检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2012年第6期20卷 1341-1345页

作者：胡蓉华金薇娜常国强蔺亚妮王建茹永新李庆华庞天翔首都医科大学宣武医院血液科中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津医科大学总医院神经研究所

本研究旨在探讨抑制NHE1活性和细胞内酸化能否逆转白血病细胞对伊马替尼的耐药,以及慢性髓系白血病(CML)患者细胞的BCR/ABL下游分子网络。对CML患者原代白血病细胞或K562/DOX,K562/G01耐药细胞株进行酸化处理,检测细胞内P-糖蛋白(Pgp)... 详细信息

本研究旨在探讨抑制NHE1活性和细胞内酸化能否逆转白血病细胞对伊马替尼的耐药,以及慢性髓系白血病(CML)患者细胞的BCR/ABL下游分子网络。对CML患者原代白血病细胞或K562/DOX,K562/G01耐药细胞株进行酸化处理,检测细胞内P-糖蛋白(Pgp)基因及蛋白表达,药物在细胞内蓄积。考察细胞酸化后原代白血病细胞ERK1/2、p38 MAPK磷酸化水平的变化。结果表明:细胞酸化后进展期患者细胞内药物蓄积增加,对伊马替尼的敏感性增强。随着细胞内pH的降低,进展期CML患者的细胞内p38MAPK磷酸化水平呈下降趋势,ERK1/2磷酸化水平3 min时升高、30 min后下降。特异性p38 MAPK抑制剂SB203580可与NHE1抑制剂卡立泊来德协同下调Pgp蛋白的表达。结论:抑制NHE1活性能够显著降低耐药细胞中Pgp表达,增加CML疾病进展期患者细胞中罗丹明123及阿霉素的累积,增加细胞对伊马替尼的敏感性,p38 MAPK信号传导通路参与其中。

关键词：钠氢交换蛋白1 细胞内pH值慢性髓系白血病丝裂原激活蛋白激酶多药耐药 P-糖蛋白

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人脐带、胎盘绒毛膜来源间充质干细胞的生物学特性比较研究

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中国实验血液学杂志 2012年第3期20卷 692-696页

作者：韩之波杨舟鑫池颖王有为王涛及月茹杨萍孟磊韩忠朝中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院血液学研究所泰达生命科学研究中心天津300457 北京汉氏联合生物技术有限公司北京100176 细胞产品国家工程研究中心天津300457

由于组织来源和增殖能力的优势,与骨髓间充质干细胞(MSC)相比,脐带和胎盘来源的MSC更具有临床应用前景,但脐带和胎盘来源MSC的生物学特性是否有差异值得进一步研究。本研究比较人脐带、胎盘绒毛膜来源MSC的生物学特性。将胎盘、脐带冲... 详细信息

由于组织来源和增殖能力的优势,与骨髓间充质干细胞(MSC)相比,脐带和胎盘来源的MSC更具有临床应用前景,但脐带和胎盘来源MSC的生物学特性是否有差异值得进一步研究。本研究比较人脐带、胎盘绒毛膜来源MSC的生物学特性。将胎盘、脐带冲洗干净后,通过酶消化法分离脐带、胎盘来源的MSC。通过短串联重复序列分析(STR)检测细胞是否均来源于胎儿组织,用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞表型,使用不同的诱导分化培养液检测其多向分化的能力。将MSC与植物血凝素刺激的外周血单个核细胞共培养,用酶联免疫吸附试验检测上清γ-干扰素的水平。结果表明,STR分析证实所得到的细胞均来源于胎儿组织,这两种细胞生长呈典型的成纤维细胞形态;细胞表达常见的MSC表面标记CD90、CD73、CD105、CD44,不表达CD45,CD11b和CD34;在不同的条件培养液培养下,细胞均可向成骨、成脂方向分化,但在成脂分化方面,绒毛膜来源MSC能形成更大的脂滴。结论:所得到的细胞均为MSC,均能抑制植物血凝素刺激的人外周血单个核细胞分泌γ-干扰素,且绒毛膜来源的MSC具有更强的抑制能力。这使得绒毛膜来源的MSC在治疗自身免疫系统疾病方面可能具有更大的优势。

关键词：脐带间充质干细胞绒毛膜间充质干细胞生物学特性免疫调节

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人生存素survivin的克隆与分泌表达

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生物技术通报 2012年第5期28卷 89-92页

作者：代晓华姜琳琳程昕纪庆朱惠芳熊冬生周圆中国医学科学院北京协和医学院、血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室天津300020 天津市口腔医院暨南开大学附属口腔医院实验研究中心天津300041

旨在克隆人生存素(survivin)基因,并在原核系统中进行可溶性表达。采用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MCF-7中克隆survivin基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建带有六聚组氨酸纯化标记的人survivin基因原核表达载体pAYZ-survivin,将该载体转... 详细信息

旨在克隆人生存素(survivin)基因,并在原核系统中进行可溶性表达。采用RT-PCR方法从人乳腺癌细胞MCF-7中克隆survivin基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建带有六聚组氨酸纯化标记的人survivin基因原核表达载体pAYZ-survivin,将该载体转化大肠杆菌16C9进行表达。结果表明,成功克隆了survivin基因并构建了重组表达载体。融合蛋白主要以可溶性状态分泌到周质腔内存在。分离提取蛋白,HiTrap金属螯合柱进行亲和层析纯化,并经Western blot验证了高纯度survivin融合蛋白的表达。

关键词：生物医学工程生存素分泌表达大肠杆菌凋亡

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利用蛋白转导域介导的新型大分子转染方法

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白血病．淋巴瘤 2012年第10期21卷 581-584页

作者：张砚君任思楣陆红刘倩曾洁张益枝中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020 中国医学科学院卫生部北京医院卫生部临检中心血液室天津300020 中国医学科学院卫生部北京医院检验科天津300020

目的构建蛋白转导域（PTD）与扩增链亲和素（Strep）融合蛋白，用于转染常规操作中难于转染生物大分子的血液肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞系。方法采用聚合酶链反应（PCR）法引入PTD和G4S序列、扩增Strep序列；经酶切、连接构建重... 详细信息

目的构建蛋白转导域（PTD）与扩增链亲和素（Strep）融合蛋白，用于转染常规操作中难于转染生物大分子的血液肿瘤细胞、神经细胞、干细胞等细胞系。方法采用聚合酶链反应（PCR）法引入PTD和G4S序列、扩增Strep序列；经酶切、连接构建重组质粒pAYZ-PTD-Strep，用低磷培养液AP5诱导表达融合蛋白，E-tag亲和层析柱纯化产物，Westernblot鉴定产物，利用pAYZ-PTD—Strep将eGFP质粒转染到悬浮U937细胞内，流式细胞术测定融合蛋白转染效率。结果目的产物PTD—G4S—Strep融合蛋白以可溶形式表达，产量约为0．7mg／L，经E—tag亲和层析柱纯化后纯度可达90％以上。融合蛋白PTD-Strep可成功将质粒运送至悬浮细胞U937内，转染效率高于PTD单体。结论构建的融合蛋白PTD-Strep具有将生物大分子转入血液肿瘤悬浮细胞内的活性，有望发展成为一种高效、可靠的真核细胞转染方法。

关键词：蛋白转导域转染

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单克隆抗体治疗急性淋巴细胞白血病

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国际输血及血液学杂志 2012年第5期35卷 424-428页

作者：章艳茹(综述) 邱录贵(审校) 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

近年来，肿瘤细胞的单克隆抗体靶向杀伤已成为肿瘤治疗的发展趋势之一。譬如急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞表面表达各种特异性抗原CD19，CD20，CD22和CD52等，引发了以这些靶点为目标的新型药物研发。现将就blinatumomab，利妥昔单抗（... 详细信息

近年来，肿瘤细胞的单克隆抗体靶向杀伤已成为肿瘤治疗的发展趋势之一。譬如急性淋巴细胞白血病（ALL）细胞表面表达各种特异性抗原CD19，CD20，CD22和CD52等，引发了以这些靶点为目标的新型药物研发。现将就blinatumomab，利妥昔单抗（rituximab），依帕珠单抗（epratuzumab），inotuzumab ozogamicin，阿伦单抗（alemtuzumab）等单抗治疗ALL的临床及临床前研究进行综述。

关键词：急性淋巴细胞白血病单克隆抗体 CD19 CD20 CD22 CD52 blinatumomab rituximab epratuzumab inotuzumab ozogamicin alemtuzumab

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骨髓增生异常综合征转化纯红系白血病1例并文献复习

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临床血液学杂志 2012年第5期25卷 580-582页

作者：张宏丽肖志坚中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:提高对纯红系白血病(PEL)的认识。方法:报道了1例骨髓增生异常综合-难治性血细胞减少伴原始细胞增多2型(MDS-RAEB2)转化的PEL并进行相关文献复习。结果:按WHO诊断分型标准为M6b。患者贫血症状显著,全血细胞减少。骨髓红系细胞比例... 详细信息

目的:提高对纯红系白血病(PEL)的认识。方法:报道了1例骨髓增生异常综合-难治性血细胞减少伴原始细胞增多2型(MDS-RAEB2)转化的PEL并进行相关文献复习。结果:按WHO诊断分型标准为M6b。患者贫血症状显著,全血细胞减少。骨髓红系细胞比例≥80%伴形态异常,原红细胞呈现显著巨幼样变,胞质强嗜碱性、无粒、空泡易见且常成串出现,PAS强阳性,POX阴性。白血病细胞表达CD36和血型糖蛋白A阳性,部分表达CD117、CD71阳性,缺乏髓系相关抗原表达。出现染色体异常。治疗采用蒽环类药物加阿糖胞苷的化疗方案,未缓解,放弃治疗。结论:PEL罕见,传统化疗疗效差,预后差。

关键词：骨髓增生异常综合征急性红白血病纯红系白血病

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EF-hand对钙调磷酸酶B同源蛋白2的生物学功能影响

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中国医药导报 2012年第35期9卷 28-31页

作者：张洪菊李庆华王立洪蔺亚妮常国强庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法... 详细信息

目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法、免疫共沉淀等手段,明确CHP2结合Ca2+的数量、部位,以及对CHP2与NHE1结合的影响;在血清饥饿条件下,观察表达EF-hand突变的CHP2(NHE1/CHP2-EF3m/4m)对细胞生存的影响。结果分别突变EF-hand结构EF3或EF4,CHP2结合Ca2+减少;同时突变EF3和EF4,CHP2不能结合Ca2+;免疫共沉淀实验结果显示乙二胺四乙酸(EDTA)剥夺CHP2携带的Ca2+之后,CHP2与NHE1结合的数量明显减少;不携带Ca2+的CHP2在细胞内与NHE1结合的数量也明显减少;在血清饥饿条件下,表达不携带Ca2+的CHP2的细胞存活数量减少。结论 CHP2能结合2个Ca2+,结合部位在EF3和EF4;携带Ca2+能增强CHP2与NHE1的结合能力;在血清饥饿条件下,携带Ca2+的CHP2能提升细胞抵抗死亡的能力。

关键词：钙调磷酸酶B同源蛋白2 钠氢交换蛋白1 EF-hand Ca2+

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钙调磷酸酶B同源蛋白2核定位对宫颈癌HeLa细胞增殖能力的影响

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中华临床医师杂志（电子版） 2012年第24期6卷 8024-8027页

作者：蔺亚妮李庆华王立洪常国强庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)在细胞核内定位对人宫颈癌HeLa细胞增殖能力的影响。方法将CHP2核输出信号序列(NES)突变,转染HeLa细胞,从而使CHP2定位在细胞核内,采用MTT法检测HeLa细胞的细胞活力的改变;利用软琼脂集落形成实验观... 详细信息

目的研究钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)在细胞核内定位对人宫颈癌HeLa细胞增殖能力的影响。方法将CHP2核输出信号序列(NES)突变,转染HeLa细胞,从而使CHP2定位在细胞核内,采用MTT法检测HeLa细胞的细胞活力的改变;利用软琼脂集落形成实验观察HeLa细胞集落形成大小和数量的变化;通过体内实验观察HeLa细胞在小鼠体内的成瘤能力。结果荧光共聚焦显微镜显示突变型CHP2(CHP2-NESm)主要定位在HeLa细胞的细胞核内和细胞质,而野生型的CHP2主要定位于细胞质;MTT法结果表明转染CHP2-NESm的HeLa细胞的活力显著强于转染野生型CHP2和空载体的细胞;软琼脂集落形成实验结果表明,转染CHP2-NESm的HeLa细胞的集落数量和集落大小均明显大于转染野生型CHP2和空载体的细胞(P<0.05);体内实验结果显示,转染CHP2-NESm的HeLa细胞较转染野生型CHP2的细胞的成瘤能力增强(P<0.05)。结论 CHP2细胞核内的定位对调控HeLa细胞的增殖能力发挥重要的作用。

关键词：核定位信号细胞增殖钙调磷酸酶B同源蛋白2

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原发性骨髓纤维化预后的研究进展

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国际输血及血液学杂志 2012年第5期35卷 454-458页

作者：徐俊卿(综述) 徐泽锋(审校) 肖志坚(审校) 中国医学科学院、北京协和医学院、血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

原发性骨髓纤维化的预后具有明显的异质性。由于国际预后积分系统和动态的国际预后积分系统等的提出，使得对该病的预后判断更为准确，据此制定患者的治疗策略也更趋合理。随着细胞和分子遗传学研究的不断深入，一些新的重要的预后因素... 详细信息

原发性骨髓纤维化的预后具有明显的异质性。由于国际预后积分系统和动态的国际预后积分系统等的提出，使得对该病的预后判断更为准确，据此制定患者的治疗策略也更趋合理。随着细胞和分子遗传学研究的不断深入，一些新的重要的预后因素也得以不断地确认。笔者就该领域的研究现况进行综述。

关键词：原发性骨髓纤维化预后因素预后积分系统

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抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化

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世界最新医学信息文摘（电子版） 2012年第1期12卷 27-31页

作者：金薇娜王建常国强蔺亚妮王立洪李华文高伟李庆华庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本文主要探讨低氧微环境对慢性粒细胞白血病细胞系K562 分化的影响,以及钠氢交换蛋白1(NHE1 )在该过程中的作用.利用低氧模拟物CoCl2 或于低氧(2% O2、5% CO2 和93% N2)环境中培养K562 细胞;应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH 值,瑞士... 详细信息

本文主要探讨低氧微环境对慢性粒细胞白血病细胞系K562 分化的影响,以及钠氢交换蛋白1(NHE1 )在该过程中的作用.利用低氧模拟物CoCl2 或于低氧(2% O2、5% CO2 和93% N2)环境中培养K562 细胞;应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH 值,瑞士染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR 检测基因表达,Western blot 技术检测MAPK 磷酸化水平的改变.结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562 细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/ 增强子结合蛋白(C/EBP α)的mRNA 水平上调.特异性NHE1 抑制剂Cariporide 预处理能够促进低氧诱导的K562 细胞分化.Cariporide 处理后K562 细胞的p38 和ERK5 蛋白激酶磷酸化水平显著增强.结论:低氧及低氧模拟物能够诱导K562 细胞系分化.抑制NHE1 活性协同促进低氧诱导的K562 细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK 蛋白激酶磷酸化水平,从而促进分化.

关键词： NHE1 细胞内pH 值低氧分化 C/EBPα

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