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Bcr3/abl2和VEGF基因反义寡核苷酸联用增强对K562细胞的生长抑制作用

中国生物工程杂志 2005年第5期25卷 41-44,49页

作者：丛秀丽杨晨冯四洲李彬杨仁池韩忠朝中国协和医科大学/中国医学科学院血液学研究所血液病医院国家重点实验室天津300020

目的:研究BCR ABL和VEGF反义寡核苷酸联用对K5 62细胞株的作用及其相互作用的影响。方法:设计针对bcr3/abl2和VEGF的反义寡核苷酸(AS ODNs) ,应用脂质体Oligofectamine作为转染载体。在转染后72h进行台盼蓝染色细胞计数;建立裸鼠K5 62... 详细信息

目的:研究BCR ABL和VEGF反义寡核苷酸联用对K5 62细胞株的作用及其相互作用的影响。方法:设计针对bcr3/abl2和VEGF的反义寡核苷酸(AS ODNs) ,应用脂质体Oligofectamine作为转染载体。在转染后72h进行台盼蓝染色细胞计数;建立裸鼠K5 62移植瘤动物模型,瘤内注射AS ODNs,观察肿瘤体积生长变化,组织学检测肿瘤血管密度和肿瘤细胞凋亡情况。结果:转染后72h ,各实验组与空白组相比,细胞增殖抑制率分别为1 3 .47% (ASO B3/A2组) ,1 2 . 79%(ASO VEGF组)和41 . 5 5 % (半量联合治疗组)。经过4次治疗后,与对照组相比,肿瘤生长抑制率分别为2 3 .1 8% (ASO B3/A2组) ,1 7. 2 8% (ASO VEGF组)和5 7 .83% (半量联合治疗组)。联合治疗组肿瘤生长速率显著低于单一治疗组,伴随明显的肿瘤细胞凋亡增加和肿瘤血管密度减少。结论:双基因反义寡核苷酸联合应用协同抑制K5 62细胞增殖,抗肿瘤作用明显优于单一治疗组,可为CML基因治疗提供一项新策略。

关键词：白血病血管内皮生长因子 bcr3/abl2融合基因反义寡核苷酸 K562细胞肿瘤细胞生长抑制作用基因治疗

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在血清饥饿条件下CHP2调节NHE1活性减少细胞死亡

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细胞生物学杂志 2005年第5期27卷 573-577页

作者：李庆华庞天翔袁文肃韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室协和干细胞基因工程有限公司天津300020

钠氢离子交换蛋白(NHE)是维持细胞内pH值等内环境稳定的重要蛋白;钙调磷酸酶B同源蛋白(CHP)是NHE的一个活性调节亚单位。研究CHP2对NHE1的调节作用时发现,在血清饥饿的条件下,PS120细胞依赖于CHP2的表达来调节外源性NHE1的活性,使细胞... 详细信息

钠氢离子交换蛋白(NHE)是维持细胞内pH值等内环境稳定的重要蛋白;钙调磷酸酶B同源蛋白(CHP)是NHE的一个活性调节亚单位。研究CHP2对NHE1的调节作用时发现,在血清饥饿的条件下,PS120细胞依赖于CHP2的表达来调节外源性NHE1的活性,使细胞维持必要的钠氢交换生理活性和较高水平的细胞内pH值(pHi7.4),明显减少细胞因自身的胞浆酸性化而死亡,延长细胞存活时间(70%以上的细胞存活时间超过7天)。实验结果提示,通过研究减少CHP2表达或抑制其活性,可望找到加速细胞死亡的新方法。

关键词：血清饥饿条件蛋白活性细胞死亡钠氢离子交换蛋白钙调磷酸酶B同源蛋白2

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核因子-κB与炎症和肿瘤

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白血病．淋巴瘤 2005年第5期14卷 290-295页

作者：郑国光中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

核因子-κB(NF-κB)是一类近年颇受关注的细胞核转录调节因子,通过调节众多基因的转录参与多种生理、病理过程的调节。目前已至少阐明三条NF-κB信号途径,其核心均为NF-κB二聚体从抑制性分子中的释放,而且二聚体特异位点磷酸化后,才具... 详细信息

核因子-κB(NF-κB)是一类近年颇受关注的细胞核转录调节因子,通过调节众多基因的转录参与多种生理、病理过程的调节。目前已至少阐明三条NF-κB信号途径,其核心均为NF-κB二聚体从抑制性分子中的释放,而且二聚体特异位点磷酸化后,才具转录调节活性。NF-κB通过调节免疫调节因子在机体免疫中起重要作用,并通过调节炎症相关因子参与炎症反应;NF-κB可促进细胞的增生,降低凋亡,促进血管新生和肿瘤细胞的转移能力,在肿瘤的发生、发展中起重要作用,并成为连接慢性炎症和肿瘤发生的重要分子。

关键词：核因子-κB 免疫炎症肿瘤

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缺氧诱导因子-1与细胞凋亡

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国外医学（生理病理科学与临床分册） 2005年第1期25卷 52-55页

作者：王晗韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

缺氧诱导因子 1(HIF -1)是一种主要由缺氧诱导细胞产生的重要的转录因子。HIF- 1的表达水平与糖酵解、细胞周期阻滞、细胞生存与增殖、血管新生、血管舒缩、红细胞生成、肿瘤生长,转移以及肿瘤多药耐药等许多生命活动密切相关。HIF- 1... 详细信息

缺氧诱导因子 1(HIF -1)是一种主要由缺氧诱导细胞产生的重要的转录因子。HIF- 1的表达水平与糖酵解、细胞周期阻滞、细胞生存与增殖、血管新生、血管舒缩、红细胞生成、肿瘤生长,转移以及肿瘤多药耐药等许多生命活动密切相关。HIF- 1通过调控凋亡相关基因的转录在促细胞凋亡和抗细胞凋亡中都发挥着重要的作用。

关键词：缺氧诱导因子-1 细胞凋亡促细胞凋亡抗细胞凋亡

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白血病患者P2X7受体的功能性表达分析

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白血病．淋巴瘤 2005年第6期14卷 348-350,357页

作者：郑国光张秀军林永敏吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究P2X7受体在白血病患者中的功能性表达及与白血病治疗的关系。方法采用半定量RT-PCR、流式细胞术和细胞内钙离子测定的方法,从核酸、蛋白和功能水平研究白血病患者骨髓单个核细胞(BMMC)P2X7受体的表达和功能。结果白血病患者和... 详细信息

目的研究P2X7受体在白血病患者中的功能性表达及与白血病治疗的关系。方法采用半定量RT-PCR、流式细胞术和细胞内钙离子测定的方法,从核酸、蛋白和功能水平研究白血病患者骨髓单个核细胞(BMMC)P2X7受体的表达和功能。结果白血病患者和正常人标本中可检出P2X7受体的表达,核酸、蛋白和功能水平结果一致。AML、ALL、CML患者P2X7受体表达阳性率高于正常人;但AML各亚型中P2X7受体阳性强度存在差异,M2组低于正常人,M5,M6组高于正常人;按照P2X7受体阳性强度分组,P2X7受体高表达患者诱导治疗后的完全缓解率显著低于P2X7受体阴性和P2X7受体低表达患者。结论P2X7受体在白血病患者BMMC中有功能性表达,其高表达与患者治疗不敏感相关。

关键词： P2X7受体表达白血病治疗

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成体脑中神经发生障碍与干细胞治疗

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国外医学（生理病理科学与临床分册） 2005年第2期25卷 105-107页

作者：汤锋武韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

神经发生是脊椎动物正常的中枢神经系统所具有的内在的生物学特性。老年化将使脑组织逐渐丧失正常神经发生的环境,从而使脑组织支持神经祖细胞生长和分化的能力下降,并阻碍神经发生。以APP的过度表达和PS 1的变异导致的神经发生障碍为... 详细信息

神经发生是脊椎动物正常的中枢神经系统所具有的内在的生物学特性。老年化将使脑组织逐渐丧失正常神经发生的环境,从而使脑组织支持神经祖细胞生长和分化的能力下降,并阻碍神经发生。以APP的过度表达和PS 1的变异导致的神经发生障碍为主要特征的早老性痴呆(AD)病是老年痴呆中最常见的类型之一。在成体脑中移植的神经干细胞能分化为区域特化的神经元,并产生成熟神经元的生理特征,这使干细胞移植成为治疗神经发生障碍的新途径。

关键词：神经发生影响因素干细胞治疗

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PI3-K-AKT信号转导途径与凋亡的关系

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国际病理科学与临床杂志 2005年第4期25卷 307-310页

作者：林跃辉王敏中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

PI3-K(phosphatidylinositol3-kinase,磷脂酰肌醇3-激酶)-AKT(v-aktmurinethymomaviraloncogenehomo-log)信号转导途径是细胞内重要的信号转导通路,在细胞的凋亡、存活、增殖以及细胞骨架的变化等活动中发挥重要的生物学功能,其中尤为重要的是它对细胞凋亡、存活的调节作用。细胞凋亡是一个瀑布式的基因表达结果,在其发生与调控过程中有许多基因产物的参与,PI3-K-AKT信号转导途径通过对这些凋亡相关基因的调节作用在凋亡的发生与调控过程中发挥重要的生物学功能。

关键词： PI3-K Akt 凋亡信号转导

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人促血液血管细胞生成素的高效表达和快速纯化

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实用心脑肺血管病杂志 2005年第6期13卷 321-325页

作者：任倩刘拥军徐斌韩之波卢士红马凤霞韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的构建人促血液血管细胞生成素(HAPO)的表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并研究其生物学功能。方法通过PCR方法扩增人HAPO基因,克隆于不同的原核表达载体,ITPG诱导融合蛋白表达。NTA层析柱纯化融合蛋白,再经肠激酶裂解融合蛋白,阳离子交... 详细信息

目的构建人促血液血管细胞生成素(HAPO)的表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并研究其生物学功能。方法通过PCR方法扩增人HAPO基因,克隆于不同的原核表达载体,ITPG诱导融合蛋白表达。NTA层析柱纯化融合蛋白,再经肠激酶裂解融合蛋白,阳离子交换层析纯化,得到纯化的重组蛋白。用培养的MO7e和ECV-304细胞检测蛋白活性。结果HAPO可在pET32C中,获得稳定高效的可溶性表达。在E coli BL21(DE3)中,HAPO表达量可占菌体总蛋白的10%左右。重组蛋白80%是以可溶性蛋白形式存在。NTA层析柱纯化得到的HAPO融合蛋白,再经肠激酶裂解,阳离子交换层析纯化,得到90%以上纯度的重组HAPO蛋白,并且具有良好的生物学活性。结论得到具有90%以上纯度的重组HAPO蛋白,而且,对MO7e和ECV-304细胞具有促增殖的作用。我们获得了纯化的人重组HAPO蛋白,为进一步研究其功能及临床应用打下基础。

关键词：人促血液血管细胞生成素 pET32C 融合蛋白纯化层析纯化细胞生成素高效表达 ECV-304细胞血管血液

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EDAG在白血病细胞系K562中的细胞内自激因子作用

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白血病．淋巴瘤 2005年第4期14卷 197-200页

作者：安莉莉吴克复马小彤林永敏郑国光中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的为肿瘤细胞自律性生长的细胞内自激因子假设提供实验证据。方法将新发现的造血相关核蛋白EDAG基因转染人白血病细胞系K562,比较过表达EDAG对K562细胞的增生能力,以及对细胞的造血调控、凋亡及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果在无... 详细信息

目的为肿瘤细胞自律性生长的细胞内自激因子假设提供实验证据。方法将新发现的造血相关核蛋白EDAG基因转染人白血病细胞系K562,比较过表达EDAG对K562细胞的增生能力,以及对细胞的造血调控、凋亡及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果在无血清培养条件下,过表达EDAG的K562细胞的增生能力明显高于两组对照细胞,并且有c蛳myb和bcl蛳2mRNA表达的显著上调。结论过表达的EDAG可以起细胞内自激因子作用。为核蛋白异常表达可以起细胞内自激因子作用提供了实验证据。

关键词：自律性生长细胞内自激因子核蛋白 EDAG 白血病细胞系

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M-CSF可溶性受体在烟草中的表达及其抗M-CSF作用研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2005年第4期12卷 275-279页

作者：郑国光杨应华饶青林永敏吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的：在烟草中高效表达人M-CSF可溶性受体并研究其抗M-CSF活性。方法：采用基因重组技术构建表达C端含组氨酸标签和内质网滞留信号的M-CSF可溶性受体植物表达载体,通过根瘤土壤杆菌转化烟草,获得转基因植株。PCR、蛋白印迹实验鉴定转... 详细信息

目的：在烟草中高效表达人M-CSF可溶性受体并研究其抗M-CSF活性。方法：采用基因重组技术构建表达C端含组氨酸标签和内质网滞留信号的M-CSF可溶性受体植物表达载体,通过根瘤土壤杆菌转化烟草,获得转基因植株。PCR、蛋白印迹实验鉴定转基因植株,ELISA方法测定重组蛋白表达水平,集落形成实验测定重组蛋白活性。结果：获得50余株转基因烟草植株,PCR证实目的基因已整合到烟草基因组中,蛋白印迹实验证实转基因植株表达目的蛋白；M-CSFsR在烟草中获得高效表达,但不同转基因植株的表达水平存在差异,其中表达水平最高的一株M-CSFsR占叶片可溶性蛋白的1．92％；集落形成实验证明M-CSFsR可以抑制J6-1细胞的集落形成。结论：在烟草中高效表达有生物学活性的重组人M-CSFsR。

关键词：巨噬细胞集落刺激因子受体可溶性受体烟草表达生物活性

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