检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2019年第1期32卷 20-24,28页

作者：龙琼郝嘉茂徐盟毕研伟肖红剑李智华闫玲梅丁晨李育中姚月婷寸韡中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学海源学院云南昆明650106 吉林省万通药业四川分公司四川宜宾644000

目的原核表达、纯化树鼩干细胞生长因子(stem cell factor,SCF),并检测其免疫原性。方法根据GenBank预测的树鼩SCF基因序列设计引物,PCR扩增SCF基因,克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-SCF,转化大肠埃希菌BL2... 详细信息

目的原核表达、纯化树鼩干细胞生长因子(stem cell factor,SCF),并检测其免疫原性。方法根据GenBank预测的树鼩SCF基因序列设计引物,PCR扩增SCF基因,克隆至原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-SCF,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白经Ni柱纯化后,免疫家兔,Western blot和ELISA法检测其免疫原性,并检测SCF在树鼩不同组织中的分布情况。结果重组表达质粒pET-30a(+)-SCF经酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为34 500,表达量约占菌体总蛋白的35. 6%,以包涵体形式存在;纯化后的重组蛋白纯度达90%以上,可与兔抗人SCF多克隆抗体特异性结合,且免疫原性良好,抗血清效价为1∶256 000。在鼻、气管、肺、脾、肾、食管中能检测到SCF的分布。结论在大肠埃希菌中高效表达了重组SCF蛋白,纯化复性后具有良好的免疫原性。

关键词：树鼩干细胞生长因子原核表达纯化免疫原性

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CV-A16疫苗候选株 K168-8Ac 低温连续传代效果的评价

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中国病毒病杂志 2019年第2期9卷 130-134页

作者：谢天宏宋霞杨婷李华龙润乡岳磊张也何鑫王正鑫谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的通过对柯萨奇A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)K168-8Ac毒株低温连续传代后的生长稳定性和免疫原性进行评价,为柯萨奇A组16型减毒疫苗的研究提供指导。方法用本科室筛选的CV-A16疫苗候选株K168-8Ac在KMB17细胞上32℃连续传代到... 详细信息

目的通过对柯萨奇A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)K168-8Ac毒株低温连续传代后的生长稳定性和免疫原性进行评价,为柯萨奇A组16型减毒疫苗的研究提供指导。方法用本科室筛选的CV-A16疫苗候选株K168-8Ac在KMB17细胞上32℃连续传代到第80代(P80),从中选取8个代次的病毒P35、P40、P50、P60、P64、P66、P69、P80,分别进行感染性滴度检测,然后用这8个代次的病毒原液分别免疫BALB/c小鼠,初次免疫后60 d进行加强免疫,于初次免疫后28 d、60 d及加强免疫后7 d、21 d进行采血;同时选取第80代的病毒进行10倍系列稀释至10^(-7),分别用原液和10倍系列稀释的8个稀释度的病毒(即7.75 lgCCID_(50)/ml～1.75 lgCCID_(50)/ml)免疫BALB/c小鼠,初次免疫后第28天进行加强免疫,于初次免疫后28 d、加强免疫后7 d、加强免疫后21 d采血,用体外微量细胞病变法进行中和抗体效价检测。结果 K168-8Ac毒株在32℃条件下在KMB17细胞上连续传代后,8个代次的病毒均有较高的感染性滴度,感染性滴度在7.37 lgCCID_(50)/ml～7.75 lgCCID_(50)/ml间波动(平均为7.56 lgCCID_(50)/ml),表明其增殖特性较稳定。8个代次的病毒免疫小鼠后抗体效价及抗体阳转率之间差异均无统计学意义,初次免疫28 d(一次免疫)中和抗体效价GMT仅为1∶27.1(1∶11～1∶64),但初次免疫60 d时GMT比初次免疫28 d增长了2.0倍,达到1∶54.3;加强免疫后7 d、21 d GMT为1∶422.0和1∶1 140.0,分别比初次免疫28 d增长了15.6倍及42.1倍。用P80的病毒以7.75 lgCCID_(50)～1.75 lgCCID_(50)的剂量免疫小鼠,其中和抗体效价随感染剂量的降低而降低;初次免疫后第28天,7.75 lgCCID_(50)及6.75 lgCCID_(50)两个病毒剂量的中和抗体效价GMT分别为1∶32及1∶14,而5.75 lgCCID_(50)以下的剂量全部阴性;加强免疫后7 d及21 d,病毒含量低至4.75 lgCCID_(50)的GMT仍能达到1∶11,但低于3.75 lgCCID_(50)则为阴性,加强免疫后7 d及21 d,平均中和效价均小于1∶4;P80的病毒初次免疫后第28天加强免疫,加强免疫后7 d及21 d中和抗体GMT为1∶1 552、 1∶2 048;初次免疫后60 d加强免疫组,加强免疫后7 d及21 d GMT为1∶294.1、 1∶1 176.3。结论柯萨奇病毒A组16型K168-8Ac 32℃低温连续传代后具有良好的生长稳定性和免疫原性。

关键词：柯萨奇病毒A组16型疫苗低温传代感染性滴度中和抗体效价

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登革病毒1型Ⅰ～Ⅴ基因亚型的基因组差异分析

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中国生物制品学杂志 2019年第2期32卷 152-156页

作者：文送娇陈曦洪珊席珏敏王晓丹陈俊英潘玥叶超管娇琼林垚孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分析登革病毒1型(Dengue virus type 1,DENV-1)Ⅰ～Ⅴ基因亚型基因组全长核苷酸及氨基酸序列差异。方法通过GenBank搜索DENV-1 5个不同基因亚型的全长基因组序列,获得其相应的氨基酸序列。采用BIOEDIT软件,统计基因亚型间核苷酸突... 详细信息

目的分析登革病毒1型(Dengue virus type 1,DENV-1)Ⅰ～Ⅴ基因亚型基因组全长核苷酸及氨基酸序列差异。方法通过GenBank搜索DENV-1 5个不同基因亚型的全长基因组序列,获得其相应的氨基酸序列。采用BIOEDIT软件,统计基因亚型间核苷酸突变和氨基酸替代位点,分析其相似度,通过RNA二级结构在线预测网站预测DENV-1不同亚型间3′UTR的二级结构差异,蛋白结构在线预测网站预测主要流行于中国的Ⅰ及ⅤDENV-1基因亚型结构蛋白的二级结构,对其氨基酸组成及编码序列中可能存在的蛋白结合区域等进行差异分析。结果DENV-1 5个基因亚型核苷酸相似性为91. 40%～94. 50%,氨基酸序列相似性为97. 11%～98. 38%,5个基因亚型各自编码3 392个氨基酸,其中共有195个位点有氨基酸的变化。DENV-1不同亚型的3′UTR的二级结构各不相同。DENV-1基因型为Ⅰ、Ⅴ的775个氨基酸中占组成比例最多的均是苏氨酸(T),Ⅰ型可能的蛋白结合位点有26个,多聚核苷酸结合位点有9个。Ⅴ型可能的蛋白结合位点有24个,多聚核苷酸结合位点有7个。他们均有相同数量的螺旋和跨膜螺旋。结论通过对DENV-1 5个不同的基因亚型的全长核苷酸和氨基酸序列的比较分析,及Ⅰ、Ⅴ基因亚型结构蛋白二级结构的预测,为研究DENV-1不同基因型之间的生物学和致病性差异提供参考。

关键词：登革病毒1型基因亚型基因组结构蛋白二级结构

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人未成熟朗格汉斯细胞的分选及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2018年第7期34卷 577-582页

作者：王建斌王丽春柳蕾吴化叶程继帅李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

目的分离并鉴定健康人皮肤组织内未成熟状态的朗格汉斯细胞(LC)。方法把取得的人包皮组织剪成特定大小后采用分散酶Ⅰ(dispaseⅠ)消化过夜,分离表皮和真皮;Ⅰ型胶原蛋白酶在37℃消化表皮组织2 h并结合摇床振荡制成单细胞悬液,通过特异... 详细信息

目的分离并鉴定健康人皮肤组织内未成熟状态的朗格汉斯细胞(LC)。方法把取得的人包皮组织剪成特定大小后采用分散酶Ⅰ(dispaseⅠ)消化过夜,分离表皮和真皮;Ⅰ型胶原蛋白酶在37℃消化表皮组织2 h并结合摇床振荡制成单细胞悬液,通过特异性的分子标志物,应用流式细胞仪分选获得人CD3^-CD14^-CD1a^+CD45^+LC,采用免疫荧光技术检测CD207的表达对其进行鉴定,并用台盼蓝染色检测其活力。结果分选得到未成熟LC,纯度为91. 31%,平均存活率为93. 16%。结论成功分选获得活力好、纯度高的未成熟人LC。

关键词：人朗格汉斯细胞流式细胞仪免疫荧光鉴定

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恒河猴布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌的分离鉴定及耐药性分析

恒河猴布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌的分离鉴定及耐药性分析

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：禹文海李艳艳赵远马进鲁帅尧杨凤梅王俊斌陈丽雄徐鸿界刘权和占龙中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的对一例腹泻恒河猴进行肠道病原菌的分离鉴定,为腹泻恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法肛拭子采集粪便进行GN增菌,经SS琼脂培养后挑选可疑菌落接三塘铁琼脂培养,用ID32 E细菌鉴定系统进行分离菌株鉴定,并进行16种抗... 详细信息

目的对一例腹泻恒河猴进行肠道病原菌的分离鉴定,为腹泻恒河猴疾病检测、鉴别诊断和治疗提供参考依据。方法肛拭子采集粪便进行GN增菌,经SS琼脂培养后挑选可疑菌落接三塘铁琼脂培养,用ID32 E细菌鉴定系统进行分离菌株鉴定,并进行16种抗生素药敏试验和小白鼠致病性试验。结果分离到的2株病原菌为布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌,药敏试验表明该2株病原菌对磺胺甲基异恶唑、林可霉素、甲硝哒唑和土霉素耐药,氨苄西林为中度敏感,阿米卡星、头孢曲松、磷霉素、头孢唑林、庆大霉素和头孢哌酮为高度敏感。致病性试验证明布氏柠檬酸杆菌菌株对小白鼠有强致病性,而克氏耶尔森菌对小白鼠致病性不强。结论恒河猴携带布氏柠檬酸杆菌和克氏耶尔森菌,布氏柠檬酸杆菌具有较强的致病性,今后在恒河猴饲养繁育过程中应引起重视。头孢、阿米卡星、庆大霉素和磷霉素等药物可作为治疗恒河猴该类疾病的临床用药。

关键词：恒河猴布氏柠檬酸杆菌克氏耶尔森菌分离鉴定耐药性分析

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恶性疟原虫动物模型及基因编辑研究进展

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实验动物与比较医学 2019年第1期39卷 65-71页

作者：匡德宣王文广孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

恶性疟原虫是人体疟疾的病原体,恶性疟原虫动物模型是研究人疟原虫感染、慢性致病机制、药物评价和人疟原虫疫苗研制的重要实验材料。迄今为至,恶性疟原虫动物模型研究主要涉及非人灵长类、免疫缺陷小鼠、转基因技术以及CRISPR/Cas9系... 详细信息

恶性疟原虫是人体疟疾的病原体,恶性疟原虫动物模型是研究人疟原虫感染、慢性致病机制、药物评价和人疟原虫疫苗研制的重要实验材料。迄今为至,恶性疟原虫动物模型研究主要涉及非人灵长类、免疫缺陷小鼠、转基因技术以及CRISPR/Cas9系统等领域。本文对恶性疟原虫体内外感染动物模型及基因编辑研究做总结分析,为今后恶性疟原虫动物模型建立及基因编辑研究提供参考。

关键词：恶性疟原虫体外感染体内感染基因编辑

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野生树鼩与人工饲养树鼩胃肠道不同部位微生物组成的比较研究

野生树鼩与人工饲养树鼩胃肠道不同部位微生物组成的比较研究

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：赵远李艳艳杨凤梅王俊斌陈丽雄段素琴杨亚平马进和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的以树鼩为研究模型,采用16SrRNA宏基因组方法探讨野生树鼩与人工繁育树鼩不同肠段的菌群组成。方法分别收集3例健康野生及人工繁育树鼩七个胃肠段（胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠）样本,提取细菌总DNA,采用新一代高通... 详细信息

目的以树鼩为研究模型,采用16SrRNA宏基因组方法探讨野生树鼩与人工繁育树鼩不同肠段的菌群组成。方法分别收集3例健康野生及人工繁育树鼩七个胃肠段（胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠）样本,提取细菌总DNA,采用新一代高通量测序技术对16SrRNA基因的V3-V4高变区测序,分析比较菌群结构及多样性。结果不同肠段Alpha指数多样性分析显示野生组与人工繁育组树鼩在盲肠和胃内Shannon存在显著差异（P<0.05）。野生组与人工繁育组个肠段微生物组成存在较大差异,门水平上,野生组直肠、结肠、盲肠及胃四个部位中Firmicutes菌门的平均占比明显高于人工繁育组（P<0.05）;人工繁育组直肠、结肠、盲肠及回肠内Spirochaetes菌门的平均占比明显高于野生组（P<0.05）;野生组直肠内Bacteroidetes菌门的平均占比明显高于人工繁育组（P<0.05）;属水平上,各肠段野生组明显高于人工繁育组的主要菌属为:回肠、空肠和胃内的Weissella菌属,直肠内的Bacteroides菌属以及回肠段内的Lactococcus菌属;而人工繁育组明显高于野生组的主要菌属为:直肠、结肠、盲肠及回肠内的Brachyspira属,盲肠和胃内的Prevotella菌属,盲肠和空肠内的Streptococcus属以及回肠中的Lactobacillus菌属。不同肠段菌群功能基因预测显示野生组与人工繁育组共有5个解剖部位17个基因类别之间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论野生树鼩与人工繁育树鼩各肠段菌群组成差异较大;各肠段细菌功能差异较大,且与其生理功能、饮食结构有一定关联;在肠道菌群研究中,应充分考虑粪便样品微生物的组成是否能够完全代表肠道微生物的组成。

关键词：肠道菌群树鼩 16SrRNA测序肠段

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基于线粒体D-loop基因全序列分析贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性

基于线粒体D-loop基因全序列分析贵州、四川、广西恒河猴群体遗传...

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：禹文海马进赵远鲁帅尧杨凤梅李艳艳王俊斌陈丽雄徐鸿界刘权和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的从分子水平探讨贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性,为今后开展恒河猴遗传资源的保护及合理开发利用提供借鉴和背景资料。方法采用PCR直接测序法测定贵州、四川、广西恒河猴38份样品的线粒体D-loop基因全序列,用MEGA和DNASP软件... 详细信息

目的从分子水平探讨贵州、四川、广西恒河猴群体遗传多样性,为今后开展恒河猴遗传资源的保护及合理开发利用提供借鉴和背景资料。方法采用PCR直接测序法测定贵州、四川、广西恒河猴38份样品的线粒体D-loop基因全序列,用MEGA和DNASP软件对变异位点数、简约信息位点数、单倍型、单倍型多样度、核苷酸多样度等遗传信息进行分析,基于邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建系统发生树。结果 38份样品定义了31种单倍型,共发现136个变异位点,其中单一多态位点20个,简约信息位点113个,缺失/插入3个。结论不同地区恒河猴群体均存在着较丰富的遗传多态性。

关键词：恒河猴线粒体DNA 单倍型遗传多态性

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树鼩Mfsd2a基因的克隆分析和不同组织表达量的检测

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实验动物与比较医学 2019年第3期39卷 178-186页

作者：王文广匡德宣李娜陆彩霞罕园园仝品芬孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

目的对树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a)基因进行克隆、测序和生物信息学分析,并定量检测其组织表达量。方法从树鼩脑和脊髓中提取总RNA,RT-PCR扩增Mfsd2a基因片段,测序后利用生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白的结... 详细信息

目的对树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a)基因进行克隆、测序和生物信息学分析,并定量检测其组织表达量。方法从树鼩脑和脊髓中提取总RNA,RT-PCR扩增Mfsd2a基因片段,测序后利用生物信息学软件对其序列特征、系统进化、编码蛋白的结构和理化性质进行分析;以树鼩β-actin为内参,qPCR检测树鼩Mfsd2a基因在不同组织中的表达情况。结果克隆获得Mfsd2a基因片段全长1 796 bp,与NCBI上公布的树鼩Mfsd2a基因预测序列高度一致,比对显示其与MFS转运蛋白超家族同源。其编码区全长1 464 bp,编码488个氨基酸。预测结果显示树鼩Mfsd2a蛋白具有明显的疏水性区域,无信号肽,二级结构元件由α螺旋、β折叠、无规卷曲和延伸链组成。OCTOPUS分析发现Mfsd2a存在12个跨膜结构,修饰结构预测发现Mfsd2a蛋白存在两处N糖基化位点,亚细胞定位发现其可能主要分布于细胞膜和内质网。qPCR检测树鼩不同组织的Mfsd2a表达,结果显示各组织均有表达,在大脑、脊髓中的表达水平相对较高。结论成功克隆了树鼩Mfsd2a基因,建立了该基因表达定量检测方法,为今后利用树鼩神经系统疾病模型深入开展Mfsd2a基因功能研究提供了理论和技术支持。

关键词：树鼩主要促进因子超家族成员2a(Mfsd2a) 克隆分析表达

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恒河猴肺中阴沟肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

恒河猴肺中阴沟肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：李艳艳禹文海杨凤梅刘权陈丽雄王俊斌马进徐鸿界杨亚平赵远和占龙中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的对肺炎死亡的恒河猴肺脏采样进行病原菌分离、培养、鉴定及药敏试验,确诊引发肺炎的病原菌及药物敏感性,指导疾病诊疗、预防和临床用药。方法解剖柜条件下解剖死亡猴,分别采集肉眼病变明显和正常肺组织,用灭菌接种环在肺切面部位采... 详细信息

目的对肺炎死亡的恒河猴肺脏采样进行病原菌分离、培养、鉴定及药敏试验,确诊引发肺炎的病原菌及药物敏感性,指导疾病诊疗、预防和临床用药。方法解剖柜条件下解剖死亡猴,分别采集肉眼病变明显和正常肺组织,用灭菌接种环在肺切面部位采样,接种在SS琼脂培养基进行培养,培养时间24 h观察细菌生长情况,进行生化鉴定和8种药敏试验。结果菌落呈白色或乳白色、圆形、湿润、不透明,进一步分离培养,经梅里埃微生物生化鉴定,确定该细菌为阴沟肠杆菌,ID:99.9%,T:0.71,ID编码3 5 0 7 4 7 5 3 3 1 1;药敏试验表明该菌对氨苄西林,头孢呋辛中等敏感;对诺氟沙星、阿米卡星、庆大霉素、头孢曲松、头孢哌酮,头孢噻肟敏感。结论引起该恒河猴肺炎的病原菌为阴沟肠杆菌,头孢哌酮,头孢噻肟等药物可作为治疗临床用药。

关键词：阴沟肠杆菌恒河猴分离鉴定药敏试验

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