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第十五届中国实验动物学会科学年会

作者：王文广匡德宣李娜陆彩霞罕园园仝品芬孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的探讨建立CA16 感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16 感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCAR... 详细信息

目的探讨建立CA16 感染树鼩肺成纤维细胞(tree shrew lung fibroblasts,TSLF)实验模型的可行性。方法用肠道病毒CA16 感染TSLF,以人肺成纤维细胞(KMB-17)作对照,镜下观察细胞病变情况,间接免疫荧光实验观察病毒蛋白和感染相关受体SCARB2 蛋白的表达情况,探针法实时荧光定量PCR 检测病毒载量,以β-Actin 作内参染料法实时荧光定量PCR检测受体SCARB2 基因的相对表达量,结合基因序列比对,分析其与感染的相关性。结果 CA16感染TSLF,可引起明显的细胞病变,免疫荧光实验可见病毒和受体SCARB2 蛋白,以100TCID50/105 cells 的比例感染TSLF 可在48 h 左右病毒载量达到最高,SCARB2 基因有与感染相关的高表达,而其基因序列也与人有较高同源性。结论 CA16 可感染TSLF,树鼩SCARB2可参与感染。

关键词： CA16 树鼩肺成纤维细胞感染 SCARB2

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甲型肝炎病毒疫苗株H2株的连续传代及其基因稳定性

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中华实验和临床病毒学杂志 2018年第1期32卷 80-84页

作者：王东宝曹晗郑勇史小军马忠飞段颖融邓燕孙明波北京协和医学院中国医学科学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析甲型肝炎减毒活疫苗H2株（hepatitis A virus H2 live attenuated vaccine strain）毒种H2M20K7（K7）经连续传代后病毒基因的遗传稳定性.方法将H2株毒种K7用细胞工厂在人二倍体细胞KMB17中进行连续传代后,收获不同代次的病毒... 详细信息

目的分析甲型肝炎减毒活疫苗H2株（hepatitis A virus H2 live attenuated vaccine strain）毒种H2M20K7（K7）经连续传代后病毒基因的遗传稳定性.方法将H2株毒种K7用细胞工厂在人二倍体细胞KMB17中进行连续传代后,收获不同代次的病毒,提取病毒RNA,用二代高通量深度测序方法,测定不同代次病毒（K7,K10,Kll,K13,K15,K18）的全基因序列,对比分析病毒的基因变异率,同时对病毒的感染性滴度进行检测和对比.结果 H2M20K7主代毒种经连续传代后,不同代次病毒的全基因序列总体变异率较低,非同义突变率小于0.58％,基因结构稳定;在5＇NCR非编码区域的基因突变率＜0.1％;在VP1/2 A、2C毒力位点区域突变率小于0.01％;不同代次病毒的感染性滴度维持在7.76～ 8.50 lgCCID50/ml之间,P值为0.981差异无统计学意义.结论 H2M20K7主代毒种、工作毒种、疫苗批病毒及经过连续传代后的各代次病毒基因结构稳定;在5＇NCR非编码区未发生明显突变,毒力相关位点VP1/2 A、2B、2C等关键位点的基因均为减毒特征,变异率极低,未引起病毒毒力特征改变.病毒感染性稳定且符合要求,具有较好的遗传稳定性.

关键词：甲肝病毒H2株基因稳定性二代高通量全基因测序核苷酸序列

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基于16S rRNA测序对树鼩肠道菌群特征与高级别肉瘤的相关性分析

基于16S rRNA测序对树鼩肠道菌群特征与高级别肉瘤的相关性分析

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第十五届中国实验动物学会科学年会

作者：黄鑫古文鹏黎晓慧李娜贾杰李明学代解杰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据.方法选取3 例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA组,6 例健康树鼩粪便为对照NO 组.通过16SV3+4 区引物进行细菌多样性的鉴定... 详细信息

目的检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据.方法选取3 例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA组,6 例健康树鼩粪便为对照NO 组.通过16SV3+4 区引物进行细菌多样性的鉴定,通过对Reads 剪切过滤,OTUs 聚类,并进行物种注释及丰度分析,得出两组树鼩肠道微生物结构、丰度以及多样性.结果比较CA 组和NO 组树鼩肠道微生物结构,多样性指数Chao1 指数值、ACE 指数值、Shannon 指数值差异无统计学意义(P＞0.05).NO 组的树鼩肠道菌群OTUs 为640 种,而CA 组为494 种,健康树鼩肠道菌群结构呈多样性.在门水平上比较,其中CA 组中螺旋体门(Spirochaetes)丰度为0.03％,低于NO 组(丰度为0.12％),且差异有统计学意义(P＜0.05);CA 组厚壁菌门(Firmicutes)丰度为77.79％高于NO 组(47.65％),但差异无统计学意义;CA 组的拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度为0.75％低于NO 组(8.31％),但差异无统计学意义.CA 组中的乳杆菌属(lactobacillus)是具有统计学意义的生物标识.结论患有高级别肉瘤树鼩的肠道菌群结构丰度和多样性低于健康树鼩,肠道菌群的结构改变及厚壁菌门含量增加可能增加恶性肿瘤的发生.

关键词：肠道菌群高级别肉瘤 16srRNA测序树鼩

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基于16S rRNA测序对树鼩肠道菌群特征与高级别肉瘤的相关性分析

基于16S rRNA测序对树鼩肠道菌群特征与高级别肉瘤的相关性分析

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第十五届中国实验动物科学年会

作者：黄鑫古文鹏黎晓慧李娜贾杰李明学代解杰昆明医科大学中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队

目的检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据。方法选取3例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA组,6例健康树鼩粪便为对照NO组。通过16SV3+4区引物进行细菌多样性的鉴定,通... 详细信息

目的检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据。方法选取3例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA组,6例健康树鼩粪便为对照NO组。通过16SV3+4区引物进行细菌多样性的鉴定,通过对Reads剪切过滤,OTUs聚类,并进行物种注释及丰度分析,得出两组树鼩肠道微生物结构、丰度以及多样性。结果比较CA组和NO组树鼩肠道微生物结构,多样性指数Chao1指数值、ACE指数值、Shannon指数值差异无统计学意义(P>0.05)。NO组的树鼩肠道菌群OTUs为640种,而CA组为494种,健康树鼩肠道菌群结构呈多样性。在门水平上比较,其中CA组中螺旋体门(Spirochaetes)丰度为0.03%,低于NO组(丰度为0.12%),且差异有统计学意义(P<0.05);CA组厚壁菌门(Firmicutes)丰度为77.79%高于NO组(47.65%),但差异无统计学意义;CA组的拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度为0.75%低于NO组(8.31%),但差异无统计学意义。CA组中的乳杆菌属(lactobacillus)是具有统计学意义的生物标识。结论患有高级别肉瘤树鼩的肠道菌群结构丰度和多样性低于健康树鼩,肠道菌群的结构改变及厚壁菌门含量增加可能增加恶性肿瘤的发生。

关键词：肠道菌群高级别肉瘤 16srRNA测序树鼩

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树鼩腺病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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中国比较医学杂志 2018年第3期28卷 72-77页

作者：宋庆凯李晓飞苗雨润张志成王璇袁圆代解杰孙晓梅中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室中国医学科学院医学生物学研究所实验树鼩标准化与应用研究省创新团队昆明650118

目的通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒。方法根据TAV全基因组3’端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV ... 详细信息

目的通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒。方法根据TAV全基因组3’端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的TAV实时荧光定量PCR检测方法特异性好,与树鼩源及其他物种常见病毒无交叉反应;方法的最低检测限度为每微升3.7拷贝,灵敏性强;相关检测系数R2为0.998,扩增效率为95.7%;扩增结果具有良好的线性关系,且重复性检测效果好。结论成功建立了TAV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,灵敏度高,重复性好,可用于TAV感染的早期快速检测。

关键词：树鼩腺病毒 3’保守区域 TaqMan 实时荧光定量PCR

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轮状病毒NSP5结构与功能的研究进展

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生物学杂志 2018年第5期35卷 72-74页

作者：刘洋林晓晨李鸿钧昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

轮状病毒(RV)是世界范围内导致婴幼儿胃肠道疾病的主要病原体,RV基因组由11个分节段的双链RNA组成,分别编码6个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7)和6个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5和NSP6),其中第11基因片段编码非结... 详细信息

轮状病毒(RV)是世界范围内导致婴幼儿胃肠道疾病的主要病原体,RV基因组由11个分节段的双链RNA组成,分别编码6个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4、VP6和VP7)和6个非结构蛋白(NSP1、NSP2、NSP3、NSP4、NSP5和NSP6),其中第11基因片段编码非结构蛋白NSP5。NSP5蛋白较大,NSP5在病毒感染细胞中以二聚体形式存在,是一个高度磷酸化的蛋白,可与轮状病毒其他非结构蛋白或结构蛋白相互作用,具有RNA结合活性,在病毒复制过程中主要通过与NSP2的一系列相互作用发挥功能。对轮状病毒的相关结构与功能的研究十分必要,近年来,对轮状病毒的非结构蛋白进行了大量研究,主要集中在其结构、表达、功能及免疫学性质方面,现就目前国内外对轮状病毒NSP5结构与功能的研究进展进行综述。

关键词：轮状病毒结构蛋白非结构蛋白 NSP5

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甲型肝炎疫苗免疫效果影响因素的分析

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中国生物制品学杂志 2018年第11期31卷 1283-1285,1289页

作者：罗佳孙强明昆明医科大学云南昆明650500 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

甲型肝炎疫苗以其卓越的免疫原性、安全性及免疫持久性,被公认为预防甲型肝炎流行的重要措施。绝大多数人接种甲型肝炎疫苗后均能产生很好的保护效果,但不同人群的反应并不均一,呈多样性。出现上述情况的原因复杂,影响因素众多。掌握有... 详细信息

甲型肝炎疫苗以其卓越的免疫原性、安全性及免疫持久性,被公认为预防甲型肝炎流行的重要措施。绝大多数人接种甲型肝炎疫苗后均能产生很好的保护效果,但不同人群的反应并不均一,呈多样性。出现上述情况的原因复杂,影响因素众多。掌握有关影响因素对实现接种的群体化或个体化,使不同群体获得成功免疫具有重大意义。基于此,本文从甲型肝炎疫苗类型、佐剂、免疫接种对象个体差异、疾病因素、免疫策略等方面,对甲型肝炎疫苗免疫效果的影响因素作一综述。

关键词：甲型肝炎疫苗免疫效果佐剂影响因素

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帕金森疾病动物模型的研究进展

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中国比较医学杂志 2018年第5期28卷 21-27页

作者：张志成袁圆王璇宋庆凯代解杰昆明医科大学昆明650500 中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,现多认为是遗传和环境因素相互作用的结果。典型特征是黑质纹状体中多巴胺神经元丧失以及多巴胺缺乏相关的典型帕金森运动特征。动物模型在阐明PD的发病机制、测试新的治疗方... 详细信息

帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,现多认为是遗传和环境因素相互作用的结果。典型特征是黑质纹状体中多巴胺神经元丧失以及多巴胺缺乏相关的典型帕金森运动特征。动物模型在阐明PD的发病机制、测试新的治疗方案及药物的研究中,具有十分重要的作用。啮齿类动物、树鼩和灵长类动物等采用不同造模方法所建立的PD动物模型都拥有自己的优势和局限性,所表现出的临床特征和病理机制与人类有所不同。因此,在科学研究中选择所需使用的模型时必须仔细考虑。本文就主要神经毒素及转基因PD动物模型的相关研究进展进行综述。

关键词：帕金森疾病 6-羟基多巴胺 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶神经毒素转基因动物模型

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新生树鼩多巴胺神经元的体外培养

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中国比较医学杂志 2018年第7期28卷 82-86页

作者：李娟曾晓锋杨根梦仝品芬代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学法医学院昆明650500

目的分离培养鉴定树鼩多巴胺神经元,为进一步建立多巴胺神经元功能异常疾病研究的细胞模型打下基础。方法应用神经元专用培养基添加B27和Glutamax的培养液对新生树鼩多巴胺神经元进行体外培养。采用免疫荧光法对培养细胞进行鉴定。结果... 详细信息

目的分离培养鉴定树鼩多巴胺神经元,为进一步建立多巴胺神经元功能异常疾病研究的细胞模型打下基础。方法应用神经元专用培养基添加B27和Glutamax的培养液对新生树鼩多巴胺神经元进行体外培养。采用免疫荧光法对培养细胞进行鉴定。结果成功培养出树鼩原代多巴胺神经元,免疫荧光法检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫阳性神经元达到(88.49±2.4)%。结论使用本方法可以培养出高纯度的树鼩多巴胺神经元。

关键词：多巴胺神经元原代培养树鼩

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HPV 16 L1天然变异体在毕赤酵母中的可溶性表达及病毒样颗粒装配

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中国生物制品学杂志 2018年第5期31卷 462-466页

作者：杨旭黄惟巍姚宇峰刘存宝孙文佳白红妹马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发国家地方联合工程研究中心云南昆明650118

目的在毕赤酵母中表达两个临床人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型毒株主要衣壳蛋白L1(HPV 16 L1),并分析表达产物的可溶性及病毒样颗粒(virus-like parcticle,VLP)装配差异。方法将编码两个不同HPV 16毒株L1蛋白的全长基因序... 详细信息

目的在毕赤酵母中表达两个临床人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型毒株主要衣壳蛋白L1(HPV 16 L1),并分析表达产物的可溶性及病毒样颗粒(virus-like parcticle,VLP)装配差异。方法将编码两个不同HPV 16毒株L1蛋白的全长基因序列M16和Y16分别重组于毕赤酵母表达载体p Pink LC,构建重组表达质粒Y16LC和M16LC,转化表达菌株p Pink strain 1。重组菌经甲醇诱导后,Western blot分析L1蛋白的表达水平及可溶性。经密度梯度离心结合透射电镜观察,分析VLP装配情况。通过软件pubmed在线Alignment分析两个序列的氨基酸排列。结果两个重组表达质粒经酶切鉴定及测序分析证明构建正确。两个序列获得了相似的蛋白表达水平,但Y16的可溶性较差,几乎且无VLP形成;而M16呈现较好的蛋白可溶性及VLP装配能力。Y16与M16有5个氨基酸的差异(H202D、T266A、Δ424S、D441Δ、K452Q)。结论 HPV 16 L1氨基酸的微小改变尽管未对重组蛋白的表达水平产生影响,但显著影响有功能的预期产物的获得。提示在基因重组病毒疫苗研发中,制备VLP时需考虑毒株的选择,甚至主动进行抗原的特定氨基酸的改造。

关键词：人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白L1 毕赤酵母病毒样颗粒

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