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中华医学会第八次全国血液学学术会议

目的:探讨重组人促血液血管生成素（rh-HAPO）对人骨髓细胞及内皮细胞的作用。方法:细胞液体培养、半固体培养、MTT方法、免疫荧光标记流式细胞仪测定、免疫组化、显微镜观察照相等方法。结果:1.在液体培养3周的胎儿骨髓单个核细胞中,rh... 详细信息

目的:探讨重组人促血液血管生成素（rh-HAPO）对人骨髓细胞及内皮细胞的作用。方法:细胞液体培养、半固体培养、MTT方法、免疫荧光标记流式细胞仪测定、免疫组化、显微镜观察照相等方法。结果:1.在液体培养3周的胎儿骨髓单个核细胞中,rh-HAPO（500ng/ml）组比对照组中CD34+细胞的含量高20%,CD45细胞的含量高24%。2.液体培养3周后的胎儿骨髓造血细胞又进行的半固

关键词：骨髓造血内皮细胞增殖功能 rh-HAPO 干/祖细胞

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髓系肿瘤染色体核型的研究

髓系肿瘤染色体核型的研究

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作者：肖志坚郝玉书刘世和李建波卞寿庚等中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

主要内容：该项目通过髓系肿瘤染色体核型的系列研究，揭示中国髓系肿瘤患者染色体核型异常特点并收集中国该研究领域的基础数据；开展中国急性髓系白血病最常见的t(8；21)染色体易位形成机制及t(8；21)白血病细胞克隆起源时间及其起因... 详细信息

标准号: 0601310198

主要内容：该项目通过髓系肿瘤染色体核型的系列研究，揭示中国髓系肿瘤患者染色体核型异常特点并收集中国该研究领域的基础数据；开展中国急性髓系白血病最常见的t(8；21)染色体易位形成机制及t(8；21)白血病细胞克隆起源时间及其起因的研究；研究了髓系肿瘤染色体核型在髓系肿瘤诊断、分型及个体化治疗策略制定中实际应用价值。项目意义：提出了t(8；21)形成的主要机制是通过非同源染色体DNA断裂的修复和拓朴异构酶Ⅱ抑制剂诱导AMLl基因重排、融合及t(8；21)/AML患者的AML-ETO(+)白血病克隆起源于胎儿期等全新理论；阐明了中国髓系肿瘤患者染色体核型的特征；提出染色体核型是髓系肿瘤个体化治疗新策略制定的重要依据。主要发现发明及创新点：发现中国AML患者t(8；21)检出率明显高于西方国家。在国际上首次阐明了t(8；21)断裂区基因组DNA结构特征。在国际上首次证实t(8；21)形成机制是通过非同源染色体DNA断裂的修复和拓朴异构酶Ⅱ抑制剂诱导AMLI基因重排、融合。在国际上首次证实AMLl-ET0(+)白血病克隆起源于胎儿期。证实染色体核型是髓系肿瘤诊断和分型及独立亚型确认和个体化治疗新策略制定的重要依据。取得的成效：发表论文已被国际一流杂志如《自然癌症综述》、《自然遗传综述》和《科学》引用91次，已得到国际同行的认可。为t(8；21)/AML的Ⅰ、Ⅱ级预防奠定了理论基础。提出需增加脐血常见白血病基因检测剔除阳性标本以提高其临床使用安全性。根据染色体核型制定髓系肿瘤患者个体化治疗策略已在全国推广使用并已获得了显著的效益。培养了进修医师400余人，博士生10名，硕士生12名。

关键词：髓系肿瘤染色体核型白血病诊断

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急性髓系白血病体外细胞耐药与p170表达及染色体核型关系的研究

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白血病．淋巴瘤 2004年第6期13卷 323-325页

作者：冯敏徐泽锋邵英启刘世和王艳生贡金英郝玉书肖志坚中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液六科实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者体外细胞耐药与p170表达及染色体核型之间的关系。方法:用MTT分析方法检测阿糖胞苷(Ara-C)、柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)、安吖啶(AMSA)和米托蒽醌(MTZ)体外细胞耐药。间接免疫荧光染色检测p170... 详细信息

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者体外细胞耐药与p170表达及染色体核型之间的关系。方法:用MTT分析方法检测阿糖胞苷(Ara-C)、柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)、安吖啶(AMSA)和米托蒽醌(MTZ)体外细胞耐药。间接免疫荧光染色检测p170蛋白表达水平。R显带分析染色体核型。结果:初治患者(138例)、难治患者(8例)、复发患者(14例)、慢性粒细胞白血病AML变(8例)和骨髓增生异常综合征AML变(8例),各组之间的p170蛋白表达水平和细胞耐药率无显著性差异(P >0.05)。p170 表达率≥5 %的患者Ara-C,DNR和MTZ耐药率明显高于p170 表达率<5 %的患者,但HHT和AMSA的耐药检出率二者无显著性差异。p170表达水平与染色体核型异常无明显相关性。t(8;21)/inv(16)患者未发现对Ara-C有耐药。与正常核型组相比,5/7号染色体异常组的HHT和MTZ耐药发生率、+8组的HHT和DNR的耐药发生率、其他染色体异常组的Ara-C,DNR和HHT的耐药发生率明显增高(P <0.05)。结论:AML体外细胞耐药和p170蛋白表达水平与病期无关,p170 表达率和特异染色体核型异常与体外细胞耐药有一定的相关性。

关键词：髓系白血病急性耐药 MTT分析 p170 细胞遗传学

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脐带血干细胞增殖能力的研究

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生物医学工程与临床 2004年第4期8卷 227-230页

作者：闫凤英卢士红韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室协和干细胞基因工程公司天津300020

目的对新鲜、冷冻后复苏及扩增后的脐带血干细胞增殖能力的研究.方法采集正常分娩产妇自愿捐献的脐带血,用淋巴细胞分离液分选出单个核细胞或用磁珠抗体分选CD34+细胞,冷冻贮存或扩增.用甲基纤维素半固体培养基培养方法测定脐带血冷冻... 详细信息

目的对新鲜、冷冻后复苏及扩增后的脐带血干细胞增殖能力的研究.方法采集正常分娩产妇自愿捐献的脐带血,用淋巴细胞分离液分选出单个核细胞或用磁珠抗体分选CD34+细胞,冷冻贮存或扩增.用甲基纤维素半固体培养基培养方法测定脐带血冷冻或扩增后的集落形成能力,并与新鲜脐带血做比较.用MTF方法测定扩增的脐带血干细胞与新鲜脐带血干细胞黏附功能.结果新鲜脐带血单个核细胞105个可生成CFU-Mix集落(19.0±2.8)个、CFU-GM(55.6±15.7)个、BFU-E(65.0±22.8)个.冷冻复苏的脐带血单个核细胞105个可生成Mix集落(25.2±8.4)个、CFU-GM(46.5±18.0)个、BFU-E(52.3±24.5)个.在含有PF4(100ng/ml)的扩增后的脐带血,每103个CD34+细胞生成CFU-Mix集落(32.2±6.4)个、CFU-GM(42.5±9.31)个、BFU-E(22.3±2.3)个.PF4促进新鲜脐带血的黏附能力,而且在扩增脐带血CD34+细胞体系中加入100ng/ml的PF4,脐带血CD34+细胞对基质层的黏附能力始终保持较高水平,14天时脐带血CD34+细胞自发黏附率PF4组比对照组提高(55.07±13.62)%.结论冷冻或含PF4优化体系扩增脐带血干细胞保持了新鲜脐带血干细胞形成CFU-Mix的能力;在扩增脐带血干细胞中PF4可保持脐带血CD34+细胞黏附功能.

关键词：脐带血干细胞集落形成单位测定单个核细胞血小板第四因子(PF4)

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脐血单个核细胞胫骨腔内移植NOD/SCID小鼠的实验研究

脐血单个核细胞胫骨腔内移植NOD/SCID小鼠的实验研究

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中华医学会第八次全国血液学学术会议

作者：孙爱红冯四洲刘斌汤锋武冯义卢士红韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心天津 300020 中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室造血干细胞移植中心

目的:采用骨髓腔内移植（iBM）的方法移植脐血单个核细胞（MNC）到NOD/SCID小鼠的下肢胫骨骨髓腔中,观察这种方法对小鼠造血重建和免疫功能恢复的作用。方法:NOD/SCID小鼠预先经Cs全身照射后,在4h内无菌条件下局麻后从尾静脉或骨髓腔内... 详细信息

目的:采用骨髓腔内移植（iBM）的方法移植脐血单个核细胞（MNC）到NOD/SCID小鼠的下肢胫骨骨髓腔中,观察这种方法对小鼠造血重建和免疫功能恢复的作用。方法:NOD/SCID小鼠预先经Cs全身照射后,在4h内无菌条件下局麻后从尾静脉或骨髓腔内输注分离脐血MNC。

关键词： NOD/SCID 骨髓腔单个核细胞

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外周血干细胞治疗血管闭塞性脉管炎

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中华医学杂志 2004年第16期84卷 1334-1334页

作者：韩忠朝杨晨中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室国家干细胞工程技术研究中心天津300020

早在一个世纪前就有人提出造血细胞和血管细胞可能有一个共同的干细胞--血液血管干细胞(hemangioblast).血液血管干细胞可以发育分化成造血干细胞(HSC)和血管干细胞(angioblast),后两者进一步分化增殖形成血细胞和血管两大系统.但直到... 详细信息

早在一个世纪前就有人提出造血细胞和血管细胞可能有一个共同的干细胞--血液血管干细胞(hemangioblast).血液血管干细胞可以发育分化成造血干细胞(HSC)和血管干细胞(angioblast),后两者进一步分化增殖形成血细胞和血管两大系统.但直到近几年,才有实验研究证实了血液血管干细胞的存在,并可通过免疫磁珠或流式细胞仪等技术进行鉴别和分离纯化.这些干细胞虽然数量很少,但其双重分化潜能使之成为临床移植治疗血液和血管性疾病的候选干细胞.

关键词：外周血干细胞血管闭塞性脉管炎造血干细胞 HSC 心血管病

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脐血干/祖细胞短期体外扩增后归巢相关粘附特性的研究

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中华血液学杂志 2003年第2期24卷 64-67页

作者：翟琼莉周余邱录贵李茜韩俊领于珍孟恒星应红光王亚非韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室

目的　探讨体外扩增对脐血 (UCB)造血干祖细胞 (HSPC)原有粘附功能的影响。方法　将从新鲜UCB标本中纯化的CD34+ 细胞接种于无血清、无基质的悬浮扩增体系 ,分别于培养第 7天、第10天和第 14天从扩增产物中再次纯化CD34+ 细胞 ,比较... 详细信息

目的　探讨体外扩增对脐血 (UCB)造血干祖细胞 (HSPC)原有粘附功能的影响。方法　将从新鲜UCB标本中纯化的CD34+ 细胞接种于无血清、无基质的悬浮扩增体系 ,分别于培养第 7天、第10天和第 14天从扩增产物中再次纯化CD34+ 细胞 ,比较扩增前后CD34+ 细胞表面VLA 4 (CD4 9d)、VLA 5(CD4 9e)、LFA 1(CD1 1a)、L selectin (CD6 2L)、PECAM 1(CD31 )、ICAM 1(CD54)和HCAM(CD4 4)等归巢相关粘附分子 (CAMs)的表达情况 ,并检测CD34+ 细胞与纤连蛋白 (FN)间的自发粘附率和基质细胞来源因子 1(SDF 1)诱导粘附率。结果　①在第 14天的培养扩增中 ,表达上述CAMs的各CD34+ 细胞亚群均有不同程度 (15～ 72倍 )的扩增 ;②扩增后CD34+ 细胞表面粘附分子CD4 4、CD1 1a、CD4 9e和CD4 9d的表达与原代CD34+ 细胞持平或高于培养开始时水平 ,而CD6 2L、CD54和CD31 的表达则有不同程度下调 ;③在前 10d的扩增中 ,CD34+ 细胞与FN间的自发粘附率和SDF 1诱导粘附率均呈上升趋势。结论　所建立的短期培养体系不仅可以支持表达重要CAMs的UCBCD34+ 细胞亚群的有效扩增 ,而且扩增后的HSPC总体上保持原有的粘附功能。

关键词：脐血干/祖细胞体外扩增归巢相关粘附特性研究

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抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体的构建和表达

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生物工程学报 2003年第4期19卷 444-449页

作者：高瀛岱熊冬生许元富彭晖邵晓枫杨纯正朱祯平中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

构建和表达抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并用Westernblot和分子排阻层析鉴... 详细信息

构建和表达抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并测定该微型双功能抗体的生物学活性。采用PCR和overlapPCR方法构建抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并用双脱氧终止法测定DNA序列 ;采用亲和层析法纯化该产物 ,并用Westernblot和分子排阻层析鉴定纯化产物 ;采用免疫荧光法、放射免疫分析法鉴定纯化产物与靶细胞的结合活性。DNA序列测定结果表明 :抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体已构建成功 ,表达可溶性产物的产量达 2mg L以上 ,纯化产物中二聚体的比例达 90 % ,具有与Jurkat(CD3 + )和K5 62 A0 2细胞 (Pgp+ )结合的活性 ,与抗CD3ScFv及抗PgpScFv的亲合常数相当。成功地构建了抗CD3 抗Pgp微型双功能抗体 ,并获得高效表达。

关键词：抗CD3 抗Pgp 双功能抗体构建表达肿瘤免疫疗法

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人凝血酶敏感蛋白1抗血管生成活性片段重组腺病毒高效制备

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中国医学科学院学报 2003年第3期25卷 312-315页

作者：刘澎王一杨仁池顾洁蔡英林韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的构建人凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin1,TSP1)抗血管生成片段重组腺病毒。方法采用RT-PCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增编码TSP1抗血管生成活性片段(TSP1f)的cDNA序列,并将其克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV上,以线性化重组穿梭载... 详细信息

目的构建人凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin1,TSP1)抗血管生成片段重组腺病毒。方法采用RT-PCR方法从正常人外周血单个核细胞扩增编码TSP1抗血管生成活性片段(TSP1f)的cDNA序列,并将其克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV上,以线性化重组穿梭载体与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,进行同源重组并酶切鉴定筛选正确重组子,用线性化重组质粒转染人胚肾293细胞,制备重组腺病毒ADV-TSP1f,最后以PCR及Westernblot方法鉴定TSP1抗血管生成片段的表达。结果细菌内同源重组共获得43个卡那霉素抗性克隆,经酶切鉴定表明其中直径最小的10个均为正确重组子,该重组质粒转染293细胞所获得的重组腺病毒可高效表达TSP1抗血管生成片段,纯化后病毒滴度为1.0×1011pfu/mL。结论细菌内同源重组法构建重组腺病毒高效快捷,所获得的ADV-TSP1f可进一步应用于抗肿瘤血管生成的基因治疗研究。

关键词：凝血酶敏感蛋白l AdEasy System 基因治疗腺病毒

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ETO转录抑制结构域的分析与鉴定

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中华血液学杂志 2003年第1期24卷 10-13页

作者：王敏王玲郝长来邢海燕唐克晶王建祥中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所血液病医院血液内科实验血液学国家重点实验室天津300020

目的　进一步确定ETO抑制基因转录的区域及其与组蛋白脱乙酰化酶之间的关系。方法　以位点诱变法使ETO的两个锌指结构分别突变 ,使用聚合酶链反应扩增ETO突变体 ,克隆入真核细胞表达质粒pFA CMV中。通过基因转染、报告基因转录活性分析 ... 详细信息

目的　进一步确定ETO抑制基因转录的区域及其与组蛋白脱乙酰化酶之间的关系。方法　以位点诱变法使ETO的两个锌指结构分别突变 ,使用聚合酶链反应扩增ETO突变体 ,克隆入真核细胞表达质粒pFA CMV中。通过基因转染、报告基因转录活性分析 ,确定ETO的不同区段对基因转录调节的作用。结果　成功构建出锌指突变和不同区段的ETO表达载体 ,并发现ETO存在两个抑制转录的区域 ,分别位于羧基末端的两个锌指结构和第 2 75～ 487位氨基酸残基。结论　ETO通过 2个区域抑制转录 ,并且与组蛋白脱乙酰化酶密切相关 ,后者可能会用作急性髓系白血病M2b的治疗靶点。

关键词：急笥髓系白血病 ETO基因组蛋白脱乙酰基酶鉴定

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