检索结果-内蒙古大学图书馆

中国比较医学杂志 2021年第9期31卷 90-97页

作者：卢天宇高虹杨博超于佳楠徐亚新王若琳秦川中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的利用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)技术,对猪基因组中猪内源逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)拷贝数测定方法进行优化,建立PERV拷贝数的检测方法。方法采用Taq Man探针双重dd PCR方法,分别以甘油醛-3-... 详细信息

目的利用微滴式数字PCR(droplet digital PCR,dd PCR)技术,对猪基因组中猪内源逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)拷贝数测定方法进行优化,建立PERV拷贝数的检测方法。方法采用Taq Man探针双重dd PCR方法,分别以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFRC)为内参基因,确定对PERV拷贝数检测反应最适合退火温度和反应循环数。另外,通过对浓度梯度稀释的标准品质粒和猪细胞基因组进行检测,以确定最适模板浓度。采用dd PCR和q PCR两种方法测定来自猪源细胞系和巴马小型猪组织中PERV的拷贝数,比较两种检测方法的稳定性。结果基于dd PCR技术检测PERV拷贝数的最适退火温度为59.9℃,最佳反应循环数为50;模板基因组的最适浓度在1.25~7.5 ng;检测同一样品来源基因组中PERV的拷贝数的变异系数在0.44%~8.29%。结论本研究建立了基于dd PCR技术的PERV拷贝数的检测方法并系统的探索了最佳实验条件,与传统的q PCR相比,该方法具有更高的准确性和可重复性,为异种移植研究中供体动物基因组PERV拷贝数的测定提供了灵敏的方法和可靠依据。

关键词：微滴式数字PCR 猪内源逆转录病毒拷贝数绝对定量

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基于微滴式数字PCR技术对猪内源逆转录病毒拷贝数的检测方法的建立及应用

基于微滴式数字PCR技术对猪内源逆转录病毒拷贝数的检测方法的建...

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第十六届中国实验动物科学年会

作者：卢天宇高虹杨博超于佳楠徐亚新王若琳秦川中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室

目的利用微滴式数字PCR (droplet digital PCR,ddPCR)技术,对猪基因组中猪内源逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)拷贝数测定方法进行优化,建立PERV拷贝数的检测方法。方法采用TaqMan探针双重ddPCR方法 ,分别以GAPDH和TFR... 详细信息

目的利用微滴式数字PCR (droplet digital PCR,ddPCR)技术,对猪基因组中猪内源逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)拷贝数测定方法进行优化,建立PERV拷贝数的检测方法。方法采用TaqMan探针双重ddPCR方法 ,分别以GAPDH和TFRC为内参基因,确定对PERV拷贝数检测反应最适合退火温度和反应循环数。另外,通过对浓度梯度稀释的标准品质粒和猪细胞基因组进行检测,以确定最适模板浓度。采用ddPCR和qPCR两种方法测定来自猪源细胞系和巴马小型猪组织中PERV的拷贝数,比较两种检测方法的稳定性。结果基于ddPCR技术检测PERV拷贝数的最适退火温度为59.9℃,最佳反应循环数为50;模板基因组的最适浓度在1.25-7.5ng;检测同一样品来源基因组中PERV的拷贝数的变异系数在0.44%至8.29%之间。结论本研究建立了基于ddPCR技术的PERV拷贝数的检测方法并系统的探索了最佳实验条件,与传统的qPCR相比,该方法具有更高的准确性和可重复性,为异种移植研究中供体动物基因组PERV拷贝数的测定提供了灵敏的方法和可靠依据。

关键词：微滴式数字PCR 猪内源逆转录病毒拷贝数绝对定量

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小鼠肺间充质干细胞的分离、培养和鉴定

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中国比较医学杂志 2021年第8期31卷 16-20页

作者：石桂英黄艺滢雷雪裴路亚岚白琳中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的建立稳定的小鼠肺间充质干细胞分离、培养、鉴定技术,利用小鼠肺间充质干细胞研究肺组织修复和再生机制。方法无菌分离小鼠肺,采用胶原酶消化和组织贴壁法分离培养肺间充质干细胞,观察细胞形态和生长特性,流式分析细胞表面标记,进... 详细信息

目的建立稳定的小鼠肺间充质干细胞分离、培养、鉴定技术,利用小鼠肺间充质干细胞研究肺组织修复和再生机制。方法无菌分离小鼠肺,采用胶原酶消化和组织贴壁法分离培养肺间充质干细胞,观察细胞形态和生长特性,流式分析细胞表面标记,进行体外成脂、成骨诱导分化。结果两种方法都成功分离培养了肺间充质干细胞,流式分析显示Sca-1、CD90、CD29、CDCD44均为高表达,CD31、CD45均为低表达。体外诱导后,肺间充质干细胞可以分化成脂肪细胞和成骨细胞。结论本研究利用两种方法分离培养小鼠肺间充质干细胞,两种分离方法获得的细胞均具有间充质干细胞类似的表面标记物,具有成脂、成骨分化能力。

关键词：肺间充质干细胞流式分析诱导分化

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白细胞介素-37在流感病毒感染导致的重症肺炎中作用的研究进展

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中国实验动物学报 2021年第1期29卷 99-103页

作者：刘明娅戚菲菲鲍琳琳中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,流感病毒感染机体过程中,常因免疫反应过度促使细胞因子大量分泌,形成细胞因子风暴,导致肺损伤、肺衰竭甚至死亡。流感病毒感染导致的重症肺炎是流感患者死亡的重要原因之一,目前临床上用于流... 详细信息

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病,流感病毒感染机体过程中,常因免疫反应过度促使细胞因子大量分泌,形成细胞因子风暴,导致肺损伤、肺衰竭甚至死亡。流感病毒感染导致的重症肺炎是流感患者死亡的重要原因之一,目前临床上用于流感治疗的药物主要是抗病毒药物,通常不能调控机体的过度免疫反应,也不能减轻肺部的炎症损伤。白细胞介素-37(interleukin-37,IL-37)是新发现的白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)家族的成员,具有强大的抑炎功能,通过抑制多种炎症因子的分泌阻止细胞因子风暴的发生,在感染性疾病、自身免疫病及肿瘤等疾病中发挥重要的作用。因此,若能将IL-37的抗炎作用运用到H1N1流感病毒感染导致的重症肺炎治疗中,无疑给重症肺炎的治疗提供新的思路。

关键词：流感病毒重症肺炎细胞因子风暴 IL-37

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CD32在艾滋病潜伏感染恒河猴模型的表达特征

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中国比较医学杂志 2021年第5期31卷 15-21页

作者：张京京童玲陆佳涵卢秋翰丛喆薛婧北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

目的通过建立SIVmac239潜伏感染恒河猴模型,研究CD32在静息型、活化型和/或记忆性CD4^(+)T细胞亚群的表达特征,并分析其作为艾滋病潜伏库标志物的可能。方法 SIVmac239慢性感染的恒河猴给予联合抗逆转录病毒疗法,建立SIVmac239潜伏感染... 详细信息

目的通过建立SIVmac239潜伏感染恒河猴模型,研究CD32在静息型、活化型和/或记忆性CD4^(+)T细胞亚群的表达特征,并分析其作为艾滋病潜伏库标志物的可能。方法 SIVmac239慢性感染的恒河猴给予联合抗逆转录病毒疗法,建立SIVmac239潜伏感染恒河猴模型。利用该模型,检测各阶段样本中血浆病毒载量、CD4^(+)T细胞计数、CD4/CD8细胞比值,及CD32在不同CD4^(+)T细胞亚群中的表达变化。结果同感染前相比,CD32在SIV感染后处于活化状态的幼稚T细胞中表达增加,在HLA-DR^(+)CD4^(+)T细胞中表达增加,但CD32在静息型CD4^(+)T细胞和各静息型记忆性T细胞亚群的表达无显著差异。结论本研究为CD32不是艾滋病潜伏库标记物这一观点提供数据支持,并为后续艾滋病治愈研究提供信息。

关键词： CD32 恒河猴潜伏库动物模型 T细胞亚群

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诱导刺激猴外周血单核淋巴细胞亚群活化增殖研究

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中国比较医学杂志 2021年第5期31卷 1-6页

作者：李国萃陆佳涵卢秋翰杨晨波丛喆魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

目的比较不同诱导刺激剂对T细胞活化标志物CD69、CD38、HLA-DR和核内增殖标记Ki67的表达量的影响,为研究T细胞激活功能和作用研究提供依据。方法采集健康恒河猴外周血,分离PBMC,分别加入常规剂量的PMA+Ionomycin、α-CD2/α-CD3/α-CD28... 详细信息

目的比较不同诱导刺激剂对T细胞活化标志物CD69、CD38、HLA-DR和核内增殖标记Ki67的表达量的影响,为研究T细胞激活功能和作用研究提供依据。方法采集健康恒河猴外周血,分离PBMC,分别加入常规剂量的PMA+Ionomycin、α-CD2/α-CD3/α-CD28和PHA-P+IL-2,在不同的时间点检测CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞表面标志物CD69、CD38、HLA-DR和核内增殖标记Ki67表达情况。结果流式细胞术结果表明,在刺激剂作用72 h时,与其它两种刺激剂相比,α-CD2/α-CD3/α-CD28刺激后的CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞上的CD69和Ki67表达量更高,HLA-DR^(+)CD4^(+)T细胞和HLA-DR^(+)CD8^(+)T细胞的比例与另外两组组间比对无差异,同时CD38^(+)CD4^(+)T细胞和CD38^(+)CD8^(+)T细胞的比例在α-CD2/α-CD3/α-CD28与PHA-P+IL-2组间比较无统计学差异(P>0.05);在PMA+Ionomycin刺激下,检测到上述四种分子的表达量都很低。结论 CD2/α-CD3/α-CD28活化T细胞效果最佳,PHA-P+IL-2次之,PMA+Ionomycin作用弱。在选择T细胞活化作用程度方面,可进行针对性选择。

关键词： PBMC 活化 PMA+Ionomycin α-CD2/α-CD3/α-CD28 PHA-P+IL-2 CD69 CD38 HLA-DR Ki67

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保存条件对恒河猴CD8^(+)T细胞活性的影响

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中国比较医学杂志 2021年第4期31卷 33-37页

作者：罗嘉慧卢秋翰李国萃张京京丛喆魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京100021

目的通过细胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining,ICS)检测CD8^(+)T细胞反应强度,探究不同保存条件对CD8+T细胞活性影响。方法采集9只恒河猴外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),一部分新鲜细胞直接用于检测,剩余细胞冻存至... 详细信息

目的通过细胞内细胞因子染色(intracellular cytokine staining,ICS)检测CD8^(+)T细胞反应强度,探究不同保存条件对CD8+T细胞活性影响。方法采集9只恒河猴外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),一部分新鲜细胞直接用于检测,剩余细胞冻存至-80℃和液氮,冻存1周和1年再用于检测,检测时用阳性刺激物进行刺激,流式分析活细胞比例,MIP-1β、TNF-α、IL-2、IFN-γ四种细胞因子分泌情况和细胞脱粒标志物CD107a的表达情况。结果随着冻存时间的增加,细胞存活率降低,且液氮冻存比-80℃冻存有更高的存活率。在细胞因子分泌和细胞脱粒标志物CD107a的表达情况中,冻存一年的细胞MIP-1β、TNF-α分泌量显著高于正常细胞,细胞状态发生了改变,冻存一周的细胞与新鲜细胞状态更为相近。结论想要保持低的细胞死亡率和正常的CD8+T细胞反应,应使用新鲜细胞或短期冻存的细胞进行测量CD8^(+)T细胞反应水平的实验。

关键词：细胞内细胞因子染色 CD8^(+)T细胞细胞活性恒河猴

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新型冠状病毒(SARS-CoV-2)在三文鱼食材中的活性

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中国比较医学杂志 2021年第2期31卷 98-101页

作者：吕琦刘明娅戚菲菲龚姝然周沙沙鲍琳琳中国医学科学院医学实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心国家卫生健康委员会人类疾病比较医学重点实验室新发再发传染病动物模型研究北京市重点实验室北京市人类重大疾病实验动物模型工程技术研究中心国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

目的研究SARS-CoV-2粘附在三文鱼肉上的活性保持情况,为科学防控冠状病毒提供理论依据。方法检测在4℃和22℃条件下,粘附在三文鱼肉上和4%Na Cl仿海盐水中SARS-CoV-2病毒的活性情况。结果4℃条件下,三文鱼表面病毒活性可保持4 d,4%Na C... 详细信息

目的研究SARS-CoV-2粘附在三文鱼肉上的活性保持情况,为科学防控冠状病毒提供理论依据。方法检测在4℃和22℃条件下,粘附在三文鱼肉上和4%Na Cl仿海盐水中SARS-CoV-2病毒的活性情况。结果4℃条件下,三文鱼表面病毒活性可保持4 d,4%Na Cl仿海盐水中病毒活性可保持7 d,1 d内病毒活性均衰减超过50%。22℃条件下,三文鱼表面病毒活性可维持1 d,4%Na Cl仿海盐水中病毒活性可维持2 d,1 d内病毒活性衰减均超过50%。结论4℃~22℃条件下,三文鱼表面SARS-CoV-2病毒可存活1~4 d,4%仿海盐水中SARS-CoV-2病毒可存活2~7 d。

关键词： SARS-CoV-2 三文鱼活性 4%Na Cl仿海盐水

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动物生物安全实验室管理和技术要点

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中国比较医学杂志 2020年第3期30卷 94-97页

作者：魏强北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室北京100021

动物生物安全实验室的管理分两条路径进行,一是行政管理路径,由单位授权的部门管理;二是兽医技术路径,是通过兽医巡检管理。两条路径各负其责,又相互配合,覆盖生物安全所有环节。由于动物感染实验的活动越来越多,用于病原性研究的动物... 详细信息

动物生物安全实验室的管理分两条路径进行,一是行政管理路径,由单位授权的部门管理;二是兽医技术路径,是通过兽医巡检管理。两条路径各负其责,又相互配合,覆盖生物安全所有环节。由于动物感染实验的活动越来越多,用于病原性研究的动物种类跨度也越来越大,远远超过经典"实验动物"的种类,比如蝙蝠、野鸟、蜱虫和各种患病的源头动物,动物实验生物安全问题伴随而来,使得实验室管理和技术要求难度加大,有时甚至觉得无从管理。动物生物安全实验室的管理中,往往发现管理责任和技术要求主体不十分清楚。该文就有关问题进行了讨论并提出一些建议,供管理人员和使用人员参考。

关键词：动物实验生物安全管理

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C57BL/6J、BALB/c、ICR品系小鼠学习记忆能力的行为学差异

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中国比较医学杂志 2020年第8期30卷 63-69页

作者：李祥磊孙秀萍北京协和医学院比较医学中心中国医学科学院医学实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室国家中医药管理局人类动物模型三级实验室北京100021

目的比较C57BL/6J、BALB/c、ICR品系小鼠学习记忆能力的行为学差异。方法按品系将10周雄性C57BL/6J、BALB/c、ICR品系小鼠分为三组,每组10只,进行旷场实验、Barnes迷宫实验、Y迷宫实验、条件恐惧实验,比较三个品系小鼠学习记忆能力。结... 详细信息

目的比较C57BL/6J、BALB/c、ICR品系小鼠学习记忆能力的行为学差异。方法按品系将10周雄性C57BL/6J、BALB/c、ICR品系小鼠分为三组,每组10只,进行旷场实验、Barnes迷宫实验、Y迷宫实验、条件恐惧实验,比较三个品系小鼠学习记忆能力。结果旷场实验,C57BL/6J组总移动距离、大移动距离、速度、中央区移动距离百分比、中央区停留时间少于ICR组和BALB/c组,差异具有统计学意义(P<0.01、P<0.05);C57BL/6J组小运动移动距离多于ICR组和BALB/c组,差异具有统计学意义(P<0.01、P<0.01);Barnes迷宫实验测试阶段,C57BL/6J组与ICR组在目标区域停留时间大于BALB/c组,差异具有统计学意义(P<0.01、P<0.05)。Y迷宫实验三组小鼠自发转换率,进臂停留时间与次数等差异均无统计学意义。条件恐惧实验中三组小鼠僵直时间百分比差异均无统计学意义。结论三个品系中,C57BL/6J小鼠自发活动最低,旷场实验焦虑水平最高,空间参考记忆优于ICR组和BALB/c小鼠,三个品系空间工作记忆及空间识别记忆无显著性差异。

关键词：小鼠行为学实验学习记忆

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