检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2001年第3期23卷 272-272页

作者：谭耀红赵春华杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

DNA芯片技术是90年代初期发展起来的一种DNA分析新技术。cDNA 微阵列是DNA芯片的一种，是将组织或细胞中经RT-PCR得到的300～500 bp的cDNA片段固定于芯片上而得到的。芯片上每一个cDNA点阵的序列和意义都是已知的，通过比较两种来源的RN... 详细信息

DNA芯片技术是90年代初期发展起来的一种DNA分析新技术。cDNA 微阵列是DNA芯片的一种，是将组织或细胞中经RT-PCR得到的300～500 bp的cDNA片段固定于芯片上而得到的。芯片上每一个cDNA点阵的序列和意义都是已知的，通过比较两种来源的RNA，可以判断cDNA 微阵列上每个基因在二者之间表达水平的差异。多药耐药性(multidrug resistance, MDR)的产生是化疗失败的主要原因之一。为了研究MDR产生的机制，本实验室用阿霉素对K562细胞进行了长期诱导，经筛选获得了一个MDR细胞株K562/A02。K562/A02具有典型的MDR表型，对阿霉素的耐药倍数达到了近

关键词：多药耐药 cDNA微阵列肿瘤细胞株肿瘤药物疗法

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肿瘤耐药基因表达的临床意义及其逆转研究

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中国肿瘤 2001年第3期10卷 132-136页

作者：杨纯正刘淑仪中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 北京市肿瘤防治研究所北京100034

对人白血病多药耐药细胞株K562/A02和人肺癌耐PDD细胞株A549PDD系统研究表明 ,耐药表型是多基因的 ,它随诱导的药物不同 ,肿瘤种类 ,分化程度以及宿主微环境的不同而表现为一种或几种耐药基因同时表达。临床研究肿瘤共524例包括白血病26... 详细信息

对人白血病多药耐药细胞株K562/A02和人肺癌耐PDD细胞株A549PDD系统研究表明 ,耐药表型是多基因的 ,它随诱导的药物不同 ,肿瘤种类 ,分化程度以及宿主微环境的不同而表现为一种或几种耐药基因同时表达。临床研究肿瘤共524例包括白血病260例 ,实体瘤264例 ,但目前能在临床证实跟一些肿瘤耐药相关的基因只有mdr1/P gp。用比较敏感细胞和对应的耐药细胞cDNA阵列表达水平的差别新技术发现了除已知mdr1等耐药基因以外新的与耐药相关基因。这也为基因组学在耐药基因研究开辟了新的途径。开发出新的耐药逆转剂PZT11、PND和抗耐药肿瘤新药PHⅡ 7有望在临床发挥作用。抗P gp/抗CD3

关键词：肿瘤耐药基因多药耐药糖蛋白

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M-CSF及其受体的生物多样性和复杂性观

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科学通报 2000年第7期45卷 780-783页

作者：吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

随着科学的发展，研究方法和观点由分析趋向综合，近年来生物多样性和复杂性受到国内外学者的关注．就对Ｍ－ＣＳＦ及其受体的多年研究，提出生物多样性的多层次性，认为在生物大分子水平也有生物多样性；生物多样性形成的或然性是生物... 详细信息

随着科学的发展，研究方法和观点由分析趋向综合，近年来生物多样性和复杂性受到国内外学者的关注．就对Ｍ－ＣＳＦ及其受体的多年研究，提出生物多样性的多层次性，认为在生物大分子水平也有生物多样性；生物多样性形成的或然性是生物复杂性形成的基础之一．并认为发展细胞社会学和生物拓扑学是研究生物复杂系统的重要途径之一．呼吁发掘中医理论和我国生命科学研究的积累，吸取当今“分析研究”的新进展，积极参与复杂性研究，争取在该领域占有一席之地．

关键词：生物多样性复杂性 M-CSF 受体生物大分子

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嵌合抗CD_(20)抗体Fab片段在大肠杆菌中表达及活性鉴定

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中国免疫学杂志 2000年第10期16卷 521-524页

作者：赖增祖熊冬生范冬梅彭辉许元富朱祯平杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的 :构建抗CD2 0 嵌合抗体Fab片段表达载体 ,并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达。方法 :利用PCR方法从抗CD2 0 单链抗体 (ScFv)表达载体上扩增抗CD2 0 抗体轻链可变区基因 (VL)、重链可变区基因 (VH) ,然后将VH、VL 基因重组到Fa... 详细信息

目的 :构建抗CD2 0 嵌合抗体Fab片段表达载体 ,并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达。方法 :利用PCR方法从抗CD2 0 单链抗体 (ScFv)表达载体上扩增抗CD2 0 抗体轻链可变区基因 (VL)、重链可变区基因 (VH) ,然后将VH、VL 基因重组到Fab表达载体pYZF中 ,构建抗CD2 0 Fab表达载体pYZF1cd2 0 ,并在 2 7C7菌中高效表这。结果 :经Fab表达载体转化的 2 7C7菌株 ,进行表达培养 ,经分离纯化获得具有CD2 0 特异结合活性的Fab片段 ,竞争性免疫荧光抑制实验表明 ,表达产物Fab片段能竞争性抑制鼠源性抗CD2 0 抗体HI47和CD2 0 表达细胞Raji细胞结合。结论 :在大肠杆菌中高效可溶性分泌表达有活性的抗CD2 0 嵌合抗体Fab片段。

关键词：单克隆抗体嵌合抗体Fab片段 CD20 大肠杆菌

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肿瘤化疗药物诱导细胞凋亡的研究进展

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癌症 2000年第12期19卷 1173-1176页

作者：王树滨杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

化疗是肿瘤综合治疗手段之一,随着对凋亡机制的深入了解,人们越来越清楚化疗药物是通过类似诱导凋亡的机制起作用的.而实际上许多对凋亡调节机制的认识也是通过化疗药物诱导凋亡来证实.近年来肿瘤化疗和细胞凋亡的研究更加引人注目,我... 详细信息

化疗是肿瘤综合治疗手段之一,随着对凋亡机制的深入了解,人们越来越清楚化疗药物是通过类似诱导凋亡的机制起作用的.而实际上许多对凋亡调节机制的认识也是通过化疗药物诱导凋亡来证实.近年来肿瘤化疗和细胞凋亡的研究更加引人注目,我们从凋亡的发生、传导和调控角度,阐述化疗诱导凋亡的机制、特征及其临床指导意义.

关键词：细胞凋亡多药耐药性肿瘤药物治疗

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KGla细胞免疫小鼠脾细胞scFv噬菌体展示文库的构建及其表达

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中国免疫学杂志 2000年第6期16卷 318-321页

作者：隋建华宋增璇佘鸣张丽艳沈德诚韩忠朝中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的 :用噬菌体展示技术构建KGla免疫小鼠的脾细胞scFv表达文库。方法 :用人髓系白血病细胞系KGla细胞免疫小鼠 ,取其脾细胞 ,RT PCR扩增VH和Vκ基因并克隆入噬菌体展示表达载体 ,构建scFv文库 ,并测定文库的库容量和BstN1酶切单个克隆... 详细信息

目的 :用噬菌体展示技术构建KGla免疫小鼠的脾细胞scFv表达文库。方法 :用人髓系白血病细胞系KGla细胞免疫小鼠 ,取其脾细胞 ,RT PCR扩增VH和Vκ基因并克隆入噬菌体展示表达载体 ,构建scFv文库 ,并测定文库的库容量和BstN1酶切单个克隆分析文库的多样性。用KGla作为固相抗原 ,进行四轮吸附洗脱富集的筛选 ,SDS PAGE检验筛选后文库scFv的呈示表达。结果 :文库的库容为 3× 10 6cfu ,单个克隆的BstN1Ⅰ酶切图谱显示多样 ,提示文库的容量和多样性均能满足进一步筛选分离目的基因的需要 ,筛选后的文库能很好地表达外源scFv。结论

关键词：噬菌体展示抗体库 scFv 白血病 KGla细胞

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CD2胞内区结合蛋白的分子克隆与鉴定

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科学通报 2000年第11期45卷 1163-1167页

作者：邵源肖声翟文静李董刘彦信刘士廉郑德先中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

为了探讨ＣＤ２分子的信号传递功能，以编码ＣＤ２胞内区（Ｔｈｒ２１１－Ｇ１ｎ３３６）肽段的ｃＤＮＡ为“钓饵”，采用酵母双杂交系统从激活的人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中筛选与之相互作用蛋白的ｃＤＮＡ序列．并采用免疫共沉淀法... 详细信息

为了探讨ＣＤ２分子的信号传递功能，以编码ＣＤ２胞内区（Ｔｈｒ２１１－Ｇ１ｎ３３６）肽段的ｃＤＮＡ为“钓饵”，采用酵母双杂交系统从激活的人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中筛选与之相互作用蛋白的ｃＤＮＡ序列．并采用免疫共沉淀法鉴定该蛋白在体内与ＣＤ２胞内区结合的特异性．克隆并鉴定了一个与ＣＤ２胞内区特异性结合的胞内蛋白分子，与ｖ－ｆｏｓ转化效应蛋白（Ｆｔｅ－１）同源Ｆｔｅ－１参与细胞转化、生长、蛋白合成及向线粒体转运蛋白质．蛋白数据库检索表明，Ｆｔｅ－１具有蛋白激酶ＰＫＣ的结合与作用位点。

关键词： CD2胞内区结合蛋白分子克隆鉴定

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巨噬细胞集落刺激因子受体的配基结合区的分析

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科学通报 2000年第2期45卷 178-182页

作者：罗寿青郑德先刘彦信饶青吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

从人胎盘中提取总ＲＮＡ，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增巨噬细胞集落刺激因子受体（Ｍ－ＣＳＦＲ）胞外区的Ｄ１－３，Ｄ２－３和Ｄ３功能区，并在大肠杆菌中成功地表达了各相应的重组蛋白．酶联免疫吸附分析（ＥＩＡ）证明重组Ｄ... 详细信息

从人胎盘中提取总ＲＮＡ，利用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增巨噬细胞集落刺激因子受体（Ｍ－ＣＳＦＲ）胞外区的Ｄ１－３，Ｄ２－３和Ｄ３功能区，并在大肠杆菌中成功地表达了各相应的重组蛋白．酶联免疫吸附分析（ＥＩＡ）证明重组Ｄ１－３结合Ｍ－ＣＳＦ的能力是重组Ｄ２－３的３倍，前者的Ｋｄ为１１ｎｍｏｌ／Ｌ，后者的为３９ｎｍｏｌ／Ｌ．而重组的Ｄ３则完全没有结合能力．这些数据提示Ｄ２－３是与其配基结合的主体位点，Ｄ１为其配基结合的辅助位点，可能对配基结合位点的刚性也有贡献．

关键词：巨噬细胞集落刺激因子受体结合活性 M-CSF

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srhM-CSFR在昆虫细胞中的表达及其配基结合活性分析

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中国生物化学与分子生物学报 2000年第4期16卷 443-447页

作者：罗寿青郑德先刘彦信李董饶青吴克复中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

从人胎盘中提取总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体 ( M-CSFR)胞外区的、具有全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域的 DNA,将其克隆到杆状病毒载体 pbluebac4.5中 ,与杆状病毒 DNA一同转导昆虫细胞 Sf9... 详细信息

从人胎盘中提取总 RNA,利用 RT- PCR技术扩增出巨噬细胞集落刺激因子受体 ( M-CSFR)胞外区的、具有全部配基结合活性区域的前三个免疫球样蛋白结构域的 DNA,将其克隆到杆状病毒载体 pbluebac4.5中 ,与杆状病毒 DNA一同转导昆虫细胞 Sf9.经过 2轮筛选 ,获得了纯化的重组病毒 ,再用重组病毒感染昆虫细胞 ,Western印迹检测证明 srh M- CSFR得到了表达 ,它是分泌到上清液中的糖基化蛋白 .Western印迹分析了不同时间点的 srh M- CSFR表达情况 ,结果表明 srh M- CSFR的表达在 96～ 1 2 0 h时达到最大 .srh M- CSFR的产量约为 1 mg/L,EIA法进行配基结合活性分析表明 ,srh M- CSFR与 M- CSF结合的解离常数为 5nmol/L.

关键词： srhM-CSFR 杆状病毒表达系统配基综合活性

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细胞凋亡信号传导研究进展

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临床肿瘤学杂志 2000年第1期5卷 62-64页

作者：王树滨杨纯正中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室

细胞凋亡是受基因调控的一种主动性细胞自杀过程,它与细胞增殖的动态平衡是维系生长发育、内环境稳定和免疫调节所必须的最基本过程,细胞内有一整套极其复杂的信号系统精细地调控细胞凋亡过程,近年来人们对细胞凋亡信号传导途径的研究... 详细信息

细胞凋亡是受基因调控的一种主动性细胞自杀过程,它与细胞增殖的动态平衡是维系生长发育、内环境稳定和免疫调节所必须的最基本过程,细胞内有一整套极其复杂的信号系统精细地调控细胞凋亡过程,近年来人们对细胞凋亡信号传导途径的研究已取得明显进展,主要表现在:①蛋白酶Caspase家族在细胞凋亡中起重要作用;②线粒体内膜空间释放促死亡蛋白是导致凋亡发生的主要因素;③死亡配基和细胞内应激是细胞凋亡信号传导中两条重要途径。 1 Caspase家族在细胞凋亡中的作用 Caspase是特异酶切ASP氨基位点的半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl Aspartate Specific Proteinase),Caspase的发现来自线虫凋亡基因的遗传学研究,在哺乳动物以至少发现13个成员,根据其发现顺序统一命名为Caspase 1—13,目前尚不清楚为什么在哺乳动物中存在如此之多Caspase,而且发现在某些情况下,不同Caspase裂解相同的蛋白底物,推测可能原因有:①Caspase或许是以组织或亚细胞特异性方式激活的;②Caspase或许对底物具有专一性;③Caspase或许是按级联裂解顺序排列的;④Caspase为不同凋亡刺激所必须。所有蛋白水解酶Caspase都具有相似的氨基酸序列、结构和底物特异性,它们均以酶原(Proenzyme)形式存在,由N端长副区(Prodomain)约30KD。

关键词：细胞凋亡信号传导线粒体

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