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白血病．淋巴瘤 2011年第6期20卷 341-344页

作者：董春兰葛菁梁璐陈小军薛峰韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的检测重组腺病毒方法介导血小板衍生生长因子（PDGF）对人类脐带间质干细胞（MSC）的感染能力，为将其用于基因治疗奠定基础。方法反转录．聚合酶链反应（RT—PCR）法扩增人类PDGF的cDNA序列，构建重组病毒载体AdPDGF。分离培养人类... 详细信息

目的检测重组腺病毒方法介导血小板衍生生长因子（PDGF）对人类脐带间质干细胞（MSC）的感染能力，为将其用于基因治疗奠定基础。方法反转录．聚合酶链反应（RT—PCR）法扩增人类PDGF的cDNA序列，构建重组病毒载体AdPDGF。分离培养人类脐带MSC。体外以不同感染复数感染MSC后，流式细胞术检测感染效率，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白（GFP）表达。锥虫蓝染色及四甲基偶氮唑蓝（MTY）法检测感染后细胞生存活力及增殖能力。酶联免疫吸附（ELISA）法检测细胞上清液中PDGF分泌水平。结果成功构建病毒载体AdPDGF。其对MSC的感染效率随感染复数增加而增高，当感染复数为50时，达到最高，为87．36％。未感染的MSC、感染AdPDGF和对照病毒的MSC活力分别为（97．8±2．3）％、（91．9±4．0）％和（92．8±4．0）％，增殖能力分别为（100±16．8）％，（95．9±12．0）％和（87．5±9．7）％，感染AdPDGF的MSC与两个对照比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。感染48h后MSC能有效分泌PDGF，感染复数为10、30、50时，PDGF分泌水平分别为（1．53±0．37）、（3．03±0．68）和（5．25±0．92）ng／ml，MSC—GFP及MSC组未检测到有PDGF分泌。结论成功构建AdPDGF重组腺病毒并高效感染人类脐带MSC。

关键词：腺病毒科间质干细胞血小板源生长因子基因疗法

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CD19CD20双靶点联合治疗多发性骨髓瘤的应用探索

CD19CD20双靶点联合治疗多发性骨髓瘤的应用探索

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2011医学科学前沿论坛第十二届全国肿瘤药理与化疗学术会议

作者：张砚君张秀丽彭洪薇中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

目的:多发性骨髓瘤是一种浆细胞恶性增殖导致的疾病,患者体内成熟浆细胞表面CD20表达密度低下,临床单独采用美罗华治疗一直不能取得良好疗效。CD19与CD20几乎贯穿B淋巴细胞整个发展过程,但CD19始于B淋巴细胞生长发育的更早期,且CD19+细... 详细信息

目的:多发性骨髓瘤是一种浆细胞恶性增殖导致的疾病,患者体内成熟浆细胞表面CD20表达密度低下,临床单独采用美罗华治疗一直不能取得良好疗效。CD19与CD20几乎贯穿B淋巴细胞整个发展过程,但CD19始于B淋巴细胞生长发育的更早期,且CD19+细胞与骨髓瘤细胞的粘附侵袭特性相关,在骨髓瘤的发生发展中起着关键作用。另外,本室专利设计的CD20抗体较美罗华的抗原识别位点更为广泛,结合能力也很强。基于以上理论,

关键词：多发性骨髓瘤 CD19CD20 双功能抗体美罗华双靶点应用探索联合治疗

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脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞Bax、MCL-1基因表达的影响

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实用医学杂志 2011年第5期27卷 745-747页

作者：郑丽坤张磊刘牧赵辉卢士红吴寿岭陈乃耀联合大学附属开滦医院血液科河北省唐山市063000 联合大学附属开滦医院骨科河北省唐山市063000 联合大学附属医院河北省唐山市063000 天津大学化工学院生物制药实验室 300000 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 联合大学附属开滦医院心内科河北省唐山市063000

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)Bax、MCL-1基因表达的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,按UC-MSCs和中性粒细胞以1∶1、1∶10、1∶50、1∶100比例提取中性粒细胞上清液,实验设立单独UC-MSCs培养的对照组(1∶0)... 详细信息

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)Bax、MCL-1基因表达的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,按UC-MSCs和中性粒细胞以1∶1、1∶10、1∶50、1∶100比例提取中性粒细胞上清液,实验设立单独UC-MSCs培养的对照组(1∶0)和UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中的实验组,在分别培养18和40h后,根据四甲基偶氮唑盐(MTT)实验结果选择具有统计学意义的1∶0、1∶1、1∶50分组作为实验对象,根据MTT实验结果选择具有统计学意义的18h作为实验对象,实时定量PCR检测不同组间MSCs的Bax和MCL-1基因表达量。结果:实时定量PCR检测1∶0、1∶1、1∶50各组间MSCs的Bax和MCL-1基因表达量,1∶50实验组Bax和MCL-1表达量较1∶0和1∶1实验组明显升高(P<0.05),且以Bax升高为主。结论:高浓度的中性粒细胞上清液使MSCs的Bax和MCL-1基因表达量升高,且以凋亡基因Bax升高为主。

关键词：干细胞脐血中性粒细胞上清液 Bax MCL-1

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人脐带间充质干细胞在小鼠体内的迁移变化及宿主的免疫反应

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郑州大学学报（医学版） 2010年第1期45卷 33-36页

作者：梁璐陈小军吴昊董春兰薛峰刘蒙韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所国家实验血液学重点实验室天津300020

目的:观察人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)在小鼠体内的迁移变化以及宿主的免疫反应。方法:45只BALB/c小鼠分为模型组、移植组和对照组,各15只。模型组和移植组小鼠建立肠炎模型;移植组和对照组小鼠每只移植入1×106个DiI标记的hUC-MS... 详细信息

目的:观察人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)在小鼠体内的迁移变化以及宿主的免疫反应。方法:45只BALB/c小鼠分为模型组、移植组和对照组,各15只。模型组和移植组小鼠建立肠炎模型;移植组和对照组小鼠每只移植入1×106个DiI标记的hUC-MSC。运用活体成像技术观察hUC-MSC在小鼠体内的存活和迁移情况;移植第5天,荧光显微镜观察hUC-MSC在移植组和对照组小鼠结肠中的分布;第20天应用流式细胞术检测各组小鼠体内T细胞亚群的变化。结果:hUC-MSC细胞移植后,最先迁移到小鼠的肺部。其在移植组小鼠体内大部分聚集在腹部,逐渐到达有炎症的肠道,第7天时聚集的细胞最多;在对照组小鼠体内散在分布。移植第5天移植组小鼠结肠组织中可见到hUC-MSC细胞。对照组、模型组和移植组小鼠CD3+CD4+T细胞的百分数为(36.01±5.25)%、(48.39±10.15)%和(35.50±0.98)%,CD3+CD8+T细胞的百分数为(16.89±3.48)%、(10.76±4.23)%和(13.10±3.29)%,CD4+CD8+T细胞的百分数为(2.15±0.17)%、(4.69±2.22)%和(2.83±0.73)%,3组间比较,差异均有统计学意义(F=31.726、25.124和83.234,P均<0.05),模型组CD3+CD4+及CD4+CD8+T细胞比例高于对照组(P<0.05),移植组与对照组的T细胞亚群数量相近(P>0.05)。结论:hUC-MSC可迅速迁移到炎症组织并诱导宿主免疫耐受,将成为细胞治疗的重要来源。

关键词：脐带间充质干细胞免疫耐受异种移植小鼠

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脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞增殖及白细胞介素-6分泌的影响

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实用医学杂志 2010年第4期26卷 555-557页

作者：郑丽坤张磊卢士红赵辉吴寿岭陈乃耀华北煤炭医学院附属开滦医院血液科唐山市063000 华北煤炭医学院附属开滦医院骨科唐山市063000 华北煤炭医学院附属开滦医院心内科唐山市063000 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所华北煤炭医学院附属医院天津市300020 中国医学科学院中国协和医科大学血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 天津大学化工学院生物制药实验室 300000

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)增殖、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中培养为实验组,UC-MSCs和中... 详细信息

目的:探讨脐血中性粒细胞上清液对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)增殖、白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响。方法:分离脐血中性粒细胞,UC-MSCs在不同浓度的中性粒细胞上清液中培养为实验组,UC-MSCs和中性粒细胞的比例分别为1∶1、1∶10、1∶50、1∶100,UC-MSCs单独培养为对照组(1∶0)。在分别培养18h和40h后,用MTT法检测各组增殖,评价不同组间的增殖情况,用ELISA方法检测不同组间培养上清IL-6水平。结果:1∶50和1∶100组UC-MSCs生长受到抑制(P<0.05),18h和40h差异无显著性(P>0.05)。1∶50实验组中,IL-6的分泌水平低于1∶0和1∶1实验组(P<0.05)。结论:高浓度的脐血中性粒细胞上清液抑制UC-MSCs的增殖。高浓度的脐血中性粒细胞的上清液抑制人UC-MSCs分泌IL-6。

关键词：间质干细胞脐带细胞增殖白细胞介素-6 中性粒细胞

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重组融合蛋白抗CD20Fab-LDM的构建、表达及体外活性研究

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中国药理学通报 2009年第12期25卷 1650-1654页

作者：程昕杨铭范冬梅许元富周圆高瀛岱王金宏周园李巍熊冬生中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的构建和表达抗CD20Fab-LDP(力达霉素辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM(力达霉素),并测定该融合蛋白的生物学活性。方法采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层... 详细信息

目的构建和表达抗CD20Fab-LDP(力达霉素辅基蛋白)融合蛋白,制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM(力达霉素),并测定该融合蛋白的生物学活性。方法采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并用双脱氧终止法测定DNA序列;采用亲和层析法纯化该产物,并用Western blot鉴定纯化产物;采用FACS方法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性;采用冷乙二醇法制备强化融合蛋白抗CD20Fab-LDM;采用MTT法鉴定抗CD20Fab-LDM对CD20+Raji细胞特异性的细胞毒作用。结果DNA序列测定结果表明抗CD20Fab-LDP融合蛋白已构建成功,可溶性表达产物的产量可达4mg.L-1以上,具有与Raji细胞(CD20+)结合的活性,与抗CD20Fab的亲合常数相当,抗CD20Fab-LDM体外能特异性杀伤Raji细胞,IC50值为0.9×10-10mol.L-1。结论成功地构建了抗CD20Fab-LDP融合蛋白,并获得可溶性高效表达,表达产物具有与相应靶抗原结合的活性,并成功制备了抗CD20Fab-LDM强化融合蛋白,体外能特异性杀伤CD20+的Raji细胞。

关键词： CD20 力达霉素基因工程抗体免疫治疗非霍奇金淋巴瘤生物毒素

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阿糖胞苷增强急性白血病细胞B7分子表达及激活T细胞的免疫反应

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白血病．淋巴瘤 2009年第11期18卷 650-653页

作者：赵英新王玫周征翟文静周圆韩明哲中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨阿糖胞苷（Ara-C）对急性白血病（AL）细胞B7分子表达和激活T细胞的免疫反应。方法用流式细胞术检测原代AL细胞B7分子的表达。同时检测Ara-C诱导HL-60细胞 B7分子的表达，进而用RT-PCR方法检测HL-60细胞B7 mRNA表达。MTT法检... 详细信息

目的探讨阿糖胞苷（Ara-C）对急性白血病（AL）细胞B7分子表达和激活T细胞的免疫反应。方法用流式细胞术检测原代AL细胞B7分子的表达。同时检测Ara-C诱导HL-60细胞 B7分子的表达，进而用RT-PCR方法检测HL-60细胞B7 mRNA表达。MTT法检测诱导后HL-60细胞对人外周血单个核细胞（PBMC）的促增生作用，并用RT-PCR法测定γ-干扰素（IFN-γ）含量。结果 40例AL患者中B7-1阳性1例，B7-2阳性3例、弱阳性4例。Ara-C能显著刺激HL-60细胞 B7表达，诱导后的HL-60细胞显著刺激PBMC增生并产生IFN-γ。结论原代AL细胞低表达B7-1和B7-2分子。在体外，Ara-C通过诱导HL-60细胞表达B7分子，刺激T淋巴细胞增生，使PBMC分泌IFN-γ增多，显著提高了白血病细胞的免疫原性。

关键词：白血病,急性阿糖胞苷共刺激分子免疫性

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脐带间充质干细胞对脐血CD34＋细胞体外扩增的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第14期13卷 2645-2650页

作者：袁晓莉孟恒星郝牧李长虹韩俊领邱录贵中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津市300020 河南省人民医院河南省郑州市450003 天津市脐血造血干细胞库天津市300020

背景:体外扩增是目前解决脐带血干细胞移植所面临的单份脐血造血干祖细胞数不足问题的主要手段。已有许多关于不同来源的间充质干细胞联合不同细胞因子支持脐血造血干祖细胞体外扩增的报道,而单独应用间充质干细胞对人脐血CD34+细胞体... 详细信息

背景:体外扩增是目前解决脐带血干细胞移植所面临的单份脐血造血干祖细胞数不足问题的主要手段。已有许多关于不同来源的间充质干细胞联合不同细胞因子支持脐血造血干祖细胞体外扩增的报道,而单独应用间充质干细胞对人脐血CD34+细胞体外扩增的报道仍很少。目的:观察应用脐带源间充质干细胞作基质层的体外培养体系对脐血CD34+细胞体外扩增的支持作用。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-03/2007-05在中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所、实验血液学国家重点实验室完成。材料:经产妇知情同意,采集健康足月分娩胎儿脐带9份。方法:应用贴壁培养的方法从正常足月出生儿脐带中分离培养间充质干细胞,通过细胞形态学、免疫表型、分化实验进行鉴定。利用免疫磁珠分离法从正常足月出生儿脐带血中分离CD34+细胞。应用3种不同培养体系进行脐血CD34+细胞的体外扩增:单独应用脐带源间充质干细胞作基质层、细胞因子培养体系和间充质干细胞联合细胞因子培养体系。主要观察指标:应用细胞计数法、集落培养计数法和流式细胞学检测法对扩增后细胞数量、集落形成能力和免疫表型进行分析比较。RT-PCR检测间充质干细胞中细胞因子的表达情况。结果:培养第14天后,间充质干细胞组的CD34+细胞比例明显高于细胞因子联合间充质干细胞组;CD34+细胞总数为培养前的(4.19±1.37)倍,明显高于细胞因子组。培养第7天和第14天,间充质干细胞组的CD34+CD38-细胞亚群比例均高于另两组。RT-PCR结果显示,脐带源间充质干细胞体外可表达干细胞因子和血小板生成素早期干细胞效应因子。结论:单独应用脐带源间充质干细胞可有效地对脐血CD34+细胞进行体外扩增,更有利于保持较早期干、祖细胞的扩增。

关键词：间充质干细胞脐带脐血 CD34+细胞体外扩增

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从四倍体到肿瘤

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医学综述 2009年第12期15卷 1802-1805页

作者：赵欣王建祥中国协和医科大学中国医学科学院血液学研究所血液学国家重点实验室

四倍体细胞可以导致异倍体及基因组不稳定性，这一观点最近被越来越广泛地接受。四倍体细胞有着不同于二倍体细胞的很多特点。本文就四倍体细胞的形成、生物学特点、其与凋亡的关系，四倍体细胞的致癌机制的最新进展予以综述。并提出了... 详细信息

四倍体细胞可以导致异倍体及基因组不稳定性，这一观点最近被越来越广泛地接受。四倍体细胞有着不同于二倍体细胞的很多特点。本文就四倍体细胞的形成、生物学特点、其与凋亡的关系，四倍体细胞的致癌机制的最新进展予以综述。并提出了一些关于四倍体研究存在的疑问和争论。

关键词：四倍体细胞肿瘤致癌机制

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以淋巴增殖性疾病为表现的套细胞淋巴瘤的临床与诊断分析

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临床血液学杂志 2009年第3期22卷 225-228页

作者：李增军吴瞳邱录贵李业楠中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:研究以慢性B淋巴细胞增殖性疾病(B-LPD)为表现的套细胞淋巴瘤(MCL)的临床特点与诊断。方法:对过去7年间以LPD为主要表现并可诊断为MCL的15例患者的临床特点和诊断进行回顾性分析。结果:①15例MCL中,依靠病理及CyclinD1诊断6例,依... 详细信息

目的:研究以慢性B淋巴细胞增殖性疾病(B-LPD)为表现的套细胞淋巴瘤(MCL)的临床特点与诊断。方法:对过去7年间以LPD为主要表现并可诊断为MCL的15例患者的临床特点和诊断进行回顾性分析。结果:①15例MCL中,依靠病理及CyclinD1诊断6例,依靠典型的免疫表型特征诊断9例;②部分以LPD表现的MCL患者临床表现、瘤细胞形态与慢性淋巴细胞白血病(CLL)难以区别,而免疫表型分析不符合CLL特点;③淋巴结或脾脏病理检查结合免疫组织化学是诊断MCL的主要依据,典型的免疫表型对MCL的诊断价值值得探讨。结论:部分MCL患者以广泛侵犯骨髓的LPD发病,对不典型LPD应进行病理检查明确诊断,而不能按CLL处理,以免贻误治疗。

关键词：套细胞淋巴瘤淋巴细胞增殖性疾病诊断

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