检索结果-内蒙古大学图书馆

生物物理学报 2004年第4期20卷 263-268页

作者：张秀军郑国光马小彤吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

采用半定量RT-PCR和流式细胞术,在基因和蛋白水平研究了白血病细胞系U937、HL60和Ramos细胞P2X7受体的表达。荧光染料Fura-2/AM负载后,用荧光分光光度计测定P2X7受体激动剂三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)和苯甲酰苯甲酸... 详细信息

采用半定量RT-PCR和流式细胞术,在基因和蛋白水平研究了白血病细胞系U937、HL60和Ramos细胞P2X7受体的表达。荧光染料Fura-2/AM负载后,用荧光分光光度计测定P2X7受体激动剂三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)和苯甲酰苯甲酸ATP(2',3'-O-(4-benzoyl)benzoyl-ATP,BzATP)刺激前后细胞内钙离子浓度的变化,以确认其功能。结果表明:U937和HL60细胞系表达P2X7受体的mRNA和蛋白,Ramos不表达;在激动剂的刺激下,可引发U937和HL60细胞胞内钙浓度的显著升高,但对Ramos没有作用。当去除胞外钙离子时,ATP和BzATP刺激均不能引起U937和HL60细胞胞内钙离子浓度的升高。提示U937和HL60细胞表达P2X7受体的基因和功能蛋白,Ramos细胞则不表达该受体。

关键词： P2X7 钙白血病细胞系离子通道受体

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不同来源的造血干/祖细胞表面归巢相关分子表达谱的比较研究

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中华血液学杂志 2004年第12期25卷 736-739页

作者：郑以州张莉王慧君韩忠朝高桥恒夫中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 东京大学医学科学研究所细胞制备研究室

目的　比较不同来源的造血干 /祖细胞表面归巢相关分子 (HRM)表达谱的差异性。方法　采用高度灵敏的四色流式细胞术检测脐血 (UCB)、动员后的外周血 (mPB)及骨髓 (BM)来源的造血干 /祖细胞表面系列HRM表达水平。结果　UCB、mPB及BM来源... 详细信息

目的　比较不同来源的造血干 /祖细胞表面归巢相关分子 (HRM)表达谱的差异性。方法　采用高度灵敏的四色流式细胞术检测脐血 (UCB)、动员后的外周血 (mPB)及骨髓 (BM)来源的造血干 /祖细胞表面系列HRM表达水平。结果　UCB、mPB及BM来源的CD34bright细胞均高度表达黏附分子CD4 4、CD11a、CD18、CD6 2L、CD31及CD4 9d ;但UCB来源的CD34bright细胞及CD34brightCD38-细胞黏附分子CD4 9e、CD4 9f、CD5 4及趋化因子受体CXCR 4的表达水平显著低于mPB及BM来源者 ;上述不同来源的造血干 /祖细胞均不表达其他趋化因子受体 ,包括CCR 1、CCR 2、CCR 3、CCR 5、CXCR 1、CX CR 2、CXCR 3及CXCR 5 ;更为有意义的是 ,只有mPB来源的CD34bright细胞表达基质金属蛋白酶MMP 2及MMP 9。CD34brightMMP 2 + 及CD34brightMMP 9+ 细胞百分率分别为 (11.4± 4 .9) %及 (2 7.6± 7.8) %。结论　UCB来源的造血干 /祖细胞低表达或不表达某些HRM ,这可能是UCB移植后造血重建延迟的原因之一。

关键词：造血干/祖细胞 CD34 归巢趋化因子受体来源 MMP-2 t细胞表达水平分子表达表达谱

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急性髓系白血病血管新生因子的表达及临床意义

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癌症 2004年第z1期23卷 1423-1427页

作者：王一肖志坚刘澎彭智韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

背景与目的:研究证实,VEGF和bFGF表达水平与多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病等疾病预后有关,本研究观察急性髓系白血病(AML)细胞血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体的表达谱系、VEGF和bFG... 详细信息

背景与目的:研究证实,VEGF和bFGF表达水平与多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病等疾病预后有关,本研究观察急性髓系白血病(AML)细胞血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及其受体的表达谱系、VEGF和bFGF的水平及与临床的关系。方法:RT-PCR方法检测VEGF、bFGF及其受体在转录水平的表达;ELISA检测血浆VEGF和bFGF水平,并分析其表达水平与临床的关系。结果:(1)107例初治AML患者VEGF、Flt和KDRmRNA阳性率分别56.1%、49.5%和2.8%;bFGF和其4个受体mRNA阳性率则分别为21.5%、35.5%、9.4%、35.5%和23.4%。(2)初治AML血浆VEGF水平为(154.75±109.98)pg/ml,明显高于健康对照组(99.91±41.87)pg/ml及AML-CR组(72.05±23.39)pg/ml(P<0.05);AML-CR组与正常对照组比无统计学差异(P>0.05)。初治AML患者血浆bFGF水平(10.00±6.70)pg/ml与正常对照(9.44±3.04)pg/ml及AML缓解患者(11.28±4.61)pg/ml比较无显著性差异(P>0.05)。2个疗程内获完全缓解患者血浆VEGF水平(124.05±76.57)pg/ml明显低于未获完全缓解者血浆VEGF水平(211.24±169.88)pg/ml(P<0.05)。用Kaplan-Meier生存分析可以评价生存期的86例初治AML患者,显示VEGF和bFGF水平与其生存期呈负相关。结论:AML细胞表达VEGF、bFGF及其?

关键词：白血病血管内皮生长因子碱性成纤维细胞生长因子预后

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脐血间充质干细胞鉴定及其生物学特性研究

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中华血液学杂志 2004年第8期25卷 504-505页

作者：孙爱红冯四洲冯义张磊卢士红韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

脐血来源丰富,其造血干细胞增殖能力强,是造血干细胞的来源之一.但是到目前为止,国内外对脐血中间充质干细胞(MSC)的争议较大[1-5].从骨髓中分离培养的MSC,CD34表达阴性,对造血有促进作用.研究MSC与脐血造血干细胞共移植促进脐血移植后... 详细信息

脐血来源丰富,其造血干细胞增殖能力强,是造血干细胞的来源之一.但是到目前为止,国内外对脐血中间充质干细胞(MSC)的争议较大[1-5].从骨髓中分离培养的MSC,CD34表达阴性,对造血有促进作用.研究MSC与脐血造血干细胞共移植促进脐血移植后造血植入等方法成为临床脐觋血移植的热点课题.因此,我们从脐血单个核细胞(MNC)中分离培养MSC,研究其生物学特性及从表达细胞因子角度阐明其促进造血的潜在作用。

关键词：脐血充质干细胞生物学 MSC 成骨细胞细胞生长

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慢性特发性血小板减少性紫癜患者血清瘦素水平测定

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中华血液学杂志 2004年第9期25卷 557-558页

作者：赵辉张磊战梅周余刘永泽李睿卢士红杨仁池韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

近年来的研究表明,内分泌系统无论是对体液免疫还是细胞免疫都发挥着重要作用.很多自身免疫性疾病不仅与性别密切相关,与其内分泌激素的水平及调节也明显相关[1].瘦素(leptin)是由脂肪细胞产生的一种激素样细胞因子[2],是由167个氨基酸... 详细信息

近年来的研究表明,内分泌系统无论是对体液免疫还是细胞免疫都发挥着重要作用.很多自身免疫性疾病不仅与性别密切相关,与其内分泌激素的水平及调节也明显相关[1].瘦素(leptin)是由脂肪细胞产生的一种激素样细胞因子[2],是由167个氨基酸组成的蛋白质.最初研究认为其与食物摄取和脂肪代谢有关,最近的研究发现瘦素可以活化CD4+T辅助细胞[3].瘦素水平下降导致免疫抑制,慢性瘦素缺乏者Th1型细胞功能下降而Th2型细胞功能上升.一系列研究表明瘦素可以诱发甚至加重实验性自身免疫性多发性硬化病动物的病情.其他结缔组织疾病,诸如系统性红斑狼疮、自身免疫性糖尿病、白塞氏病等也都存在瘦素高水平表达现象[3-5].然而,瘦素对慢性特发性血小板减少性紫癜(CITP)影响的研究还没有被涉及,我们对此进行了研究,以期发现二者之间的联系。

关键词：血清瘦素慢性特发性血小板减少性紫癜水平测定患者 Th1型 Th2型 T辅助细胞蛋白质氨基酸组成细胞功能

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抗人VEGF受体Ⅱ基因Ⅲ区单链抗体基因的构建和表达

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生物工程学报 2004年第2期20卷 187-191页

作者：李容熊冬生邵晓枫许元富刘嘉朱祯平杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

采用RT PCR技术从分泌抗人血管内皮生长因子受体Ⅱ (kinaseinsertdomain containingreceptor,KDR)基因Ⅲ区单克隆抗体Ycom1D3的杂交瘤细胞中克隆出VH 和VL 可变区基因 ,通过重叠延伸拼接 (splice overlapextension)PCR方法在VH 和VL 基... 详细信息

采用RT PCR技术从分泌抗人血管内皮生长因子受体Ⅱ (kinaseinsertdomain containingreceptor,KDR)基因Ⅲ区单克隆抗体Ycom1D3的杂交瘤细胞中克隆出VH 和VL 可变区基因 ,通过重叠延伸拼接 (splice overlapextension)PCR方法在VH 和VL 基因之间引入柔性短肽 (Gly4Ser) 3 ,体外构建Ycom1D3单链抗体基因 (Ycom1D3 ScFv) ,将其克隆至pAYZ表达载体 ,在大肠杆菌中表达。SDS PAGE和Western blot分析结果表明 ,Ycom1D3 ScFv在E .coli 16C9中获得表达 ,重组蛋白的相对分子量为 3 0kD ,与预期结果一致。表达产物主要以不溶性包涵体形式存在 ,经过溶解包涵体 ,TALON金属亲合层析基质 (TALONmetalaffinityresin)纯化和体外复性过程 ,获得了高纯度的单链抗体片段。流式细胞分析结果证实该单链抗体可与人脐静脉内皮细胞结合 ,保留了鼠源单抗与KDR抗原的特异性结合活性。抗KDRⅢ单链抗体基因Ycom1D3

关键词：血管内皮生长因子人 KDR 原核表达单链抗体受体肿瘤治疗基因

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抗Pgp基因工程抗体ScFv的构建、表达及其活性测定

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中国免疫学杂志 2004年第4期20卷 267-271页

作者：高瀛岱熊冬生彭晖许元富邵晓枫范冬梅杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的 :构建表达抗PgpScFv,进行体外活性的测定。方法 :利用RT PCR方法 ,克隆抗Pgp杂交瘤细胞PHMAO2的重链可变区基因 (VH) ,轻链可变区基因 (VL) ,拼接为单链抗体 (ScFv) ,再克隆到具有强启动子的PET2 8a(+)载体上进行表达 ,并进行了表... 详细信息

目的 :构建表达抗PgpScFv,进行体外活性的测定。方法 :利用RT PCR方法 ,克隆抗Pgp杂交瘤细胞PHMAO2的重链可变区基因 (VH) ,轻链可变区基因 (VL) ,拼接为单链抗体 (ScFv) ,再克隆到具有强启动子的PET2 8a(+)载体上进行表达 ,并进行了表达产物体外活性的测定。结果 :构建了表达质粒PET2 8a(+) ScFvPGP。表达产物可与表达Pgp抗原的K5 6 2 A0 2细胞特异性结合 ,并不抑制Pgp外排泵的功能。结论 :构建表达的抗PgpScFv只有针对Pgp抗原的识别功能 ,并无抑制作用 ,因此应用于人体后不会干扰正常细胞的排泄分泌功能 ,无论是作为靶向诊断治疗的载体还是作为双功能抗体的一臂 ,均具有广泛的应用前景。

关键词：单克隆抗体 ScFv P糖蛋白

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地塞米松促进胎儿主动脉血管CD_(105)^+间充质干细胞向脂肪细胞分化

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中国病理生理杂志 2004年第10期20卷 1786-1789页

作者：郭虹刘杰文杨少光刘津华廖联明赵春华中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的 :研究来自胎儿血管壁内的CD10 5+ 细胞是否具有间充质干细胞的特性 ,地塞米松是否促进其向脂肪细胞分化。方法 :免疫组化检测CD10 5阳性的细胞在胎儿主动脉分布 ,分离主动脉血管的成纤维样细胞 ,流式细胞仪检测细胞免疫表型 ,并接... 详细信息

目的 :研究来自胎儿血管壁内的CD10 5+ 细胞是否具有间充质干细胞的特性 ,地塞米松是否促进其向脂肪细胞分化。方法 :免疫组化检测CD10 5阳性的细胞在胎儿主动脉分布 ,分离主动脉血管的成纤维样细胞 ,流式细胞仪检测细胞免疫表型 ,并接种在脂肪分化和成骨分化的诱导培养液中培养 ,油红O和VonKossa染色及透射电镜鉴定脂滴和钙化基质沉淀的形成。结果 :CD10 5阳性的细胞分布在主动脉血管内膜的内皮细胞 ,部分中膜和外膜。分离到的细胞CD10 5、CD10 6、CD2 9、CD4 4阳性 ,CD34、CD31、CD11a、CD11b、HLA -DR为阴性。油红O和VonKossa染色分别显示脂滴和钙化基质形成。电镜下诱导的脂肪细胞胞浆中可见有包膜脂滴 ,诱导的成骨细胞胞浆内外电子密度高的钙盐沉积。诱导液中无地塞米松 ,未见含大脂滴的脂肪细胞。结论 :分离到主动脉壁CD10 5+ 细胞具有间充质干细胞的特性 ,并且地塞米松促进其向脂肪细胞分化。

关键词：间充质干细胞主动脉脂细胞骨细胞

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骨髓源间充质干细胞在异基因小鼠免疫器官内的分布及其免疫功能调节作用

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中国免疫学杂志 2004年第1期20卷 40-45页

作者：邓为民韩钦葛薇尤胜国李长虹张伟邓鸿业赵春华中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 北京大学医学部北京100083

目的:探讨骨髓源间充质干细胞(Bone MARROW MESENCHYMAL STEM CELLS,BMSC)在异基因小鼠免疫器官内的分布及其免疫调节作用。方法:以CM-DiI荧光染料示踪BMSC的体内分布情况,并辅以PCR检测Y染色体的方法进一步鉴定;体外实验采用MTT法、EL... 详细信息

目的:探讨骨髓源间充质干细胞(Bone MARROW MESENCHYMAL STEM CELLS,BMSC)在异基因小鼠免疫器官内的分布及其免疫调节作用。方法:以CM-DiI荧光染料示踪BMSC的体内分布情况,并辅以PCR检测Y染色体的方法进一步鉴定;体外实验采用MTT法、ELISA和FACS等方法检测BMSC的免疫调节作用。结果:BMSC可进入并较长期(30天)存在于异基因小鼠免疫器官内;在体外,BALB/C小鼠的BMSC对由ConA诱导的BALB/C和C57BL/6(B6)和BXSB小鼠的T细胞增殖均有抑制作用;而对前两种小鼠由LPS诱导的B细胞增殖和分泌Ig方面表现为促进作用,对BXSB小鼠由LPS诱导的B细胞增殖和Ig分泌有抑制作用。BALB/C小鼠的BMSC对BALB/C和B6小鼠由ConA诱导的IL-4生成细胞的数量无明显影响,却可降低由Co-nA诱导的两种品系小鼠的IFN-γ生成细胞的数量;但对于BXSB小鼠却不同,BALB/C的BMSC可降低由ConA诱导的BXSB小鼠的IL-4生成细胞的数量,而提高由ConA诱导的IFN-γ生成细胞的数量。结论:异基因BMSC不但可进入受体的免疫器官,且可较长期(30天)存在;另外,BMSC对同基因正常、异基因正常和异基因自身免疫病的个体均有一定程度的免疫调节作用。

关键词：骨髓源间充质干细胞免疫器官分布免疫活性细胞免疫调节

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脐血CD_(34)^-单个核细胞来源间充质干细胞研究

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中国生物工程杂志 2004年第6期24卷 98-102,106页

作者：孙爱红冯四洲冯义张磊卢士红韩忠朝中国协和医科大学中国医学科学院血液学研究所血液病医院国家重点实验血液学实验室天津300020

目的 :探讨分离培养脐血CD-3 4 细胞来源间充质干细胞 (MSC)及研究其生物学特征。方法 :取足月妊娠健康产妇胎儿脐血 ,分离其中单个核细胞 (MNC) ,去除CD+3 4 细胞 ,体外用低糖型DMEM培养基培养。观察细胞形态、测定生长曲线、利用流式... 详细信息

目的 :探讨分离培养脐血CD-3 4 细胞来源间充质干细胞 (MSC)及研究其生物学特征。方法 :取足月妊娠健康产妇胎儿脐血 ,分离其中单个核细胞 (MNC) ,去除CD+3 4 细胞 ,体外用低糖型DMEM培养基培养。观察细胞形态、测定生长曲线、利用流式细胞仪对培养细胞进行表型测定、细胞周期分析、体外诱导分化实验以及检测造血因子的表达情况。结果 :脐血CD-3 4 细胞中可培养出间充质干细胞 ,可诱导向成骨和脂肪细胞分化并表达IL 6、SCF和SDF 1等造血生长因子。结论 :从足月妊娠健康产妇脐血CD-3 4 细胞可分离培养出间充质干细胞 ,具有与其它来源MSC类似的表型及分化潜能 ,在体外传代可保持其低分化状态并表达造血因子。

关键词：脐血 CDˉ34细胞间充质干细胞诱导分化造血因子

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