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第十一届全国血栓与止血学术会议暨血栓栓塞性疾病（血栓与止血）基础与临床研究进展学习班

作者：韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室国家干细胞工程技术研究中心

早在一个世纪前就有人提出造血细胞和血管细胞可能有一个共同的干细胞—血液血管干细胞 (hemangioblaSt)。血液血管干细胞可以发育分化成造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)和血管干细胞 (angioblast),后二者进一步分化增殖形成... 详细信息

早在一个世纪前就有人提出造血细胞和血管细胞可能有一个共同的干细胞—血液血管干细胞 (hemangioblaSt)。血液血管干细胞可以发育分化成造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)和血管干细胞 (angioblast),后二者进一步分化增殖形成血细胞和血管两大系统。但直到近几年,才有实验研究证实了血液

关键词： HSC 促血管新生缺血性疾病

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EKI-785对U937细胞系的生长调节作用

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中华肿瘤杂志 2006年第11期28卷 810-814页

作者：袁向飞卢士红冯义刘娜宋忻陆敏中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨erbB家族受体在急性单核细胞白血病细胞系U937中的表达及其对细胞生长的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测erbB家族成员在U937细胞中的表达情况,Western blot检测erbB2在蛋白水平的表达。以erbB受体抑制剂EKI-785... 详细信息

目的探讨erbB家族受体在急性单核细胞白血病细胞系U937中的表达及其对细胞生长的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测erbB家族成员在U937细胞中的表达情况,Western blot检测erbB2在蛋白水平的表达。以erbB受体抑制剂EKI-785处理细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验并绘制细胞生长曲线,观察细胞的生长变化情况；应用Annexin V/PI双染和流式细胞仪计数,观察细胞是否发生凋亡；Western blot检测细胞增殖生长信号的变化。结果在U937细胞中,除了erbB1外,其他erbB受体均有表达,且erbB2有蛋白水平的表达。经过1、2、4和8μmoL/L EKI-785处理48h后,U937细胞的生长受到不同程度的抑制,抑制率分别为(10．49±3．69)%、(13．79±2．13)%、(31．42±3．90)%和(44．05±1．56)%,并呈现出比较明显的浓度依赖关系。EKI-785诱导U937细胞发生了早期凋亡,4μmol/L EKI-785处理U937细胞48和72h,Annexin- V^+/PI^-标记的早期凋亡细胞所占的比例分别为相应对照组的2．03倍和6．64倍。经4μmol/L EKI- 785作用24、48、72h后,磷酸化的MEK和Akt蛋白水平随着时间延长不断下降,72h时磷酸化的MEK和Akt几乎消失。结论erbB家族受体很可能在某些类型的白血病发生中发挥重要作用,有望成为这些白血病的新治疗靶点,EKI-785具有治疗白血病的应用前景。

关键词： erbB EKI-785 U937细胞系白血病

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GSTT1及GSTM1与急性髓系白血病疗效及预后的研究

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中华内科杂志 2006年第3期45卷 213-216页

作者：张悦杨琳李睿张莉张美荣肖志坚中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的探讨谷胱甘肽硫转移酶（GSTs）家族中GSTr1和GSTM1基因多态性与急性髓系白血病（AML）疗效，药物不良反应与预后的关系。方法AML患者180例，用多重PCR方法检测GSTr1和GSTM1基因型，比较不同基因型患者的诱导治疗完全缓解（CR）率，... 详细信息

目的探讨谷胱甘肽硫转移酶（GSTs）家族中GSTr1和GSTM1基因多态性与急性髓系白血病（AML）疗效，药物不良反应与预后的关系。方法AML患者180例，用多重PCR方法检测GSTr1和GSTM1基因型，比较不同基因型患者的诱导治疗完全缓解（CR）率，药物不良反应发生率，总体生存期，无复发生存期和复发率。结果（1）GSTr1和GSTM1基因双非缺失型（double—present型）患者一疗程CR率高于GSTr1，GSTM1任一基因缺失型（null型），二者差异有统计学意义（P=0．013）。GSTT1／GSTM1的nuH基因型患者发生不CR的危险度是double—present型患者的8．736倍（95％CI 1．146～66．574）。GSTT1 present型一疗程CR率高于GSTT1 null型，二者比较亦有统计学意义（P=0．021，OR=2．572，95％CI 1．136～5．826）；（2）GSTT1和GSTM1基因型分布与诱导治疗后中性粒细胞〈0．5×10^9／L及PLT〈20×10^9／L持续时间差异无统计学意义，GSTM1 null型患者发生AST异常的危险度是GSTM1 present型的2．593倍（P=0．016，95％CI 1．176～5．717）；（3）double—present型总体和无复发生存期较GSTT1／GSTM1的null型患者长（平均总体生存期为68．4、38．5个月，P=0．028；平均无复发生存期为73．5、34．9个月，P=0．014），GSTT1 null型患者无复发生存期短于GSTT1 present型患者（平均无复发生存期为26．7、64．3个月，P=0．038），但二者总体生存期无统计学意义（P=0．653）。double—present型患者复发率显著低于GSTT1／GSTM1的null型患者（13．3％、35．6％，P=0．019）。结论GSTT1，GSTMl基因型与AML患者治疗CR率、复发率、化疗的不良反应及预后均有显著相关性，GSTT1和GSTMl基因型有助于指导AML患者个体化治疗方案的制定。

关键词：白血病谷胱甘肽硫转移酶药物毒性

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慢性特发性血小板减少性紫癜患者Ⅰ类和Ⅱ类T细胞特点的研究

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中华医学杂志 2006年第10期86卷 669-673页

作者：王婷婷赵辉任贺郭建海徐茂强杨仁池韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者Ⅰ类和Ⅱ类T细胞的特点。方法采取30例慢性ITP患者外周血及8例慢性ITP患者和6例遗传性球形红细胞增多症患者的脾细胞(接受脾切除的患者),应用流式细胞仪技术检测辅助T细胞(Th)CD4+和细胞毒... 详细信息

目的探讨慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者Ⅰ类和Ⅱ类T细胞的特点。方法采取30例慢性ITP患者外周血及8例慢性ITP患者和6例遗传性球形红细胞增多症患者的脾细胞(接受脾切除的患者),应用流式细胞仪技术检测辅助T细胞(Th)CD4+和细胞毒性T细胞(Tc)CD8+胞质内细胞因子干扰素γ(IFNγ)/白细胞介素(IL)4的比例;应用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测Tbet和GATA3mRNA的表达水平。结果疾病活动期患者外周血Th1/Th2和Tc1/Tc2的比例(25.62和30.23)显著高于正常对照组(8.29和12.58,均P<0.01);缓解期患者外周血Th1/Th2和Tc1/Tc2的比例(9.86和10.10)与正常对照组相比,差异无统计学意义。ITP患者脾细胞Th1/Th2的比例(41.46)显著高于对照组(16.30,P<0.01);Tc1/Tc2的比例(35.80)高于对照组(16.88),但差异无统计学意义。疾病活动期患者外周血以及ITP患者脾细胞GATA3mRNA水平明显低于对照组(是对照组的0.20和0.34倍,均P<0.05),缓解期患者与对照组相比,差异无统计学意义(是对照组的0.97倍)。ITP患者外周血及脾细胞TbetmRNA的表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(是对照组的1.17和1.04倍)。结论ITP是Ⅰ类T细胞占优势的自身免疫性疾病。促进Ⅰ类T细胞模式向Ⅱ类T细胞转化可能为ITP患者提供一种潜在的免疫治疗方式。

关键词：紫癜血小板减少性特发性 T淋巴细胞干扰素Ⅱ型

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四例t(1;3)(p36;q21)骨髓增生异常综合征的临床和实验室研究

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中华血液学杂志 2006年第2期27卷 99-102页

作者：张美荣刘旭平张悦杨琳周学慧郝玉书肖志坚中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究t(1;3)(p36;q21)骨髓增生异常综合征(MDS)患者的临床特征和受累基因的表达。方法报告4例t(1;3)(p36;q21)MDS患者。用半定量RT-PCR方法检测正常胎儿组织、2 名健康正常人和3例t(1;3)(p36;q21)MDS患者骨髓细胞MEL1(MDS1／EVI1-lik... 详细信息

目的研究t(1;3)(p36;q21)骨髓增生异常综合征(MDS)患者的临床特征和受累基因的表达。方法报告4例t(1;3)(p36;q21)MDS患者。用半定量RT-PCR方法检测正常胎儿组织、2 名健康正常人和3例t(1;3)(p36;q21)MDS患者骨髓细胞MEL1(MDS1／EVI1-like gene)基因两种转录形式(全长的MEL1和短型MEL1s)的表达水平。结果t(1;3)(p36;q21)MDS患者临床表现主要以乏力等贫血症状为主,为大细胞性贫血,白细胞计数正常,血小板计数正常或增高,骨髓细胞形态有粒系、红系和巨核细胞系三系发育异常改变,以巨核细胞发育异常表现为主,患者预后差。正常人骨髓细胞和正常胎儿组织主要表达全长的MEL1,而t(1;3)(p36;q21)MDS患者骨髓以MEL1s表达为主,或仅表达MEL1s。结论t(1;3)(p36;q21)MDS可能为一个独立临床病理遗传学病种,MEL1s的过表达在其发病机制中起重要作用。

关键词：骨髓增生异常综合征易位(遗传学) 基因,MELls 基因,MEL1

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慢性粒细胞白血病急变伴t(3;21)(q26;q22)染色体易位受累基因的研究

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中华血液学杂志 2006年第5期27卷 310-313页

作者：刘旭平张美荣代芸张莉李睿郝玉书肖志坚中国医学科学院天津300020 中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)急性髓系白血病(AML)变伴 t(3;21)(q26;q22)的受累基因。方法对1例 CML AML 变伴 t(3;21)(q26;q22)患者细胞间期和中期分裂相细胞采用荧光原位杂交技术(FISH)检测 AML1和 bcr/abl 基因重排,RT-PCR 联合序... 详细信息

目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)急性髓系白血病(AML)变伴 t(3;21)(q26;q22)的受累基因。方法对1例 CML AML 变伴 t(3;21)(q26;q22)患者细胞间期和中期分裂相细胞采用荧光原位杂交技术(FISH)检测 AML1和 bcr/abl 基因重排,RT-PCR 联合序列分析检测 t(3;21)(q26;q22)受累基因。结果 der(3)和 der(21)染色体上均检测到 AML1基因杂交信号,AML1-MDS1-Evil、AML1-MDS1、AML1-EAP 及 Evi1基因均表达,未见 AML1-Evi1融合基因表达,AML1-MDS1-Evi1基因表达水平是 AML1-MDS1、AML1-EAP 表达水平的1.58和1.54倍,患者 Evi1基因表达水平是 HEL 细胞系 Evi1表达水平的2.71倍。结论 t(3;21)(q26;q22)导致形成 AML1-MDS1-Evi1、AML1-MDS1融合基因及 Evi1基因激活,这些继发的分子遗传学异常是 CML 急性变伴 t(3;21)(q26;q22)患者急变发生的分子基础。

关键词：白血病,髓样,慢性急变期染色体易位基因,AML1 基因,Evi1

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钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用

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中国医学科学院学报 2006年第2期28卷 164-168页

作者：程燕红齐静熊冬生刘杰文齐淑玲潘兵杨纯正朱惠芳中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用。方法采用四唑盐(MTT)比色法测定药物敏感性,分析联合应用低剂量EBB(≤IC20)时阿霉素(ADR)对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50)值及... 详细信息

目的研究钙调素拮抗剂O-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)对乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR的耐药逆转作用。方法采用四唑盐(MTT)比色法测定药物敏感性,分析联合应用低剂量EBB(≤IC20)时阿霉素(ADR)对MCF-7/ADR细胞的半数抑制浓度(IC50)值及其增敏倍数;应用流式细胞术测定EBB对细胞周期的影响,同时观察细胞内药物浓度的积累;采用逆转录—多聚酶链反应检测EBB对多药耐药基因-1(mdr1)及拓扑异构酶Ⅱb(topⅡb)mRNA表达水平的影响。结果EBB对MCF-7/ADR的多药耐药具有明显逆转作用,3、7·5μmol/L浓度的EBB可以明显提高MCF-7/ADR对ADR的敏感性,平均增敏倍数分别为50·40、89·80倍,逆转强度明显高于阳性逆转剂维拉帕米(VPL)的14·88倍(P=0·0097)。6μmol/L的EBB处理2h后,细胞内积累的P糖蛋白底物罗丹明123(Rh123)荧光强度峰值发生明显右移;同时EBB可明显增强ADR对MCF-7/ADR细胞在G2/M期的阻滞作用。6和12μmol/L的EBB处理MCF-7/ADR细胞48h后,mdr1的mRNA表达水平有一定的降低趋势,但无统计学差异;topⅡb基因表达差异亦无显著性。结论EBB对MCF-7/ADR细胞具有较强的逆转多药耐药作用,其可能的逆转机制在于增强ADR对耐药细胞在G2/M期的阻滞以及抑制P糖蛋白外排泵作用。

关键词：钙调素拮抗剂 O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺多药耐药逆转

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急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征患者NPM基因突变的研究

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中华血液学杂志 2006年第7期27卷 470-473页

作者：张悦张美荣杨琳肖志坚天津中国医学科学院 300020 中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的探讨染色体核型正常的急性髓系白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)患者 NPM 基因突变。方法染色体核型正常的 AML 患者40例(初治28例,首次完全缓解期12例),MDS 患者33例,用基因组 DNA PCR 法扩增 NPM 基因第12外显子,PCR 产物纯... 详细信息

目的探讨染色体核型正常的急性髓系白血病(AML)和骨髓增生异常综合征(MDS)患者 NPM 基因突变。方法染色体核型正常的 AML 患者40例(初治28例,首次完全缓解期12例),MDS 患者33例,用基因组 DNA PCR 法扩增 NPM 基因第12外显子,PCR 产物纯化后直接测序,发现突变患者,将 PCR 产物克隆至 pUCm-T 载体,转化大肠杆菌 DH5α,至少挑选5个以上重组克隆,小量制备质粒后进行测序。结果共发现 NPM 突变患者6例(AML 4例,MDS 2例),A 型突变4例,B 型突变1例,新发现突变1例(命名为 R 型)。结论新发现了一个 NPM 突变类型,并在国内外首次证实MDS 患者也存在 NPM 基因突变,为进一步研究 NPM 突变与 AML 及 MDS 发生的关系提供了重要线索。

关键词：白血病非淋巴细胞急性骨髓增生异常综合征基因 NPM DNA突变分析

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苯丁酸钠通过上调p21WAF1/CIP1基因抑制白血病细胞系的细胞周期

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中华血液学杂志 2006年第5期27卷 294-297页

作者：魏辉刘向荣林冬饶青林跃辉王敏王建祥中国医学科学院天津300020 中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂苯丁酸钠(PB)对白血病细胞系细胞周期的影响,探讨其分子机制。方法 PB 处理白血病细胞系 Kasumi-1、U937和 NB4细胞,分别于处理后24,48和72h 收集细胞。碘化丙锭 DNA 染色,流式细胞术分析细胞周期... 详细信息

目的研究组蛋白脱乙酰化酶(HDAC)抑制剂苯丁酸钠(PB)对白血病细胞系细胞周期的影响,探讨其分子机制。方法 PB 处理白血病细胞系 Kasumi-1、U937和 NB4细胞,分别于处理后24,48和72h 收集细胞。碘化丙锭 DNA 染色,流式细胞术分析细胞周期的变化。半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析细胞周期相关基因 p21WAF1/CIP1表达的变化。在人肾上皮细胞系293T 细胞用荧光素酶报告基因分析 PB 对 p21WAF1/CIP1基因启动子活性的影响。结果 PB 可以抑制 Kasu-mi-1、U937和 NB4细胞的细胞周期,作用呈时间和剂量依赖关系。3 mmol/L PB 作用72 h,分别使 Ka-sumi-1、U937和 NB4细胞的 G_0/G_1期细胞比例增加42.03%、44.36%和26.82%,S 期细胞比例减少31.86%、38.91%和26.77%。PB 使 Kasumi-1、U937和 NB4细胞 p21WAF1/CIP1表达增高。PB 处理后,p21WAF1/CIP1的表达水平较处理前增高(2.06±0.27),(2.78±0.40)和(1.78±0.20)倍。PB 可以上调 p21 WAF1/CIP1启动子的转录活性,且呈剂量依赖关系。3 mmol/L PB 处理48 h 使转录活性增高(5.74±0.93)倍。PB 上调 p21WAF1/CIP1启动子转录活性主要是依赖于转录起始位点上游101 bp的序列。结论 PB 可以抑制白血病细胞系的细胞周期,这种作用可能是通过上调细胞周期相关基因p21 WAF1/CIP1的表达实现的。

关键词：白血病,急性抑制剂,组蛋白脱乙酰基酶基因,p21WAF1/CIP1

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噬菌体展示抗体微型文库的构建

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生物医学工程学杂志 2006年第6期23卷 1320-1324页

作者：黄跃龙李侠许静刘俊霞宋增璇卢光琇中南大学生殖与干细胞工程研究所中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因c... 详细信息

用噬菌体展示技术构建抗神经钙粘连素(N-cadherin,N-cad)分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体展示单链抗体库。将3种分子分别表达于噬菌体表面,再以此噬菌体免疫BALB/c小鼠,提取脾总RNA,RT-PCR扩增抗体重、轻链基因cDNA并插入噬菌体表达载体,构建分别抗N-cad分子胞外结构域、CD34分子胞外结构域及AC133分子的噬菌体表达文库。然后对文库的库容量、多样性、滴度及表达能力进行鉴定。结果显示,用噬菌体展示的3种分子免疫小鼠获得成功,所构建抗体文库的库容量、多样性、滴度及表达能力均能满足进一步筛选目的抗体基因的需要,为制备相应的特异性抗体奠定了基础。

关键词：神经钙粘连素 CD34 AC133噬菌体展示单链抗体

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