织因子途径抑制因子(TFPI)。方法利用基因定点突变技术对人TFPIcDNA特定序列进行定点突变(同义突变)。将获得的突变体及野生型cDNA分别插入表达载体pPic9中,转化酵母宿主菌GS115和KM71,用0.5%的甲醇诱导重... 详细信息

目的利用毕赤酵母高效表达人组织因子途径抑制因子(TFPI)。方法利用基因定点突变技术对人TFPIcDNA特定序列进行定点突变(同义突变)。将获得的突变体及野生型cDNA分别插入表达载体pPic9中,转化酵母宿主菌GS115和KM71,用0.5%的甲醇诱导重组蛋白表达。细胞培养上清经超滤浓缩后,依次用DEAE-sepharose Fast Flow、Heparin-sepharose CL6B及Sephadex G-75柱层析分离纯化得到重组蛋白,分别采用凝胶扫描成像定量分析和底物显色法测定重组蛋白的表达量和活性。结果凝胶扫描成像定量分析显示,同义突变体的表达量(1mg/L)显著高于天然型(0.1mg/L)。活性测定表明GS115重组菌在诱导表达12h后即可于培养上清中检测到TFPI活性,36h达峰值;而KM71重组菌诱导表达24h后才开始于培养上清中检测到TFPI活性,72h达峰值。两个菌株中突变体mTFPI-pPic9转化子的表达量均显著高于TFPI-pPic9转化子。重组蛋白相对分子质量约为42000。结论对TFPI-cDNA特定序列进行同义突变后能显著提高重组蛋白在毕赤酵母细胞中的表达,且显著高于在酿酒酵母和昆虫细胞的表达;重组蛋白具有良好的生物活性。因此,利用毕赤酵母表达TFPI是一种较好的选择。

关键词：组织因子途径抑制因子毕赤酵母同义突变

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壳聚糖/羟基磷灰石复合骨折内固定棒材的制备与性能研究

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功能材料 2011年第1期42卷 128-131页

作者：孙珍珍蔡汝汝蒲曦鸣杨云姚清清侯振清张其清厦门大学生物医学工程研究中心/材料学院福建省生物医学工程重点实验室厦门市生物医学工程技术研究中心福建厦门361005 中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物医学材料重点实验室天津300192

采用原位沉析法制备了壳聚糖/羟基磷灰石(CS/HA)复合棒材。用预先沉积的壳聚糖膜将含有Ca、P源的壳聚糖溶液与凝固液隔离,同时控制壳聚糖沉积与羟基磷灰石前驱体转化为羟基磷灰石的过程,使二者得以均匀复合。燃烧试验结果表明无机成分... 详细信息

采用原位沉析法制备了壳聚糖/羟基磷灰石(CS/HA)复合棒材。用预先沉积的壳聚糖膜将含有Ca、P源的壳聚糖溶液与凝固液隔离,同时控制壳聚糖沉积与羟基磷灰石前驱体转化为羟基磷灰石的过程,使二者得以均匀复合。燃烧试验结果表明无机成分均匀分散于壳聚糖中,FT-IR、XRD和TEM测试证实原位生成羟基磷灰石,弯曲强度测试结果表明,原位沉析法制备的材料具有层状结构,CS/HA(质量比20/4)复合材料弯曲强度达133MPa,弯曲模量6.8GPa。

关键词：壳聚糖羟基磷灰石原位沉析内固定

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壳聚糖基因纳米粒子的细胞摄入和体外毒性研究

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生物医学工程学杂志 2007年第6期24卷 1295-1300页

作者：张海玲王芹宋丽萍岳井银冷希岗中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津生物医学材料重点实验室天津300192 中国医学科学院中国协和医科大学放射医学研究所天津300192

用分子量为50kDa和400kDa的壳聚糖分别和[α-32P]dATP标记的质粒DNA,在不同的N/P比下,通过复凝聚方法形成基因纳米粒子。对形成的壳聚糖基因纳米粒子(Chitosan gene nanoparticle,CGN)进行表征,评价CGN体外细胞毒性,研究两种壳聚糖形成... 详细信息

用分子量为50kDa和400kDa的壳聚糖分别和[α-32P]dATP标记的质粒DNA,在不同的N/P比下,通过复凝聚方法形成基因纳米粒子。对形成的壳聚糖基因纳米粒子(Chitosan gene nanoparticle,CGN)进行表征,评价CGN体外细胞毒性,研究两种壳聚糖形成的基因纳米粒子被A10和K562细胞摄入的量和速度。结果表明:(1)随着壳聚糖分子量和N/P比的增大,形成的基因纳米粒子更易于进入细胞,同时显示纳米粒子的zeta电位与细胞摄入量之间存在关联性;(2)壳聚糖基因纳米粒子的毒性远远小于商品化的细胞转染试剂Lipofectamine2000。

关键词：质粒壳聚糖基因纳米粒子细胞摄入细胞毒性

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诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的体外研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第11期20卷 1114-1118页

作者：晏杰刘玲蓉张其清中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物医学材料重点实验室天津300192

目的探讨转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)、胰岛素样生长因子1(insulin-likegrowthfactor1,IGF-1)在诱导骨髓间充质干细胞(marrowmesenchymalstemcells,MSCs)向软骨细胞分化过程中的相互作用,并研究细胞密度对MSCs向软骨细胞分化的影响。方法取健康昆明种小白鼠骨髓,用全骨髓贴壁法筛选获得MSCs,体外培养传代。采用特定的诱导培养使MSCs向软骨细胞分化,按培养基内添加生长因子的不同分成3个实验组和对照组。实验组分别为:TGF-β1+IGF-1联合应用组(TGF-β110ng/ml、IGF-150ng/ml);TGF-β1单独应用组(TGF-β110ng/ml);IGF-1单独应用组(IGF-150ng/ml);对照组不添加任何生长因子。TGF-β1+IGF-1联合应用组于诱导14d和21d,分别进行甲苯胺蓝染色及免疫荧光双染法鉴定;于诱导7、14和21d各组分别提取诱导细胞总RNA,进行RT-PCR扩增,检测TGF-β1、IGF-1对诱导细胞型胶原表达量的影响;比较MSCs在平板培养及细胞团培养时,型胶原表达量的差异。结果TGF-β1+IGF-1联合应用组诱导培养14d,诱导软骨细胞甲苯胺蓝染色呈阳性,免疫荧光染色可见诱导软骨细胞的细胞外基质含有型胶原。各组基因扩增产物的凝胶电泳可见,TGF-β1+IGF-1联合应用组和TGF-β1单独应用组型胶原扩增片段呈阳性;IGF-1单独应用组和对照组,未见型胶原扩增条带;凝胶成像系统灰度扫描示型胶原表达量TGF-β1+IGF-1联合应用组各时间点均比TGF-β1单独应用组明显增加(P<0.05)。细胞团培养模式下,诱导细胞表达型胶原比平板培养模式更加显著。结论MSCs向软骨细胞诱导分化时,IGF-1对TGF-β1有明显的促进作用;细胞培养密度提高有利于MSCs成软骨细胞表型。

关键词：骨髓间充质干细胞生长因子细胞培养细胞诱导小鼠

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纳米羟基磷灰石-壳聚糖骨组织工程支架的研究

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中国修复重建外科杂志 2007年第2期21卷 120-124页

作者：王新刘玲蓉张其清中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物医学材料重点实验室天津300192

目的以一种简单、有效的方法制备多孔的纳米羟基磷灰石（nano hydroxyapatite，nano—HA）-壳聚糖（chitosan，CS）复合支架，并评价其理化性能及与细胞相容性。方法采用原位复合一冷冻干燥方法，制备多孔nano—HA—CS支架。通过扫描电... 详细信息

目的以一种简单、有效的方法制备多孔的纳米羟基磷灰石（nano hydroxyapatite，nano—HA）-壳聚糖（chitosan，CS）复合支架，并评价其理化性能及与细胞相容性。方法采用原位复合一冷冻干燥方法，制备多孔nano—HA—CS支架。通过扫描电镜、透射电镜、X线衍射和傅立叶红外光谱分析支架的微观形貌及材料的组成。分离初生Wistar大鼠的成骨细胞，取传代培养第3代细胞分别与nano—HA—CS支架和纯CS支架共培养2、4、6、8h，各时间点各取4个样品，测定细胞在支架上的黏附率，并通过组织化学染色、扫描电镜观察细胞形态。结果nano—HA—CS复合支架具有多孔结构，孔径为100～500弘m，大多数孔径为400～500μm。具有很高的孔隙率，随CS和HA含量的增加，孔隙率明显降低，密度升高。扫描电镜和透射电镜观察显示合成的HA晶体，晶粒大小为纳米级，在支架孔壁上均匀、连续分布如“铺路石”样。X线衍射和红外光谱分析表明合成的HA是含CO3^2-弱结晶纳米晶体。细胞相容性实验显示，成骨细胞在支架上黏附、增殖，并分泌纤维状细胞外基质；在复合支架上的黏附率明显高于纯CS支架。结论采用原位复合与冷冻干燥法结合制备的nano—HA—CS复合支架具有良好的理化性质和细胞相容性，有望应用于组织工程骨的构建。

关键词：纳米羟基磷灰石壳聚糖骨组织工程支架

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N-羧甲基壳聚糖微泡超声造影剂的制备与性能评价

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中国医学科学院学报 2006年第4期28卷 497-501页

作者：吕丰陈素霞刘天军孙洪范中国医学科学院中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物材料重点实验室天津300192

目的制备N-羧甲基壳聚糖微泡超声造影剂，观察其基本特征及对动物肝脏超声显影效果。方法采用（油／水）／油复合乳液-溶剂蒸发法制备微泡超声造影剂，通过光学显微镜和扫描电镜观察微泡的大小、形态及粒径分布，通过股动脉注射0．5ml... 详细信息

目的制备N-羧甲基壳聚糖微泡超声造影剂，观察其基本特征及对动物肝脏超声显影效果。方法采用（油／水）／油复合乳液-溶剂蒸发法制备微泡超声造影剂，通过光学显微镜和扫描电镜观察微泡的大小、形态及粒径分布，通过股动脉注射0．5ml该超声造影剂到动物体内，观察动物肝脏超声显髟效果。结果N-羧甲基壳聚糖微泡为空心球形结构，分散均匀，形状规则，粒径在2—3μm，壁厚为250～300nm。该造影剂对动物肝脏超声显影效果明显增强。结论N-羧甲基壳聚糖微泡可作为一种性能较好的超声造影剂。

关键词：超声造影剂微泡 N-羧甲基壳聚糖

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多壁碳纳米管诱导A549细胞氧化应激与去极化线粒体膜电位

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高等学校化学学报 2009年第3期30卷 497-501页

作者：叶社房钟李明吴艺晖张其清厦门大学材料学院生物医学工程研究中心生物材料系福建省生物医学工程重点实验室厦门市生物医学工程技术研究中心厦门361005 中国医学科学院＆中国协和医科大学生物医学工程研究所天津市生物材料重点实验室天津300192

以人肺上皮细胞系A549为模型细胞，探讨多壁碳纳米管的细胞毒性效应及其机制．A549细胞暴露于不同浓度（0-300μg／mL）的多壁碳纳米管后，用MTT比色法检测细胞活力和Hoechst 33342染色法观察细胞形态；用活性氧（ROS）敏感探针2’，7’... 详细信息

以人肺上皮细胞系A549为模型细胞，探讨多壁碳纳米管的细胞毒性效应及其机制．A549细胞暴露于不同浓度（0-300μg／mL）的多壁碳纳米管后，用MTT比色法检测细胞活力和Hoechst 33342染色法观察细胞形态；用活性氧（ROS）敏感探针2’，7’-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）结合流式细胞仪检测细胞内ROS水平；用荧光探针JC-1结合激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位△ψm的变化；用免疫荧光和蛋白印迹法检测细胞氧化应激敏感蛋白血红素氧合酶-1（HO-1）的表达水平．结果表明，多壁碳纳米管可引起A549细胞活性降低、细胞内活性氧ROS过量产生以及谷胱甘肽GSH含量下降，诱导细胞氧化应激效应；抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）抑制多壁碳纳米管诱导的A549细胞内ROS的产生．多壁碳纳米管处理A549细胞2h后，诱发细胞线粒体膜电位下降；多壁碳纳米管诱导细胞氧化应激的同时伴有适应性应激蛋白HO-1的上调表达．结果表明，细胞氧化应激和线粒体膜电位去极化可能是多壁碳纳米管诱导A549细胞毒性效应的重要机制．

关键词：多壁碳纳米管线粒体膜电位氧化应激血红素氧合酶-1

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