目的探讨甘氨酸锌(glycine zinc)对甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分为7组:甘氨酸锌(200μg,p H 6.5)+HAV组、甘氨酸锌(400μg,p H 6.5)+HAV组、甘氨酸锌(200μg,p H 7.5)+HAV...
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目的探讨甘氨酸锌(glycine zinc)对甲型肝炎病毒(hapatitis A virus,HAV)抗原诱导小鼠体液免疫应答的影响。方法将ICR小鼠随机分为7组:甘氨酸锌(200μg,p H 6.5)+HAV组、甘氨酸锌(400μg,p H 6.5)+HAV组、甘氨酸锌(200μg,p H 7.5)+HAV组、甘氨酸锌(400μg,p H 7.5)+HAV组、生理盐水对照组(生理盐水200μl)、HAV抗原对照组(HAV抗原)和铝佐剂对照组(铝佐剂300μg+HAV抗原),每组8只。HAV抗原剂量均为18 EU,各组均经腹部皮下多点注射,200μl/只,免疫1次。免疫4、8、12、16周后,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV抗原特异性Ig G抗体水平,并进行安全性试验。结果除生理盐水对照组外,其他各组小鼠免疫4周后均产生抗-HAV Ig G,并随着时间的延长呈上升趋势,于免疫后第8周达峰值,此后逐渐下降。不同甘氨酸锌佐剂组的抗体水平均明显高于HAV抗原对照组。免疫后第8周时,铝佐剂对照组和甘氨酸锌佐剂组的抗体水平均显著高于HAV抗原对照组(P均<0.05);甘氨酸锌(400μg,p H 6.5)佐剂组抗体水平与铝佐剂对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论甘氨酸锌能显著增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,其体液免疫增强效果与铝佐剂相当。
目的通过试验设计(design of experiments,DOE)方法和统计学分析快速优化Vero细胞无血清培养基。方法以DMEM/F12为基础培养基,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验考察7种添加物胰岛素、人转铁蛋白、透明质酸、牛...
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目的通过试验设计(design of experiments,DOE)方法和统计学分析快速优化Vero细胞无血清培养基。方法以DMEM/F12为基础培养基,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验考察7种添加物胰岛素、人转铁蛋白、透明质酸、牛血清白蛋白、亚硒酸钠、表皮生长因子和高密度脂蛋白对Vero细胞生长的影响,以CCK-8测定的吸光度值(A490)为响应值,优化Vero细胞无血清培养基。用最优化的因子浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞,对优化结果进行验证。结果通过Plackett-Burman试验筛选出胰岛素、牛血清白蛋白和人转铁蛋白对Vero细胞生长影响较大;采用最陡爬坡试验和Box-Behnken试验进一步优化,Design-Expert 8.06软件进行回归分析,得到胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白的最佳浓度分别为5.625μg/ml、14.034μg/ml和3.92 mg/ml,在此优化条件下的A490值为2.3,较基础培养基提高了3.41倍。用最优的胰岛素、人转铁蛋白和牛血清白蛋白浓度配制的Vero细胞无血清培养基培养Vero细胞的A490值为2.148,为预测值的93.4%,符合度较高。结论应用DOE方法快速高效地优化了Vero细胞无血清培养基,为无血清培养基的研制奠定了基础。
臭灵丹Laggera pterodonta,一种民间常用的治疗感冒的具有民俗特色的中药。为了检测臭灵丹不同溶剂萃取物对甲型H1N1流感病毒在体外的中和杀伤作用和增殖抑制作用,本研究采用中和抑制实验和增殖抑制实验,用狗肾传代MDCK细胞培养法观察臭灵丹萃取物抑制甲型H1N1流感病毒的致细胞病变作用(CPE),观察2种实验中臭灵丹萃取物在体外对甲型H1N1流感病毒血凝效价的影响,同时采用Real time RT-PCR定量检测流感病毒的拷贝数,比较臭灵丹不同溶剂萃取物对甲型H1N1流感病毒在体外增殖的影响。结果显示,臭灵丹乙酸乙酯萃取物及石油醚萃取物作用72 h后,中和实验组H1N1病毒血凝效价下降了8倍,而增殖抑制组,H1N1病毒血凝效价也分别下降了2倍和4倍;Real time RT-PCR的检测结果表明,臭灵丹乙酸乙酯萃取物中和H1N1病毒的抑制率为72.5%,而增殖抑制组的抑制率为25.3%,石油醚萃取物中和H1N1病毒的抑制率为60.2%,增殖抑制组为81.4%。由此可以得出,臭灵丹乙酸乙酯萃取物和石油醚萃取物在体外对甲型H1N1流感病毒有明显的中和作用及直接的抑制增殖作用。
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