检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2010年第2期18卷 441-444页

作者：胡林萍高瀛岱郑国光师迎旭谢印良刘拥军袁卫平程涛中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究通过携带过氧化氢酶(catalase,CAT)基因的逆转录病毒载体转染人脐带组织源间充质干细胞(UC-MSC),探讨CAT对人UC-MSC增殖以及多向分化潜能的影响。将携带绿色荧光蛋白(GFP)空载体质粒pMSCV-GFP和携带CAT基因的pMSCV-GFP-CAT逆转录... 详细信息

本研究通过携带过氧化氢酶(catalase,CAT)基因的逆转录病毒载体转染人脐带组织源间充质干细胞(UC-MSC),探讨CAT对人UC-MSC增殖以及多向分化潜能的影响。将携带绿色荧光蛋白(GFP)空载体质粒pMSCV-GFP和携带CAT基因的pMSCV-GFP-CAT逆转录病毒载体分别转染体外培养的人UC-MSC,用流式细胞仪分析并分选获得MSC-GFP、MSC-GFP-CAT两种细胞株;用过氧化氢酶检测试剂盒检测上述细胞株和UC-MSC中过氧化氢酶活力;用cell counting kit-8检测转染后细胞的增殖能力;用von Kossa和油红O染色观察成骨和成脂定向诱导分化。结果表明:转染48小时后即可观察到UC-MSC发出绿色荧光,3天后达到稳定状态,随着细胞的传代荧光强度不会减弱。流式细胞仪检测GFP+转染率显示,MSC-GFP为(25.54±8.65)%,MSC-GFP-CAT为(35.4±18.57)%;体外传代培养后检测UC-MSC、MSC-GFP、MSC-GFP-CAT细胞CAT活性分别为:19.5、20.3、67.2U;MSC-GFP-CAT能被诱导分化为成骨和脂肪细胞;携带CAT基因载体转染对UC-MSC的增殖无显著影响(p>0.05)。结论:成功获得高表达CAT的UC-MSC,其CAT的表达水平为对照组的3.4倍,转染对UC-MSC的增殖和分化能力无显著影响,基因转移使UC-MSC保留了成骨和成脂的能力。

关键词：脐带间充质干细胞过氧化氢酶逆转录病毒载体

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同源重组细胞基因敲除与siRNA基因沉默的效果比较

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中国实验血液学杂志 2010年第1期18卷 122-126页

作者：李庆华金薇娜张华梅茹永新庞天翔中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究比较细胞系同源重组基因敲除(gene knockout)与siRNA基因沉默(gene silence)二种技术方法用于研究蛋白功能方面的效果差异。对鸡B淋巴细胞瘤来源的DT40细胞系,应用基因打靶技术分离出Sam68基因缺失的细胞株,并且利用稳定表达siRN... 详细信息

本研究比较细胞系同源重组基因敲除(gene knockout)与siRNA基因沉默(gene silence)二种技术方法用于研究蛋白功能方面的效果差异。对鸡B淋巴细胞瘤来源的DT40细胞系,应用基因打靶技术分离出Sam68基因缺失的细胞株,并且利用稳定表达siRNA的质粒pSilencer-Sam68得到Sam68基因沉默的细胞株。与野生型细胞株相比,对这些细胞株进行Sam68的功能解析。结果表明:Sam68基因缺失细胞表现出明显的生长速度迟缓,通过细胞周期检测揭示这些细胞生长速度延迟是由于细胞周期中的G2/M期延长;但在Sam68基因沉默细胞中却没有看到这些变化。结论:针对活细胞中的蛋白功能研究,应用细胞系基因敲除技术比siRNA基因沉默技术能够得到更加清晰的实验结果。

关键词：基因敲除基因沉默 Sam68 DT40

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对难治性贫血伴环状铁粒幼红细胞联合显著血小板增多的认识现状

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中华血液学杂志 2010年第12期31卷 855-857页

作者：崔蕊肖志坚中国医学科学院、北京协和医院血液学研究所、血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

1999年Gupta等[1]首次提出难治性贫血伴环状铁粒幼红细胞和血小板增多的概念,2001年第3版WHO〈造血组织和淋巴组织肿瘤分类〉提出一种暂定类型疾病＂获得性铁粒幼红细胞性贫血联合血小板增多＂,或称＂难治性贫血伴环状铁粒幼红细胞联合... 详细信息

1999年Gupta等[1]首次提出难治性贫血伴环状铁粒幼红细胞和血小板增多的概念,2001年第3版WHO〈造血组织和淋巴组织肿瘤分类〉提出一种暂定类型疾病＂获得性铁粒幼红细胞性贫血联合血小板增多＂,或称＂难治性贫血伴环状铁粒幼红细胞联合显著血小板增多（RARS-T）＂,并将其归入骨髓增生异常综合征/骨髓增殖性疾病不能分类（MDS/MPD,U）.

关键词：铁粒幼红细胞血小板增多难治性贫血认识现状环状骨髓增殖性疾病骨髓增生异常综合征红细胞性贫血

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间充质干细胞向软骨分化及在软骨修复中应用的研究进展

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国际生物医学工程杂志 2010年第6期33卷 363-366,371页

作者：王立华刘拥军中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

关节软骨是一种负重结缔组织,常因肿瘤、运动、退行性变或老年性疾病造成损伤;然而关节软骨自身修复能力有限,给临床治愈软骨缺损造成了很大困难.近些年出现了多种治疗软骨缺损的方法,包括自体软骨细胞移植、微裂缝和镶嵌成形术,但这些... 详细信息

关节软骨是一种负重结缔组织,常因肿瘤、运动、退行性变或老年性疾病造成损伤;然而关节软骨自身修复能力有限,给临床治愈软骨缺损造成了很大困难.近些年出现了多种治疗软骨缺损的方法,包括自体软骨细胞移植、微裂缝和镶嵌成形术,但这些方法各自都有其局限性.近年来,组织工程软骨成为软骨修复研究的新热点,间充质干细胞（MSCs）是其当前最有前景的种子细胞.就MSCs在体外诱导分化为软骨细胞的培养条件及MSCs在软骨修复中应用的研究进展进行综述.

关键词：间充质干细胞分化软骨修复组织工程

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PHⅡ-7的体内外抗肿瘤活性及机制

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山东医药 2010年第15期50卷 21-23页

作者：李洪强程昕周园胡蕴慧韩勇李巍杨纯正高瀛岱中国医学科学院北京协和医学院血液病医院血液学研究所实验血液学国家重点实验室天津300020

目的研究PHⅡ-7的体内外抗肿瘤活性,为肿瘤的治疗提供新思路。方法采用MTT法检测PHⅡ-7对18种细胞系(其中包括5对敏感肿瘤细胞和相应耐药细胞株)的体外抗肿瘤活性;建立人白血病细胞K562和K562/A02裸鼠移植瘤模型,研究PHⅡ-7的体内抗肿... 详细信息

目的研究PHⅡ-7的体内外抗肿瘤活性,为肿瘤的治疗提供新思路。方法采用MTT法检测PHⅡ-7对18种细胞系(其中包括5对敏感肿瘤细胞和相应耐药细胞株)的体外抗肿瘤活性;建立人白血病细胞K562和K562/A02裸鼠移植瘤模型,研究PHⅡ-7的体内抗肿瘤活性。结果PHⅡ-7对人肿瘤细胞的生长均有抑制作用,IC50为0.35～18.68μmol/L;其对于多药耐药(MDR)类细胞亦显示出较强的抑制作用。PHⅡ-7对耐药肿瘤细胞(K562/A02)移植瘤模型的抑制率为62%,对敏感肿瘤细胞(K562)移植瘤模型的抑制率为52%。结论PHⅡ-7体内外均可抑制肿瘤细胞的生长,其抗耐药肿瘤的作用可能存在多种机制。本研究为肿瘤的治疗提供了新思路。

关键词：多药耐药氧化吲哚衍生物小分子化合物

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不同来源内皮祖细胞培养及其生物学特性比较

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中国组织工程研究与临床康复 2010年第23期14卷 4309-4316页

作者：徐燕孟恒星于珍李长虹邱录贵中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 天津市脐带血造血干细胞库天津市300384

背景:在缺血性疾病中,机体的代偿性反应包括细小动脉形成和血管新生,而内皮祖细胞在其中发挥着重要的作用,参与了机体多种生理、病理性血管重建过程。目前对内皮祖细胞的来源、生物学特性还存在许多争议。目的:分离培养人外周血、脐带... 详细信息

背景:在缺血性疾病中,机体的代偿性反应包括细小动脉形成和血管新生,而内皮祖细胞在其中发挥着重要的作用,参与了机体多种生理、病理性血管重建过程。目前对内皮祖细胞的来源、生物学特性还存在许多争议。目的:分离培养人外周血、脐带血、骨髓以及脐带来源的内皮祖细胞,并对其生物学特性进行比较。方法:采用密度梯度离心法分离人外周血、脐带血以及骨髓单个核细胞进行贴壁培养,脐带来源的内皮祖细胞通过植块贴壁培养或胶原酶消化脐静脉内膜获得的单个核细胞进行贴壁培养。对获得的贴壁细胞进行细胞形态学、增殖活力、细胞周期、免疫表型的检测。结果与结论:①外周血与脐带血来源的贴壁细胞呈长梭形,集落状生长,其上附有成簇圆形细胞,随着培养时间延长,圆形细胞渐脱落,梭形细胞无明显增殖趋势,消化后细胞不能传代;流式显示细胞高表达CD45,部分表达KDR,但不表达CD31。②骨髓和脐带来源的贴壁细胞呈短梭形、多角形;传代后细胞增殖迅速,且细胞形态与增殖活力没有明显下降;多数细胞处于G0/G1期;流式检测显示细胞均不表达CD14、CD45,也不表达CD106、HLA-DR,但高表达CD44、CD90、CD62E、CD73、CD95、CD105;部分表达内皮系标记KDR、vWF;酶消化法获得的脐带内皮祖细胞还表达CD31;共聚焦显微镜扫描显示细胞具有吸收ac-LDL并结合UEA-1的能力。结果说明外周血、脐带血、骨髓与脐带组织中可分离培养出分化程度、增殖活力不同的内皮祖细胞。

关键词：内皮祖细胞分离培养生物学特性骨髓脐带干细胞培养与分化

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骨髓抽提物小粒和单个核细胞分别培养提高间充质干细胞富集效率(英文)

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中国实验血液学杂志 2010年第6期18卷 1552-1559页

作者：邢文刘鹏霞刘蒙杨少光赵钦军李建平卢士红任红英黄颖吴昊刘斌张磊韩忠朝中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所血液病医院国家干细胞工程技术研究中心实验血液学国家重点实验室天津300020

骨髓是间充质干细胞(MSC)的主要来源。在大多数研究中,先用密度梯度离心法分离出单个核细胞(MNC),再将MNC培养得到MSC。然而,近年来的研究显示,这种标准方法分离MSC的效率并不很高。本研究探讨骨髓抽提物小粒是否是造成该法低效的原因... 详细信息

骨髓是间充质干细胞(MSC)的主要来源。在大多数研究中,先用密度梯度离心法分离出单个核细胞(MNC),再将MNC培养得到MSC。然而,近年来的研究显示,这种标准方法分离MSC的效率并不很高。本研究探讨骨髓抽提物小粒是否是造成该法低效的原因及如何更好地从骨髓抽提物小粒中分离出MSC。选取了20例患者,用标准贴壁法培养MNC,用组织块培养法培养骨髓小粒。对于1-10号患者,先从骨髓抽提物中分离得到MNC,再从剩余的骨髓抽提物中过滤出骨髓小粒,比较从MNC和骨髓小粒培养得到的成纤维样细胞的克隆数量和形态;对于11-20号患者,分离顺序正好相反,比较从MNC和骨髓小粒培养得到的贴壁细胞的免疫表型和功能,对剩余的骨髓抽提物也进行了培养。结果表明:骨髓小粒中的贴壁细胞为MSC。如果先过滤出骨髓小粒,再用密度梯度离心法分离出MNC,然后将二者分别进行培养,则可将骨髓抽提物中的MSC完全分离出来。在密度梯度离心法中大多丢掉的骨髓小粒,是骨髓中MSC的又一重要来源。骨髓小粒可用组织块培养法进行培养。结论:将骨髓抽提物小粒和MNC分别培养可以从单次骨髓抽提物中富集更多的MSC。

关键词：间充质干细胞骨髓小粒单个核细胞密度梯度离心组织块培养

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伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病135例远期疗效观察

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白血病．淋巴瘤 2010年第11期19卷 646-650页

作者：周可树王翠翠赵耀中邢立杰钱林生于珍齐军元王建祥邱录贵中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 郑州大学附属肿瘤医院河南省肿瘤医院血液科

目的对伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病（CML）的疗效及安全性进行分析,并初步探讨影响CML患者生存的因素.方法 135例CML患者应用伊马替尼治疗,监测其血常规、染色体核型、bcr-abl p210转录本表达及不良反应.结果中位随访20（3～67）个... 详细信息

目的对伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病（CML）的疗效及安全性进行分析,并初步探讨影响CML患者生存的因素.方法 135例CML患者应用伊马替尼治疗,监测其血常规、染色体核型、bcr-abl p210转录本表达及不良反应.结果中位随访20（3～67）个月.慢性期患者累积获得的完全血液学缓解（CHR）率为97.9%,主要细胞遗传学缓解（MCyR）率为78.3%,完全细胞遗传学缓解（CCyR）率为72.2%,完全分子学缓解（CMoR）率为35.1%,均显著高于加速期及急变期（P＜0.001）.慢性期低危组与高危组之间CCyR率有差异（P=0.048）.慢性期患者1、3和5年总生存（OS）率分别为：（97.8±1.5）%、（95.2±2.4）%、（91.9±3.2）%,疾病无进展生存（PFS）率分别为（92.6±2.7）%、（85.5±3.7）%、（81.3±4.3）%;加速期患者6个月、1、2年OS率分别为：（93.8±6.1）%、（72.5±11.8）%、（64.5±12.9）%,PFS率分别为：（92.3±7.4）%、（64.5±14.7）%、（53.7±15.7）%;急变期患者6、12、19个月OS率分别为：（86.4±7.3）%、（45.4±11.4）%、（19.4±9.8）%,PFS率分别为：（70.1±12.6）%、（37.6±15.6）%、（18.8±15.4）%.慢性期达到CMoR、CCyR的患者与仅达CHR者PFS及OS比较差异均有统计学意义（P≤0.001）;多因素分析显示：耐药是影响慢性期患者PFS（P=0.000,RR=46.744）及OS（P=0.007,RR=20.270）的因素.伊马替尼口服非血液学毒性较轻,患者多可耐受;血液学毒性是减量或停药的主要原因.结论伊马替尼治疗CML慢性期疗效显著优于加速期及急变期;慢性期患者达到CCyR甚至CMoR是获得长期生存的关键,伊马替尼耐药是伊马替尼治疗CML面临的主要问题.

关键词：白血病髓样慢性伊马替尼

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抗CD3/抗CD19微型双功能抗体的构建、表达及活性测定

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中国癌症杂志 2010年第4期20卷 241-246页

作者：李崴范冬梅程昕师锐赞刘荣任思楣王敏杨铭中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 天津医科大学附属肿瘤医院头颈外科天津300060

背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重叠PC... 详细信息

背景与目的:微型双功能抗体是基因工程抗体的一种形式,它具有两个抗原结合位点,可选择性募集效应细胞到靶细胞周围,介导特异性杀伤作用。本实验构建抗CD3/抗CD19微型双功能抗体(diabody)载体,表达纯化后测定其生物学活性。方法:用重叠PCR(overlap PCR)和PCR方法,构建抗CD3/抗CD19 diabody载体,转化感受态大肠埃希菌进行原核表达。表达产物经抗His-tag亲和层析柱分离纯化,12% SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用间接免疫荧光和竞争性免疫荧光结合流式细胞分析技术(FACS)检测生物学活性。结果:基因重组质粒经测序证实序列正确。抗CD3/抗CD19 diabody能够在原核表达系统中进行可溶性表达。12% SDS-PAGE显示28×103和26×103各有一条带,Western blot在28×103显示有条带,与预期相符。表达产物经纯化定量可达5mg/L。FACS检测抗CD3/抗CD19 diabody可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,并能竞争性抑制HIT3a和HIT19a与上述细胞的结合活性。结论:本实验成功构建了抗CD3/抗CD19 diabody,并且能够进行可溶性表达,可与CD19+ Raji细胞和CD3+ Jurkat细胞特异结合,为以后的抗体功能实验奠定了基础。

关键词：基因工程抗体双功能抗体 CD3 CD19 淋巴瘤免疫治疗

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特异性蛋白1在造血细胞分化中的作用

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国际输血及血液学杂志 2010年第2期33卷 140-142页

作者：张轶群(综述) 王建祥(审校) 中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所/血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

特异性蛋白1（Specificity protein1，Sp1）是一种广泛表达的转录因子，在造血细胞中也有表达。研究发现，在造血细胞分化的过程中，Sp1可以调控与分化相关基因的转录，提示Sp1在造血细胞的分化中具有比较广泛的作用。造血系统恶性肿瘤... 详细信息

特异性蛋白1（Specificity protein1，Sp1）是一种广泛表达的转录因子，在造血细胞中也有表达。研究发现，在造血细胞分化的过程中，Sp1可以调控与分化相关基因的转录，提示Sp1在造血细胞的分化中具有比较广泛的作用。造血系统恶性肿瘤往往伴有分化的异常，一些癌蛋白就是通过对Sp1的异常调控而阻滞细胞分化，导致造血细胞的恶变。因此，Sp1的调控异常可能在一些血液恶性肿瘤发病中发挥着作用。本文将对Sp1的结构、转录调控机制及其在造血细胞分化中的作用进行综述。

关键词：转录因子造血细胞分化

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