检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实用诊断与治疗杂志 2019年第12期33卷 1145-1149页

作者：吴文齐刘超陈晓燕段永娟郑佳睿张英驰竺晓凡中国医学科学院北京协和医学院血液病医院中国医学科学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室国家血液病临床医学研究中心儿童血液病诊疗中心天津300020 天津医科大学基础医学院天津300070

目的探讨在急性B淋巴细胞白血病细胞系REH中敲除抑制哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)活性的基因nprl2后,细胞对雷帕霉素的敏感性。方法构建靶向nprl2基因的CRISPR-Cas9载体,并包装为病毒CRISPR-Cas9-nprl... 详细信息

目的探讨在急性B淋巴细胞白血病细胞系REH中敲除抑制哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)活性的基因nprl2后,细胞对雷帕霉素的敏感性。方法构建靶向nprl2基因的CRISPR-Cas9载体,并包装为病毒CRISPR-Cas9-nprl2-sg1、CRISPR-Cas9-nprl2-sg2、CRISPR-Cas9-nprl2-sg3感染REH细胞(分别为REH-nprl2-sg1、REH-nprl2-sg2和REH-nprl2-sg3细胞),感染72 h后采用1 mg/L的嘌呤霉素处理72 h,提取细胞DNA进行PCR,进行一代测序,测序结果为杂峰的是感染成功细胞(REH-nprl2-sg1)(敲除组)。REH细胞感染不含sgRNA的CRISPR-Cas9质粒空载体为对照组。采用实时定量PCR检测2组细胞nprl2 mRNA表达水平,采用CCK8法检测2组细胞培养第1~7天细胞活性,计算细胞增殖倍数;2组分别加入0.1、1、10、100、1000、10000 nmol/L雷帕霉素,培养72 h后检测细胞活性,比较雷帕霉素对2组细胞的半数抑制浓度。结果敲除组细胞nprl2 mRNA相对表达量(0.0123±0.0027)低于对照组(0.8330±0.0708)(P<0.05);敲除组第5~7天细胞增殖倍数(15.134±0.312、20.589±0.436、37.595±0.917)高于对照组(13.690±0.106、17.920±0.291、18.817±0.217)(P<0.05),第1~4天与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);1、10、100、1000、10000 nmol/L雷帕霉素处理后,敲除组细胞活性(0.806±0.001、0.478±0.013、0.323±0.002、0.274±0.008、0.279±0.003)较对照组(1.000±0.011、0.711±0.045、0.538±0.034、0.432±0.019、0.403±0.025)明显降低(P<0.05),敲除组雷帕霉素对细胞半数抑制浓度(0.48 nmol/L)小于对照组(2.07 nmol/L)。结论敲除nprl2后的REH细胞对雷帕霉素的敏感性明显提高,在伴有mTOR通路突变的急性B淋巴细胞白血病患者中联合使用雷帕霉素可能有较好治疗效果。

关键词：急性淋巴细胞白血病 CRISPR-Cas9 npr 12 mTOR

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靶向肿瘤坏死因子的小分子抑制剂的研究

靶向肿瘤坏死因子的小分子抑制剂的研究

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第八届泛环渤海生物化学与分子生物学会2018年学术交流会

作者：公海艳马莉朱海燕纪庆苏培刘鹏曹善楠姚剑峰韩明哲周家喜许元富中国医学科学院中国协和医科大学血液病医院血液研究所实验血液学国家重点实验室

目的:采用计算机虚拟筛选(CADD)结合生物学检测的方法来筛选和研究抗TNF-α的小分子抑制剂。方法:计算机虚拟筛选结合体外细胞活性实验从小分子化合物库中筛选候选小分子化合物。MTT实验检测小分子化合物抑制TNF-α和TNF-β对L929细胞... 详细信息

目的:采用计算机虚拟筛选(CADD)结合生物学检测的方法来筛选和研究抗TNF-α的小分子抑制剂。方法:计算机虚拟筛选结合体外细胞活性实验从小分子化合物库中筛选候选小分子化合物。MTT实验检测小分子化合物抑制TNF-α和TNF-β对L929细胞的杀伤作用。Westernblot、RT-PCR及免疫荧光染色技术来研究小分子化合物对TNF-α和TNF-β下游信号通路的影响。等离子共振技术(SPR)检测小分子化合物与TNF-α的结合能力。采用小鼠急性肝炎模型来研究该小分子抑制剂的体内药效。结果:我们采用计算机虚拟筛选结合体外细胞活性筛选的方法从小分子化合物库(约含有9万个小分子化合物)中筛选出了一个候选小分子化合物——C87;C87可以剂量依赖性的抑制TNF-α和TNF-β对L929细胞的细胞毒作用;在L929细胞中,C87可以有效抑制TNF-α和TNF-β下游信号通路的激活,如Caspase-3、Caspase-8的活化,IκΒ-α的降解,及TNF-α引起的下游KC、TNF-α等基因表达的上调;SPR结果表明C87与TNF-α具有较高亲合力(KD=110n M);在小鼠的急性肝炎模型中,C87可以有效减弱TNF-α引起的炎症反应,显著提高小鼠的存活率。结论:获得了一个新型的TNF-α的小分子抑制剂—C87,它可以在体外有效的抑制TNF-α和TNF-β对L929细胞的细胞毒作用和有效阻断TNF-α和TNF-β下游信号通路的激活,并对小鼠急性肝炎模型具有较好的治疗效果,这使得C87有望在今后开发成为治疗TNF-α相关疾病的特异性小分子靶向药物。

关键词： TNF-α TNF-β 小分子抑制剂计算机虚拟筛选 SPR

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中性粒细胞上清液对人脐带间充质干细胞迁移的影响

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蚌埠医学院学报 2017年第7期42卷 845-847,851页

作者：郑丽坤张磊付岭刘金梅陈乃耀卢士红开滦总医院血液科河北唐山063000 开滦总医院骨科河北唐山063000 河北联合大学附属医院血液科河北唐山063000 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨中性粒细胞上清液和人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养后,对MSCs迁移的影响,为MSCs更好地应用于炎症性疾病的治疗提供理论依据。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs和中性粒细胞按不同比例共培养后,提取中... 详细信息

目的:探讨中性粒细胞上清液和人脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养后,对MSCs迁移的影响,为MSCs更好地应用于炎症性疾病的治疗提供理论依据。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs和中性粒细胞按不同比例共培养后,提取中性粒细胞上清液,UC-MSCs单独培养的为对照组(1∶0),UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中进行培养的为实验组,选择18 h和40 h作为培养时间,根据四甲基偶氮唑盐(MTT)的实验结果,选择具有统计学意义的1∶0、1∶1、1∶50分组和18 h作为实验对象,采用划痕的方法观察24 h内不同时间点MSCs的迁移情况。结果:划痕实验观察到1︰50实验组细胞的迁移较1∶0和1∶1实验组明显增快。结论:高浓度的中性粒细胞的上清液促进人脐带MSCs的迁移。

关键词：中性粒细胞上清液人脐带间充质干细胞迁移

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巨核细胞的形态异常对MDS患者的预后影响

巨核细胞的形态异常对MDS患者的预后影响

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中华医学会第15次全国红细胞疾病(贫血)学术会议

作者：冯格格崔雯蔡文宇秦铁军张悦徐泽锋方力维张宏丽潘丽娟胡耐博曲士强李冰肖志坚中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院 MDS诊疗中心中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院病理中心中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院 MDS诊疗中心

目的:通过巨核细胞免疫酶标染色来检测骨髓增生异常综合症(MDS)患者骨髓涂片中的异常巨核细胞,规范异常巨核细胞的分类以及探讨异常巨核细胞对患者的预后意义.方法:收集2000年1月至2014年4月于我院确诊的423例原发初治MDS病例资料.其中...

目的:通过巨核细胞免疫酶标染色来检测骨髓增生异常综合症(MDS)患者骨髓涂片中的异常巨核细胞,规范异常巨核细胞的分类以及探讨异常巨核细胞对患者的预后意义.方法:收集2000年1月至2014年4月于我院确诊的423例原发初治MDS病例资料.其中有完整随访资料者371例(88％),中位随访时间22 (1～180)月.我们将IPSS-R积分系统为极低危、低危和中危患者定义为较低危患者,而高危和极高危患者定义为较高危患者.通过对423例患者的骨髓涂片进行巨核细胞特异性抗体(CD41)免疫酶标染色,我们将异常巨核细胞分为7类:微小巨核(＜12 μm)、单圆核小巨核(12～40μm)、双圆核小巨核(12～40 μm)、多圆核小巨核(12～40 um)、单圆核巨核(≥40μm)、双圆核巨核(≥40 μm)以及多圆核巨核(≥40 μm).为评估其对预后的影响,我们从两个方面对这7类异常巨核细胞进行分组:(1)按照细胞大小分为小巨核组(＜40μm)以及非小巨核组(≥40μm);(2)按照细胞核数量分为单核巨核组、双核巨核组以及多核巨核组.同时,我们采用最小P值法确定了每一组巨核细胞对预后影响的最佳界值,分别是:小巨核组(≥25％),非小巨核组(≥5％),单核巨核组(≥30％),双核巨核组(≥1％).而多核巨核组在最佳界点处对预后仍无明显影响(P=0.10).结果:我们发现,随着异常巨核细胞的增加,MDS患者的骨髓原始细胞增加、血小板减少、IPSS-R危险度增加.在单因素分析中,小巨核组≥25％、单核巨核组≥30％患者的预后明显变差(中位生存期为19月[95 ％CI,14～23月]vs 46月[95 ％CI,28～64月]:P＜0.001;18月[95％CI,14～23月]vs 49月[95 ％CI,31～68月]:P＜0.001),而在多因素分析中,这种趋势超越了非小巨核组≥5％以及双核巨核组≥1％,成为影响MDS患者总生存的独立预后因素.在IPSS-R较低危组患者中,小巨核组≥25％、单核巨核组≥30％依然是影响生存的独立预后因素.结论:本研究显示临床实践中结合异常形态巨核细胞对MDS患者预后可做进一步分层判定,将小巨核及单核巨核纳入IPSS-R预后积分系统可以更准确的判断MDS患者的预后.

关键词：

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胎盘来源细胞与母血、脐血细胞的嵌合

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中国组织工程研究 2014年第45期18卷 7327-7332页

作者：莫峥盛宏霞韩忠朝徐曼田宠张斌陈虎解放军军事医学科学院附属第307医院造血干细胞移植科北京市100071 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津市300020

背景:胎盘中含有丰富的细胞群,因其中CD34+细胞含量高而受到越来越多学者的关注,有望成为临床造血干细胞移植治疗血液病及其他恶性疾病的新来源。目的:探索胎盘来源细胞的数量、集落形成能力及其与母体的嵌合程度。方法:采用健康足月剖... 详细信息

背景:胎盘中含有丰富的细胞群,因其中CD34+细胞含量高而受到越来越多学者的关注,有望成为临床造血干细胞移植治疗血液病及其他恶性疾病的新来源。目的:探索胎盘来源细胞的数量、集落形成能力及其与母体的嵌合程度。方法:采用健康足月剖腹产妇的胎盘,灌注法及组织块消化法收集胎盘中细胞;流式细胞仪检测胎盘及脐血中CD34+细胞比例;培养细胞集落,定期观察集落形态并计数;序列特异性引物PCR扩增技术及序列特异性寡核苷酸探针方法检测胎盘、脐血和母亲外周血的HLA类型;短串联重复PCR方法检测胎盘细胞、脐血细胞和母亲外周血细胞的嵌合情况。结果与结论:胎盘中CD34+细胞数量明显优于脐血,且胎盘具有体外多种集落形成能力,集落形成良好,同时胎盘提取细胞中含有母体来源成分。提示胎盘中细胞数量及其基本生物学特性使其有潜力成为临床造血干细胞移植的新来源。

关键词：干细胞培养胎盘造血干细胞细胞集落序列特异性寡核苷酸探针嵌合移植脐血 antigens,CD34

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靶向白血病干细胞CD123的毒性融合蛋白的制备

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白血病．淋巴瘤 2011年第8期20卷 490-493页

作者：任思楣张砚君彭洪薇王金宏纪庆范冬梅张楠曾洁卫生部北京医院卫生部临床检验中心北京100730 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

目的构建靶向白血病干细胞CD123的融合蛋白，检测其表达效果及其识别白血病干细胞的活性。方法采用PCR法扩增白细胞介素-3（IL-3）和毒素蛋白（LP）的编码DNA序列，经酶切、连接，克隆至表达载体pAYZ，转化大肠杆菌E-coli 16C9，鉴定阳... 详细信息

目的构建靶向白血病干细胞CD123的融合蛋白，检测其表达效果及其识别白血病干细胞的活性。方法采用PCR法扩增白细胞介素-3（IL-3）和毒素蛋白（LP）的编码DNA序列，经酶切、连接，克隆至表达载体pAYZ，转化大肠杆菌E-coli 16C9，鉴定阳性克隆菌落，经低磷培养基AP5诱导表达融合蛋白***，用CM—FF阳离子柱和抗-Etag亲和层析柱纯化，纯化产物经SDS—PAGE和Western blot鉴定，流式细胞术测定其与红白血病细胞TFl的结合活性。结果构建的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶性蛋白表达，纯化后纯度达95％以上，表达量约为1mg／L，并有与白血病干细胞表面IL-3受体d亚基（CD123）特异性结合的活性。结论构建的融合蛋白IL-3-G4S—LP具有与白血病干细胞结合的特性，可望成为复发和耐药白血病的治疗药物。

关键词：融合蛋白白细胞介素3 肿瘤干细胞靶向治疗

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脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞Bax、MCL-1基因表达的影响

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实用医学杂志 2011年第5期27卷 745-747页

作者：郑丽坤张磊刘牧赵辉卢士红吴寿岭陈乃耀联合大学附属开滦医院血液科河北省唐山市063000 联合大学附属开滦医院骨科河北省唐山市063000 联合大学附属医院河北省唐山市063000 天津大学化工学院生物制药实验室 300000 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 联合大学附属开滦医院心内科河北省唐山市063000

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)Bax、MCL-1基因表达的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,按UC-MSCs和中性粒细胞以1∶1、1∶10、1∶50、1∶100比例提取中性粒细胞上清液,实验设立单独UC-MSCs培养的对照组(1∶0)... 详细信息

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)Bax、MCL-1基因表达的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,按UC-MSCs和中性粒细胞以1∶1、1∶10、1∶50、1∶100比例提取中性粒细胞上清液,实验设立单独UC-MSCs培养的对照组(1∶0)和UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中的实验组,在分别培养18和40h后,根据四甲基偶氮唑盐(MTT)实验结果选择具有统计学意义的1∶0、1∶1、1∶50分组作为实验对象,根据MTT实验结果选择具有统计学意义的18h作为实验对象,实时定量PCR检测不同组间MSCs的Bax和MCL-1基因表达量。结果:实时定量PCR检测1∶0、1∶1、1∶50各组间MSCs的Bax和MCL-1基因表达量,1∶50实验组Bax和MCL-1表达量较1∶0和1∶1实验组明显升高(P<0.05),且以Bax升高为主。结论:高浓度的中性粒细胞上清液使MSCs的Bax和MCL-1基因表达量升高,且以凋亡基因Bax升高为主。

关键词：干细胞脐血中性粒细胞上清液 Bax MCL-1

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脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞增殖及白细胞介素-6分泌的影响

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实用医学杂志 2010年第4期26卷 555-557页

作者：郑丽坤张磊卢士红赵辉吴寿岭陈乃耀华北煤炭医学院附属开滦医院血液科唐山市063000 华北煤炭医学院附属开滦医院骨科唐山市063000 华北煤炭医学院附属开滦医院心内科唐山市063000 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所华北煤炭医学院附属医院天津市300020 中国医学科学院中国协和医科大学血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 天津大学化工学院生物制药实验室 300000

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)增殖、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中培养为实验组,UC-MSCs和中... 详细信息

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)增殖、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中培养为实验组,UC-MSCs和中性粒细胞的比例分别为1∶1、1∶10、1∶50、1∶100,UC-MSCs单独培养为对照组(1∶0)。在分别培养18h和40h后,用MTT法检测各组增殖,评价不同组间的增殖情况,用ELISA方法检测不同组间培养上清IL-6水平。结果:1∶50和1∶100组UC-MSCs生长受到抑制(P<0.05),18h和40h差异无显著性(P>0.05)。1∶50实验组中,IL-6的分泌水平低于1∶0和1∶1实验组(P<0.05)。结论:高浓度的脐血中性粒细胞上清液抑制UC-MSCs的增殖。高浓度的脐血中性粒细胞的上清液抑制人UC-MSCs分泌IL-6。

关键词：间质干细胞脐带细胞增殖白细胞介素-6 中性粒细胞

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阿糖胞苷增强急性白血病细胞B7分子表达及激活T细胞的免疫反应

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白血病．淋巴瘤 2009年第11期18卷 650-653页

作者：赵英新王玫周征翟文静周圆韩明哲中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨阿糖胞苷（Ara-C）对急性白血病（AL）细胞B7分子表达和激活T细胞的免疫反应。方法用流式细胞术检测原代AL细胞B7分子的表达。同时检测Ara-C诱导HL-60细胞 B7分子的表达，进而用RT-PCR方法检测HL-60细胞B7 mRNA表达。MTT法检... 详细信息

目的探讨阿糖胞苷（Ara-C）对急性白血病（AL）细胞B7分子表达和激活T细胞的免疫反应。方法用流式细胞术检测原代AL细胞B7分子的表达。同时检测Ara-C诱导HL-60细胞 B7分子的表达，进而用RT-PCR方法检测HL-60细胞B7 mRNA表达。MTT法检测诱导后HL-60细胞对人外周血单个核细胞（PBMC）的促增生作用，并用RT-PCR法测定γ-干扰素（IFN-γ）含量。结果 40例AL患者中B7-1阳性1例，B7-2阳性3例、弱阳性4例。Ara-C能显著刺激HL-60细胞 B7表达，诱导后的HL-60细胞显著刺激PBMC增生并产生IFN-γ。结论原代AL细胞低表达B7-1和B7-2分子。在体外，Ara-C通过诱导HL-60细胞表达B7分子，刺激T淋巴细胞增生，使PBMC分泌IFN-γ增多，显著提高了白血病细胞的免疫原性。

关键词：白血病,急性阿糖胞苷共刺激分子免疫性

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脐带间充质干细胞对脐血CD34＋细胞体外扩增的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第14期13卷 2645-2650页

作者：袁晓莉孟恒星郝牧李长虹韩俊领邱录贵中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津市300020 河南省人民医院河南省郑州市450003 天津市脐血造血干细胞库天津市300020

背景:体外扩增是目前解决脐带血干细胞移植所面临的单份脐血造血干祖细胞数不足问题的主要手段。已有许多关于不同来源的间充质干细胞联合不同细胞因子支持脐血造血干祖细胞体外扩增的报道,而单独应用间充质干细胞对人脐血CD34+细胞体... 详细信息

背景:体外扩增是目前解决脐带血干细胞移植所面临的单份脐血造血干祖细胞数不足问题的主要手段。已有许多关于不同来源的间充质干细胞联合不同细胞因子支持脐血造血干祖细胞体外扩增的报道,而单独应用间充质干细胞对人脐血CD34+细胞体外扩增的报道仍很少。目的:观察应用脐带源间充质干细胞作基质层的体外培养体系对脐血CD34+细胞体外扩增的支持作用。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-03/2007-05在中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所、实验血液学国家重点实验室完成。材料:经产妇知情同意,采集健康足月分娩胎儿脐带9份。方法:应用贴壁培养的方法从正常足月出生儿脐带中分离培养间充质干细胞,通过细胞形态学、免疫表型、分化实验进行鉴定。利用免疫磁珠分离法从正常足月出生儿脐带血中分离CD34+细胞。应用3种不同培养体系进行脐血CD34+细胞的体外扩增:单独应用脐带源间充质干细胞作基质层、细胞因子培养体系和间充质干细胞联合细胞因子培养体系。主要观察指标:应用细胞计数法、集落培养计数法和流式细胞学检测法对扩增后细胞数量、集落形成能力和免疫表型进行分析比较。RT-PCR检测间充质干细胞中细胞因子的表达情况。结果:培养第14天后,间充质干细胞组的CD34+细胞比例明显高于细胞因子联合间充质干细胞组;CD34+细胞总数为培养前的(4.19±1.37)倍,明显高于细胞因子组。培养第7天和第14天,间充质干细胞组的CD34+CD38-细胞亚群比例均高于另两组。RT-PCR结果显示,脐带源间充质干细胞体外可表达干细胞因子和血小板生成素早期干细胞效应因子。结论:单独应用脐带源间充质干细胞可有效地对脐血CD34+细胞进行体外扩增,更有利于保持较早期干、祖细胞的扩增。

关键词：间充质干细胞脐带脐血 CD34+细胞体外扩增

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