检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2007年第6期15卷 1236-1239页

作者：于珍王亚非李增军周征徐世才邱录贵中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究评价实时定量PCR(RQ-PCR)技术检测IgH水平对B细胞恶性肿瘤患者造血干细胞移植(HSCT)后残留肿瘤细胞监测的意义。采用家族一致性TaqMan探针联合等位基因特异性寡核苷酸(ASO)上游引物技术检测22例B细胞恶性肿瘤患者HSCT前后骨髓单... 详细信息

本研究评价实时定量PCR(RQ-PCR)技术检测IgH水平对B细胞恶性肿瘤患者造血干细胞移植(HSCT)后残留肿瘤细胞监测的意义。采用家族一致性TaqMan探针联合等位基因特异性寡核苷酸(ASO)上游引物技术检测22例B细胞恶性肿瘤患者HSCT前后骨髓单个核细胞的IgH水平动态变化。IgH水平以内参基因GAPDH进行归一化。结果表明,RQ-PCR实验可重复灵敏度为1个拷贝。9例IgH单克隆重排患者,在HSCT后1个月骨髓中IgH的拷贝数较初治时明显降低(6.67×103/106GAPDHvs29/106GAPDH,p<0.01)。3例移植后15个月IgH的拷贝数持续小于102/106GAPDH,18个月后IgH水平为0的患者获得了完全的临床和分子遗传学缓解(CCyR);5例移植后3个月以内IgH拷贝数持续小于102/106GAPDH,随后IgH拷贝数持续小于103/106GAPDH的患者临床获得完全缓解(CR)。1例患者移植后近3个月时IgH拷贝数为4.5×103/106GAPDH,4个月时临床复发。RQ-PCR检测8例干细胞采集物的肿瘤污染水平为3.68×102(0-1720)/106GAPDH,外周血采集物中的肿瘤污染小于骨髓[75(0-890)/106GAPDHvs1.1×103(527-1720)/106GAPDH,p<0.05]。采集物可用于RQ-PCR检测的8例患者无论肿瘤污染程度如何,临床均无复发。采集物中肿瘤污染的水平与初治及移植后1个月的IgH水平呈正相关(r值分别为0.810、0.708,p<0.05)。结论:RQPCR能够有效监测B细胞恶性肿瘤患者移植后IgH水平动态变化。移植后3个月内IgH拷贝数大于103/106GAPDH可能是预测患者复发的标志。

关键词：造血干细胞移植 B细胞恶性肿瘤实时定量PCR IgH重排

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RNA干扰c-kit对K562细胞成瘤性的影响

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天津医药 2007年第12期35卷 921-923,I0009页

作者：袁文肃李克马丽芦颖李庆华李静马小彤庞天翔中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室300020

目的:研究短干扰RNA(siRNA)对K562细胞中c-kit基因表达的影响。方法:构建针对c-kit基因的shRNA表达质粒pSilencer-kit,在脂质体介导下转染人白血病细胞系K562,应用RT-PCR检测c-kit mRNA水平变化,并将转染后的K562细胞注射裸小鼠体内检... 详细信息

目的:研究短干扰RNA(siRNA)对K562细胞中c-kit基因表达的影响。方法:构建针对c-kit基因的shRNA表达质粒pSilencer-kit,在脂质体介导下转染人白血病细胞系K562,应用RT-PCR检测c-kit mRNA水平变化,并将转染后的K562细胞注射裸小鼠体内检测成瘤能力的变化。结果:重组体pSilencer-kit转染细胞后显著下调c-kit mRNA水平及其在裸鼠体内成瘤能力,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:利用RNA干扰技术能有效抑制靶基因c-kit的表达,为肿瘤的基因治疗提供新思路。

关键词： RNA 小分子干扰 K562细胞原癌基因蛋白质c—kit 基因表达转染逆转录聚合酶链反应

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Cariporide对肿瘤细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

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天津医药 2007年第11期35卷 837-839页

作者：李庆华庞天翔马丽李彬芦颖李洪强茹永新袁文肃中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室300020

目的:探讨特异性抑制剂Cariporide通过抑制钠氢离子交换蛋白1(NHE1)功能而阻止肿瘤细胞增殖的机制。方法:应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Cariporide对细胞增殖的抑制率,共聚焦荧光显微镜测算双羧乙基碳氧荧光素四乙酰氧甲酯(BCECF-AM)... 详细信息

目的:探讨特异性抑制剂Cariporide通过抑制钠氢离子交换蛋白1(NHE1)功能而阻止肿瘤细胞增殖的机制。方法:应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Cariporide对细胞增殖的抑制率,共聚焦荧光显微镜测算双羧乙基碳氧荧光素四乙酰氧甲酯(BCECF-AM)的荧光强度,检验其下调细胞内pH值,ELISA试剂盒测定其对体外培养细胞表达和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,观测其对动物体内肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果:随着Cariporide的剂量增加或作用时间延长,HeLa细胞内pH值逐渐降低,肿瘤细胞表达VEGF减少。伴随着细胞内pH值降低,VEGF分泌水平逐渐下降,两者之间呈显著相关性(P<0.05)。另外,Cariporide能抑制动物体内的肿瘤增殖。结论:Cariporide能够减少肿瘤细胞表达和分泌VEGF,抑制动物体内肿瘤增殖。

关键词：钠氢反向转运物血管内皮生长因子类氢离子浓度细胞系,肿瘤肿瘤细胞增殖

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小鼠IL-18基因修饰瘤苗的抗白血病作用研究

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现代免疫学 2007年第4期27卷 274-278页

作者：徐玢马小彤董成亚石洋林永敏吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

我们在前期工作中成功制备了IL-18基因修饰的白血病疫苗,为了探讨IL-18基因修饰瘤苗的体内抗白血病作用,实验采用L1210小鼠淋巴细胞白血病模型,在小鼠体内接种IL-18基因修饰瘤苗,观察瘤苗对L1210细胞致瘤性的影响及免疫保护作用,并进一... 详细信息

我们在前期工作中成功制备了IL-18基因修饰的白血病疫苗,为了探讨IL-18基因修饰瘤苗的体内抗白血病作用,实验采用L1210小鼠淋巴细胞白血病模型,在小鼠体内接种IL-18基因修饰瘤苗,观察瘤苗对L1210细胞致瘤性的影响及免疫保护作用,并进一步对其抗白血病作用机制进行了探索。结果显示,IL-18基因修饰瘤苗能够明显延长荷瘤小鼠存活时间,大部分小鼠达到长期生存,且长生存小鼠用野生型L1210细胞二次攻击后大多数仍能长期生存,表明IL-18基因修饰瘤苗有显著的抗白血病作用,并可诱导小鼠产生免疫记忆和免疫保护。机制探讨发现,接种IL-18基因修饰瘤苗后,小鼠脾脏淋巴细胞对L1210肿瘤细胞的CTL及NK细胞杀伤活性明显高于对照组(P<0.05),提示IL-18基因修饰瘤苗能够显著增强抗肿瘤CTL和NK细胞反应。接种瘤苗可使小鼠IFN-γ水平升高,但与对照相比无统计学意义,提示IFN-γ可能在IL-18基因修饰瘤苗诱导的抗肿瘤免疫应答中作用不大。

关键词：白细胞介素18 L1210白血病肿瘤疫苗

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动员后外周血中CD34^＋细胞去除前后对改善肢体缺血疗效的研究

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中华血液学杂志 2007年第3期28卷 194-198页

作者：周斌李抒顾东生武开宏刘鹏霞韩忠朝中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室国家干细胞工程技术研究中心天津300020 中国医学科学院、中国协和医科大学阜外医院阜外心血管研究所

目的对动员的外周血单个核细胞（PBMNC）和动员的去除CD34^＋细胞的PBMNC移植治疗裸鼠下肢缺血的疗效进行比较，以探讨PBMNC的治疗机制。方法经过单采获得G-CSF动员的PBMNC后，一部分通过CD34磁珠抗体分选得到去除CD34^＋细胞的PBMNC。... 详细信息

目的对动员的外周血单个核细胞（PBMNC）和动员的去除CD34^＋细胞的PBMNC移植治疗裸鼠下肢缺血的疗效进行比较，以探讨PBMNC的治疗机制。方法经过单采获得G-CSF动员的PBMNC后，一部分通过CD34磁珠抗体分选得到去除CD34^＋细胞的PBMNC。动员的PBMNC和动员的去除CD34^＋细胞的PBMNC荧光标记后按1×10^6细胞或相应体积的PBS分别局部肌肉注射移植到裸鼠缺血下肢。观察下肢血流灌注以及毛细血管密度。用ELISA法检测下肢肌肉的血管内皮生长因子（VEGF）表达，并进一步观察表达的VEGF是否由移植细胞分泌。结果PBMNC移植后缺血下肢血流明显恢复，毛细血管密度明显增加，但去除CD34^＋细胞的PBMNC移植组疗效有所下降。细胞移植后4周，PBMNC组的血流灌注由（20．3±4．2）％恢复为（96．4±5．6）％，对照组仅恢复为（71．3±4．4）％（P〈0．01），去除CD34^＋细胞组恢复为（83．8±5．2）％（P〈0．05）。PBMNC组血管密度为（521±47）／mm^2，去除CD34^＋细胞组为（3964-21）／mm^2（P〈0．05），但仍高于对照组[（276±43）／mm^2]（P〈0．05）。在PBMNC组可以观察到移植的细胞整合到缺血的毛细血管壁。缺血肌肉VEGF的表达明显升高，其共表达VEGF和移植的单个核细胞。结论移植G-CSF动员的PBMNC不但可以通过干细胞整合到血管壁的机制促进血管生长，还可以通过提供细胞因子的机制促进血管生长。去除CD34^＋细胞削弱了动员的PBMNC移植治疗肢体缺血的血管新生效应。

关键词：外周血单个核细胞缺血造血干细胞血管内皮生长因子

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不同细胞因子对两步法所得树突细胞的数量及功能的影响

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中华血液学杂志 2007年第2期28卷 121-123页

作者：王亚非孟恒星葛薇于珍李云涛李桥川万长春徐燕李新李增军王国蓉尤胜国邱录贵中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 天津市脐带血库

从造血干细胞（HSC）诱导树突细胞（DC）传统方法是在GM-CSF＋TNF-α的基础上联合早期细胞因子一步诱导获得。但如果采用先扩增、后诱导的两步法则可以在保证DC功能的基础上显著提高DC数量。我们已经成功建立了一个先用SCF＋FL＋TPO＋I... 详细信息

从造血干细胞（HSC）诱导树突细胞（DC）传统方法是在GM-CSF＋TNF-α的基础上联合早期细胞因子一步诱导获得。但如果采用先扩增、后诱导的两步法则可以在保证DC功能的基础上显著提高DC数量。我们已经成功建立了一个先用SCF＋FL＋TPO＋IL-3扩增10d再加入GM-CSF、IL4、TNF-α诱导8d的两步法从脐血（CB）CD34^＋细胞大量获得DC的体系，但与文献报道类似，所得DC以CD1a^＋细胞为主，代表DC成熟状态的CD83表达不充分。因此，我们在前期工作的基础上探讨扩增阶段的细胞因子及诱导阶段的细胞因子对两步法所得DC的产量及功能的影响，以期进一步提高两步法所得DC的功能。

关键词：细胞因子树突细胞两步法 CD34^+细胞 TNF-α GM-CSF 造血干细胞 CD83

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糖尿病患者动员后外周血单个核细胞促血管新生能力

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中国医学科学院学报 2007年第2期29卷 262-267,I0004页

作者：周斌顾东生刘鹏霞郑翠玲董春兰杜伟廷武开宏韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室国家干细胞工程技术研究中心天津300020 中国医学科学院中国协和医科大学阜外心血管病医院小儿心胸外科北京100037

目的研究糖尿病患者来源的动员后外周血单个核细胞(M-PBMNCs)移植治疗肢体缺血的疗效,探讨糖尿病患者M-PBMNCs促血管新生能力是否有缺陷及其病理生理机制。方法体外培养内皮祖细胞并鉴定和计数。结扎链脲菌素诱导的糖尿病裸鼠股动脉,造... 详细信息

目的研究糖尿病患者来源的动员后外周血单个核细胞(M-PBMNCs)移植治疗肢体缺血的疗效,探讨糖尿病患者M-PBMNCs促血管新生能力是否有缺陷及其病理生理机制。方法体外培养内皮祖细胞并鉴定和计数。结扎链脲菌素诱导的糖尿病裸鼠股动脉,造成重度缺血模型后,将来自糖尿病患者、正常人的M-PBMNCs(106)及磷酸盐缓冲液(PBS)分别局部注射到缺血组织中。在第1、3、7、14、21、28天分别用激光多普勒检测局部血流,观察缺血肢体的活动度和缺血情况,用免疫组织化学方法检测缺血部位毛细血管密度和小动脉密度。结果体外内皮祖细胞培养显示糖尿病患者M-PBMNCs中的内皮祖细胞数量相对较少(P<0.05),裸鼠局部缺血组织血流量及血管密度均与糖尿病患者的内皮祖细胞数量呈正相关(R=0.486,P<0.05;R=0.491,P<0.05),而糖尿病患者内皮祖细胞的数量又与其病程呈负相关(R=-0.587,P<0.05)。糖尿病患者M-PBMNCs促进缺血下肢血流和功能恢复的疗效强于PBS组,但不及正常人M-PBMNCs组(P<0.05)。移植了糖尿病患者M-PBMNCs的缺血组织的毛细血管、小动脉密度均低于正常人M-PBMNCs组(P<0.05)。结论糖尿病患者M-PBMNCs的促血管新生能力存在缺陷,使其移植治疗肢体缺血的疗效减低。

关键词：糖尿病动员后外周血单个核细胞内皮祖细胞缺血

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基质细胞衍生因子-1及其受体在G-CSF诱导的造血干／祖细胞动员中的作用

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中华血液学杂志 2007年第2期28卷 98-102页

作者：靳凤艳邱录贵李桥川孟恒星王亚非于珍李茜韩俊领中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020 吉林省肿瘤医院肿瘤内科 132011 天津市脐带血造血干细胞库

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其特异性受体CXCR4在G-CSF诱导的造血干／祖细胞（HSPC）动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫组织化学、流式细胞术等方法检测健康供者稳态及G-CSF动员过程中骨髓、外周血SDF-... 详细信息

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其特异性受体CXCR4在G-CSF诱导的造血干／祖细胞（HSPC）动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫组织化学、流式细胞术等方法检测健康供者稳态及G-CSF动员过程中骨髓、外周血SDF-1／CXCR4的变化，并应用SDF-1中和性抗体阻断BALB／c小鼠SDF-1信号通路，进一步验证SDF-1／CXCR4在动员中的作用。结果G-CSF动员前骨髓和外周血的SDF-1浓度分别为（7．23±0．66）μg/L和（5．43±0．35）μg／L，动员后分别为（5．88±1．03）μg／L和（5．42±0．52）μg/L。动员后骨髓SDF-1蛋白水平下降（P＜0．05），骨髓和外周血之间的SDF-1浓度梯度消失（P＞0．05）；稳态骨髓、动员后骨髓和动员后外周血的CD34^＋ CXCR4^＋细胞在CD34^＋细胞群中的比例分别为（40．98±21．56）％、（65．80±24．68）％和（27．54±26．03）％。动员后CXCR4在骨髓CD34^＋胞上表达增加（P＜0．05），而外周血CD34^＋细胞CXCR4表达降低（P＜0．05）。SDF-1中和性抗体可降低G-CSF动员的BALB／c小鼠外周血成熟白细胞和祖细胞集落数量（P＜0．05）。结论骨髓中SDF-1水平的降低以及CXCR4在HSPC上表达的下降促进了G-CSF介导的动员的发生。

关键词：基质细胞衍生因子-1 受体 CXCR4 粒细胞集落刺激因子造血干细胞动员

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人mda-7/IL-24对淋巴瘤细胞Namalwa的抑制作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2007年第5期14卷 417-422页

作者：段永娟马小彤董成亚张芳林永敏杨宾霞中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7,又称IL-24)对淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的抑制作用。方法:用半定量RT-PCR方法检测10个造血系统恶性肿瘤细胞系(Namalwa、Raji、K562、NB4、U937、Ramous、CEM、KG1a、HL60、J6-1)中mda-7/IL-24的表达情况。用RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆mda-7/IL-24编码区,构建真核表达载体pTarget-IL-24。经测序鉴定后,用脂质体法转染Namalwa细胞,筛选稳定表达细胞株。转染细胞经RT-PCR和Western blotting证实mda-7/IL-24的表达。通过MTF法、集落形成试验、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验来评价mda-7/IL-24对肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成、凋亡情况、体内致瘤能力的作用。结果:10个造血系统恶性肿瘤细胞系中未检测到mda-7/IL-24的表达;转染重组质粒pTarget-IL-24的Namalwa细胞在mRNA与蛋白水平都有mda-7/IL-24的表达;稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞增殖活力以及集落形成能力与转染空载体的对照组相比明显下降(P<0.05);但是两者的凋亡率比较无统计学意义。裸鼠体内移植瘤实验结果显示稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞株的致瘤性明显低于转染空载体的对照组(P<0.05)。结论:mda-7/IL-24对来源于Burkitt淋巴瘤的Namalwa细胞系具有明显的增殖抑制作用,为Burkitt淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。

关键词：黑素瘤分化相关基因-7 IL-24 淋巴瘤基因治疗

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间充质干细胞对急性白血病患者IL-23和TGF-β1表达的影响

间充质干细胞对急性白血病患者IL-23和TGF-β1表达的影响

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第11次中国实验血液学会议

作者：黄颖杨少光郑翠玲卢士红韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的：探讨人骨髓来源间充质干细胞 (MSC)对急性白血病患者白细胞介素23(IL- 23)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响。

关键词：急性白血病 MSC 骨髓单个核细胞 IL-23 间充质干细胞 TGF

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