检索结果-内蒙古大学图书馆

中国实验血液学杂志 2009年第5期17卷 1312-1315页

作者：张晓光杨少光任红英赵钦军韩忠朝中国医学科学院北京协和医学院、血液病医院、血液学研究所、实验血液学国家重点实验室天津300020

本研究探讨胎儿肺部组织来源的间充质干细胞在无血清条件下体外对脐血单个核细胞诱导扩增为巨核细胞的影响。取脐血单个核细胞,在TPO,IL-l1,肝素的扩增体系中分为2组培养。第1组为脐血单个核细胞单独培养,第2组脐血单个核细胞与间充质... 详细信息

本研究探讨胎儿肺部组织来源的间充质干细胞在无血清条件下体外对脐血单个核细胞诱导扩增为巨核细胞的影响。取脐血单个核细胞,在TPO,IL-l1,肝素的扩增体系中分为2组培养。第1组为脐血单个核细胞单独培养,第2组脐血单个核细胞与间充质干细胞共培养,在第7,10,14天时进行活细胞计数,用流式细胞仪分析CD41a和CD61的表达情况。采用免疫组织化学和透射电子显微镜观察第14天细胞的形态与结构,用流式细胞仪分析细胞DNA含量。结果表明,第2组在第10天时获得的CD41+细胞和CD61+细胞数量最多,分别为第1组的4.5倍和4.7倍;但免疫组织化学和电子显微镜显示,2个组的CD41a+和CD61+细胞的核发育不成熟。结论:胎肺间充质干细胞能有效刺激CD41a+和CD61+细胞生成,但不能促进幼巨核细胞核的发育。

关键词：胎肺间充质干细胞脐血单个核细胞巨核细胞

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小鼠β-防御素2与白介素18肿瘤疫苗的协同抗白血病作用研究

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现代免疫学 2009年第1期29卷 40-44页

作者：王淑为马小彤徐玢杨宾霞段永娟林永敏中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

肿瘤免疫方面的最新进展表明,有效的抗肿瘤免疫需要天然免疫和获得性免疫的协同作用。我们在前期工作中成功制备了小鼠β-防御素2(MBD2)和IL-18基因修饰的白血病疫苗,并证实了两种瘤苗的抗白血病作用。为了进一步增强抗肿瘤效果,本实验... 详细信息

肿瘤免疫方面的最新进展表明,有效的抗肿瘤免疫需要天然免疫和获得性免疫的协同作用。我们在前期工作中成功制备了小鼠β-防御素2(MBD2)和IL-18基因修饰的白血病疫苗,并证实了两种瘤苗的抗白血病作用。为了进一步增强抗肿瘤效果,本实验将MBD2和IL-18瘤苗联合应用于小鼠体内,观察是否具有协同抗白血病作用并探索机制。致瘤性实验证实,MBD2与IL-18联合瘤苗对致瘤性的抑制作用明显高于MBD2或IL-18单独瘤苗(P<0.05);免疫保护作用结果显示,联合瘤苗接种组100%小鼠仍可长期存活;治疗实验显示,与MBD2或IL-18单独瘤苗相比,联合瘤苗具有更显著的治疗效果(P<0.05)。上述结果表明,MBD2和IL-18联合瘤苗可协同诱导更有效的抗肿瘤免疫反应和免疫保护作用。机制探讨发现,联合瘤苗能诱导脾脏淋巴细胞的CTL杀伤活性以及IFN-γ产生明显增强。提示,MBD2和IL-18可能协同诱导T细胞增殖,产生IFN-γ,使免疫系统能更有效地杀伤清除白血病细胞。

关键词：小鼠β-防御素2 白细胞介素18 L1210白血病肿瘤疫苗

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杀伤细胞免疫球蛋白样受体及其配体对亲缘供者造血干细胞移植预后的影响

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中国医学科学院学报 2009年第5期31卷 533-537页

作者：王华翟文静王荷花何祎周征赵英新翟卫华张荣莉王玫冯四洲韩明哲中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 烟台毓璜顶医院血液内科烟台264000 中山大学附属第一医院血液内科广州510080

目的检测杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其配体-人类白细胞抗原Ⅰ(HLAⅠ-)基因分布频率,评估两者的相互作用对亲缘供者造血干细胞移植(HSCT)预后的影响。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测87对亲缘供者HSCT供受者(半... 详细信息

目的检测杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)及其配体-人类白细胞抗原Ⅰ(HLAⅠ-)基因分布频率,评估两者的相互作用对亲缘供者造血干细胞移植(HSCT)预后的影响。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)检测87对亲缘供者HSCT供受者(半倍体相合40对,同胞完全相合47对)的HLA-Cw及供者KIR基因型。结果87例正常供者均携带抑制型KIR2DL1、2DL2/L3、2DL4、3DL2和3DL3,基因频率为1;其次是3DL1,基因频率为96.6%;激活型KIR基因频率不一。87例受者的C1表达率为97.7%,而C2、Bw4、HLA-A3/A11的表达率不一。半倍体相合HSCT中KIR-HLA配体不合34例,相合6例;HLA-HLA配体相合31例,不合9例。同胞完全相合HSCT中KIR-HLA配体不合42例,相合5例。KIR-HLA配体不合组移植后2年无病生存率为(71.5±6.5)%,明显高于相合组的(50.0±10.7)%(P<0.05)。结论激活型KIR的基因频率明显低于抑制型KIR基因频率,抑制型KIR2DL1、3DL1、3DL2可能对NK细胞同种反应性起主要作用。KIR-HLA配体不合亲缘供者HSCT患者的无病生存率明显高于KIR-HLA配体相合者。

关键词：杀伤细胞免疫球蛋白样受体人类白细胞抗原Ⅰ类配体亲缘供者造血干细胞移植

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阿糖胞苷刺激Jurkat细胞B7和细胞因子mRNA表达

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中国生化药物杂志 2009年第1期30卷 6-9,13页

作者：杨铭赵英新范冬梅周圆廖晓龙杨纯正中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用。方法阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子... 详细信息

目的探讨B7共刺激分子在T细胞活化和分化中的作用。方法阿糖胞苷(Ara-C)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测刺激前、后B7-1、B7-2的表达,RT-PCR检测刺激前、后B7-1、B7-2基因的表达,检测T细胞表面因子IL-3和IFN-γ的表达以及这两种细胞因子在Ara-C刺激Jurkat细胞后12,24,48,72,96,120,144 h时间动态变化。结果经Ara-C刺激Jurkat细胞后,均能使B7-1、B7-2表达上调,并且可诱导T细胞分泌细胞因子IL-3和IFN-γ,而未经Ara-C刺激的Jurkat细胞,无B7-1、B7-2的表达,均未诱导细胞因子的分泌。IL-3在T细胞活化12 h即可检测到,在48 h表达量最高,IFN-γ在T细胞活化24 h即可检测到,在72 h表达量最高。结论Ara-C可有效地刺激Jurkat细胞B7的表达,有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞。B7在T细胞活化中起着重要作用。

关键词： B7基因 Jurkat细胞系 T细胞细胞因子

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儿童急性淋巴细胞白血病中期因子表达的临床研究

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天津医药 2009年第10期37卷 817-819页

作者：胡蓉华芦颖王建祥竺晓凡李庆华马丽李彬庞天翔中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

目的:检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中期因子(MK)的表达,探讨MK在儿童ALL发病中的意义。方法:应用实时定量PCR(real-timePCR),对124例进展期和缓解期ALL患者、15例正常儿童骨髓标本进行MKmRNA的检测。根据患者初治时外周血白细... 详细信息

目的:检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中期因子(MK)的表达,探讨MK在儿童ALL发病中的意义。方法:应用实时定量PCR(real-timePCR),对124例进展期和缓解期ALL患者、15例正常儿童骨髓标本进行MKmRNA的检测。根据患者初治时外周血白细胞数、年龄、免疫分型及皮质激素预治疗反应等因素把进展期患者分为标危组、中危组和高危组。结果:进展期、缓解期及正常对照组之间MK水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。MKmRNA在B-ALL亚型中表达显著高于T-ALL亚型及正常对照(均P<0.01),而T-ALL与正常对照之间MKmRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。在ALL危险度各分层中,标危组和中危组的MK表达水平明显高于高危组(P<0.01或P<0.05),标危组与中危组之间差异无统计学意义(P=0.32)。MK表达水平与患儿年龄、性别、血浆乳酸脱氢酶等未显示出相关性(均P>0.05)。高白细胞组(WBC≥25×109/L)MK的表达较白细胞不增高组(WBC<25×109/L)明显降低(P<0.05)。结论:MK表达增高在儿童ALL中可能为预后良好的指标。

关键词：细胞因子类白血病,淋巴细胞,急性聚合酶链反应 RNA,信使预后儿童

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骨髓腔内输注人造血干／祖细胞促进NOD-SCID小鼠体内造血功能的恢复

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中国实验血液学杂志 2009年第4期17卷 1010-1015页

作者：孟昭婷高静韬卢士红闫昕李妍涵杨舟郑以州中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020 南开大学医学院天津300071

本研究比较经骨髓腔内输注(intra-bone marrow infusion,iBMI)及静脉输注(intravenous infusion,iVI)人脐血(cord blood,CB)造血干/祖细胞(HS/PC)对NOD-SCID受鼠体内造血重建的影响。将纯化的CBCD34+细胞移植到受亚致死剂量照射的NOD-SCID受鼠体内。受鼠随机分为3组:①iBMI组:骨髓腔内输注CD34+细胞5×105/只;②iVI组:尾静脉输注CD34+细胞5×105/只;③阴性对照组:输注PBS缓冲液。于异种移植后第3、5及第8周通过流式细胞术、聚合酶链式反应、免疫组织化学及造血祖细胞集落分析的方法比较人造血系统各系细胞植入率,通过二次移植实验比较NOD-SCID受鼠体内人HS/PC长期造血重建能力。结果表明:移植后第8周,iB-MI组受鼠骨髓、外周血及脾脏中人CD45+细胞比例均显著高于iVI组(p<0.05);iBMI组及iVI组移植的HS/PC均具有多向分化能力;移植后第8周,iBMI组受鼠骨髓中CD45+CD19+细胞、CD45+CD33+细胞、CD45+CD56+细胞及CD45+CD34+细胞比例均显著高于iVI组(p<0.05),CD45+CD14+细胞及CD45+CD41a+细胞比例亦高于iVI组(p>0.05)。iVI组及iBMI组长期存活受鼠的肝脏、脾脏、肺脏、外周血、骨髓细胞中均可检测到人17号染色体α-卫星特异性片段。应用免疫组织化学法在移植后第8周的iBMI组受鼠的脾脏、肝脏和肺脏中均可检出人CD45抗原的表达。iBMI组受鼠的骨髓细胞各系集落总数于移植后第8周显著高于iVI组(p<0.05)。二次移植后第6周,iVI组及iBMI组受鼠的各组织脏器中均可检出人17号染色体α-卫星特异性片段的表达。结论:与iVI相比,经iBMI移植人CBCD34+细胞至NOD-SCID受鼠可以促进HS/PC的造血重建及多向分化,提高植入率。

关键词：造血干/祖细胞异种移植骨髓腔内输注造血重建 NOO-SCID小鼠

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人黑色素瘤细胞裸鼠肺转移模型的建立

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中国实验动物学报 2009年第1期17卷 1-4,I0001页

作者：张永慈周圆杨铭范冬梅熊冬生杨纯正中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020

目的建立整合素αvβ3高表达的黑色素瘤细胞肺转移模型。方法通过将不同数目的M21细胞经尾静脉接种裸鼠,适时处死后计数肺表面癌结节。通过实时定量PCR和明胶酶谱的方法比较肺转移灶细胞与亲代M21细胞差异。结果M21细胞1×106、2... 详细信息

目的建立整合素αvβ3高表达的黑色素瘤细胞肺转移模型。方法通过将不同数目的M21细胞经尾静脉接种裸鼠,适时处死后计数肺表面癌结节。通过实时定量PCR和明胶酶谱的方法比较肺转移灶细胞与亲代M21细胞差异。结果M21细胞1×106、2×106、5×106尾静脉接种裸鼠,均能形成肺转移灶,癌结节数目均值分别为:84±8、70±6、88±12,三组之间没有明显差异,阴性对照组未形成转移灶。M21肺转移灶细胞与亲代细胞相比,增殖增快,MMP-2活性增高,整合素αv和β3mRNA表达水平明显增高。结论M21细胞1×106经尾静脉接种裸鼠50d内即可100%成瘤。M21肺转移灶细胞具有更快的增殖能力,整合素αvβ3和MMP-2表达水平明显增高。本实验建立了稳定的肺转移模型,为黑色素瘤和整合素αvβ3的研究提供重要的动物模型。

关键词：黑色素瘤肺转移整合素αvβ3

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人脐带间充质干细胞分离培养条件的优化及其生物学特性

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第32期13卷 6289-6294页

作者：徐燕李长虹孟恒星郝牧邱录贵中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津市300020 天津市脐带血造血干细胞库天津市300384

背景:由于大量获取骨髓细胞存在困难,并且骨髓间充质干细胞随年龄的增加出现数量及分化潜能下降,因此需要寻找其他间充质干细胞来源。目的:优化人脐带间充质干细胞的分离培养条件,进一步明确其生物学特性。设计、时间及地点:细胞学体外... 详细信息

背景:由于大量获取骨髓细胞存在困难,并且骨髓间充质干细胞随年龄的增加出现数量及分化潜能下降,因此需要寻找其他间充质干细胞来源。目的:优化人脐带间充质干细胞的分离培养条件,进一步明确其生物学特性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006-09/2008-03在中国医学科学院血液学研究所国家重点实验室完成。材料:17份脐带标本取自健康足月新生儿,由天津市中心妇产医院提供。方法:脐带采集后在6h内分别用植块法、胶原酶消化法、胶原酶与胰酶联合消化法进行分离培养,于培养第14天计数集落数,超过50个细胞计为集落。当细胞达70%～80%融合时,胰蛋白酶-乙二胺四乙酸混合消化,以(2.5～5.0)×103/cm2密度传代培养。主要观察指标:比较不同培养方法所获贴壁细胞的形态学特征、细胞产率,应用流式细胞技术分析细胞增殖活性、免疫表型,特异性染色方法鉴定细胞的多向分化潜能。结果:植块法培养6～10d可见成纤维样细胞从植块边缘爬出,形态与骨髓间充质干细胞相似,散在分布或形成小克隆,原代可获得(5.2±1.7)×105个贴壁细胞/0.5cm脐带组织,至少可稳定传15代,平均每代扩增6.2倍,在原代细胞克隆数、细胞产率、传代时间及扩增倍数上与胶原酶消化法比较存在明显差异(P<0.05);而胶原酶与胰酶联合消化法接种后未见明显贴壁细胞。人脐带间充质干细胞的倍增时间为45h,72.09%细胞处于G0/G1期,不表达造血细胞及内皮细胞标记,高表达整合素和黏附分子CD44,CD90,CD95以及CD73,CD105,在特定诱导条件下,人脐带间充质干细胞能够向成骨及成脂肪细胞方向分化。结论:应用植块法可以从人脐带组织中简便高效地分离出一群具有高增殖活性及多向分化潜能的间充质干细胞,其免疫表型类似于骨髓间充质干细胞。

关键词：脐带间充质干细胞植块法分离培养生物学特性

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腺病毒递送BMI-1shRNA

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中国实验血液学杂志 2009年第5期17卷 1278-1282页

作者：陈振萍陈晓梨郑杰首都医科大学附属北京儿童医院血液病中心北京100045 中国医学科学院、北京协和医学院血液学研究所、血液病医院、实验血液学国家重点实验室天津300020

近年来发展了一些质粒载体介导shRNA的转录,然后在细胞酶的作用下加工成功能性的siRNAs。虽然这些载体较化学合成的siRNA有更多的优点,但仍存在相当多的缺点,如转染效率低和不能在体内使用。本研究建立一种没有上述缺点的腺病毒递送Bmih... 详细信息

近年来发展了一些质粒载体介导shRNA的转录,然后在细胞酶的作用下加工成功能性的siRNAs。虽然这些载体较化学合成的siRNA有更多的优点,但仍存在相当多的缺点,如转染效率低和不能在体内使用。本研究建立一种没有上述缺点的腺病毒递送BmihRNAs系统,设计靶向人Bmi-1的载体。以pAdTrackCMV质粒为模板扩增CMV-GFP表达盒,从pGE1BMIhRNA质粒上酶切下U6-BMI-1shRNA表达盒,克隆它们入穿梭质粒pShuttle中,然后与pAdEasy-1质粒基因重组产生腺病毒质粒pAd-BMIhRNA-CVM-GFP,转染293A包装细胞,收获病毒。病毒感染K562细胞后,在mRNA和蛋白水平上分别用RealTime-PCR和Westernblot检测BMI的表达水平。结果表明:成功构建了pGE1BMIhRNA腺病毒质粒并有效包装出病毒。感染BmihRNA腺病毒的K562细胞在mRNA和蛋白水平上均显著下调了Bmi-1的表达,而对照病毒没有明显的效果。结论:腺病毒是一种有效递送siRNA入哺乳动物细胞的载体。腺病毒递送siRNA载体可能成为siRNA药物的基因治疗载体。

关键词：腺病毒载体短发夹RNA k562细胞系

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慢性髓系白血病实时定量PCR检测的Bcr-Abl水平与临床状态关系的分析

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中国实验血液学杂志 2009年第4期17卷 861-865页

作者：王国蓉于珍赵耀中李增军李长虹钱林生邱录贵中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院实验血液学国家重点实验室天津300020 首都医科大学附属北京朝阳医院血液科北京100020

本研究分析bcr-abl阳性慢性髓系白血病患者实时定量PCR检测的转录本水平与临床状态的关系,以便为根据bcr-abl转录本水平的绝对值合理预测患者状态提供一些基础。采用实时定量PCR方法检测30例初诊慢性髓系白血病患者治疗前骨髓标本的bcr-... 详细信息

本研究分析bcr-abl阳性慢性髓系白血病患者实时定量PCR检测的转录本水平与临床状态的关系,以便为根据bcr-abl转录本水平的绝对值合理预测患者状态提供一些基础。采用实时定量PCR方法检测30例初诊慢性髓系白血病患者治疗前骨髓标本的bcr-abl/abl比值(%),分析获得bcr-abl阳性患者bcr-abl/abl的基线值;再检测82例患者不同时间点161份骨髓标本,比较各标本的bcr-abl/abl值相对于基线值的水平以及与该时间点患者的临床状态的关系。结果表明,初诊患者治疗前bcr-abl/abl(%)值呈正偏态分布,变异范围较大:中位值13.5631(1.0206-98.3159),算术平均值21.1491(95%CI:12.3532-29.9450),为严格判断治疗后的相对变化,因此用以参比的bcr-abl/abl(%)基线值确定为低限值,即1。在161例次标本中,bcr-abl/abl(%)高于基线值(≥1)的有33例次,其中耐药/复发/病情进展的13例次(39.4%,13/33),治疗后未缓解/尚未缓解的17例次(51.5%,17/33),完全血液学缓解的3例次(9.1%,3/33);较基线值下降0-1数量级(0.1≤bcr-abl/abl%<1)的有26例次,其中耐药/复发/病情进展的6例次(23.1%,6/26),治疗后未缓解/尚未缓解的7例次(26.9%,7/26),完全血液学缓解的7例次(26.9%,7/26),遗传学缓解的6例次(23.1%,6/26);较基线值下降1-2数量级(0.01≤bcr-abl/abl%<0.1)的19例次,其中治疗后未缓解/尚未缓解的2例次(10.5%,2/19),完全血液学缓解的3例次(15.8%,3/19),遗传学缓解(CyR)的14例次(73.7%,14/19);较基线值下降2-3数量级(0.001≤bcr-abl/abl%<0.01)的7例次,其中主要遗传学缓解(MCyR)的2例次(28.6%,2/7),完全遗传学缓解(CCyR)的5例次(71.4%,5/7);较基线值下降3个数量级以上(bcr-abl/abl%<0.001)的76例次,均为CCyR。结论:利用单次检测值较基线值下降的程度能较好判断患者该时点的临床状态;bcr-abl/abl%<0.01能可靠地反映患者获得CyR,而bcr-abl/abl%<0.001能反映患者获得CCyR。然而,患者疾病状态的判断仍以动态连续检测为佳。

关键词：实时定量PCR bcr—abl 慢性髓系白血病临床状态

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