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中华医学会2015年医学病毒学大会

作者：赵婷张志晓张莹冯敏王丽春刘龙丁李琦涵中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明 650118

肠道病毒71 型(EV71)是儿童手足口病(HFMD)的主要病原之一,近年来在亚洲-太平洋地区广泛流行。随着公众关注的增加,EV71 流行病学、病原学得以较为全面的研究,这些研究结果提示,EV71 在儿童群体中的感染及其临床所引起的HFMD 发病的流... 详细信息

肠道病毒71 型(EV71)是儿童手足口病(HFMD)的主要病原之一,近年来在亚洲-太平洋地区广泛流行。随着公众关注的增加,EV71 流行病学、病原学得以较为全面的研究,这些研究结果提示,EV71 在儿童群体中的感染及其临床所引起的HFMD 发病的流行病学特征通常表现为无定时及群体性的增长。

关键词：肠道病毒71型内皮细胞 DC细胞

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EV71和CA16感染FHC细胞抑制IFNα产生

EV71和CA16感染FHC细胞抑制IFNα产生

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中华医学会2015年医学病毒学大会

作者：宋杰刘龙丁李琦涵中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明 650118

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是一种全球性的传染病,其主要病原体为肠道病毒71 型(Enterovirus 71,EV71)和柯萨奇病毒A 组16 型(Coxsackie virus A 16,CA16)。

关键词：肠道病毒71型柯萨奇病毒A组16型 Toll样受体7 干扰素

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人呼吸道合胞病毒截短F1蛋白的表达及免疫原性评价

人呼吸道合胞病毒截短F1蛋白的表达及免疫原性评价

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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会

作者：李华杨婷岳磊何晓娟朱凡丽谢天宏龙润乡杨蓉罗芳宇谢忠平中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的:克隆重组RSV A型Long株人呼吸道合胞病毒(HRSV)截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性. 方法:采用RT-PCR方法克隆RSV F1截短蛋白序列,克隆至pET28质粒表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表... 详细信息

目的:克隆重组RSV A型Long株人呼吸道合胞病毒(HRSV)截短F1融合性蛋白,并评价其免疫原性. 方法:采用RT-PCR方法克隆RSV F1截短蛋白序列,克隆至pET28质粒表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Shuffle T7菌株,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blots鉴定后,用Ni亲和层析柱进行纯化.重组蛋白免疫ICR小鼠,用ELISA方法检测血清抗体效价,进行其免疫原性评价. 结果:重组的原核表达质粒经双酶切及测序证明构建成功;表达的F1融合性蛋白片段大小1104bp,表达的蛋白大约368个氨基酸,其相对分子量为44KDa.表达的F1融合性蛋白以包涵体形式存在,纯化后蛋白纯度达90％.重组F1蛋白免疫小鼠效价最高可达1:4096. 结论:原核表达的重组RSV F1蛋白免疫原性好,为单克隆抗体的制备及检测试剂盒的研究奠定基础.

关键词：人呼吸道合胞病毒 F1融合性蛋白基因表达免疫原性

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下调人脐带间充质干细胞Mbd3基因shRNA慢病毒的构建及鉴定

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生物学杂志 2015年第3期32卷 15-20页

作者：闫姗姗周艳李溪张磊孙茂盛解裕萍李鸿钧中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学附属第一医院骨科昆明650032

研究构建靶向抑制人Mbd3表达的sh RNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性... 详细信息

研究构建靶向抑制人Mbd3表达的sh RNA慢病毒颗粒,感染人脐带间充质干细胞并用嘌呤霉素筛选获得Mbd3稳定下调的细胞系,为进一步探讨Mbd3在诱导型多潜能干细胞形成中的作用提供实验基础。研究根据Gene Bank中公布的Mbd3基因序列设计特异性si RNA干扰序列并合成可产生sh RNA的双链DNA,经双酶切后克隆至p LVsh RNA-EGFP(2A)Puro载体上构建慢病毒重组质粒,转化DH5α大肠杆菌PCR检测筛选阳性质粒,利用HEK293Ta包装产生含有Mbd3sh RNA的慢病毒颗粒。通过RT-PCR和Western blot检测慢病毒感染人脐带间充质干细胞(h UC-MSC)后Mbd3的转录和蛋白表达情况,进一步检测重组慢病毒对Mbd3的沉默效果并筛选出最佳抑制效果的sh RNA慢病毒载体。结果显示成功构建并筛选出下调Mbd3的最佳慢病毒干扰载体,慢病毒感染人脐带间充质干细胞48h后于荧光显微镜下可见绿色荧光,经嘌呤霉素筛选9 d后,RT-PCR检测Mbd3表达显著降低,Western blot检测Mbd3蛋白表达明显减少。说明构建的sh RNA重组慢病毒包装成功,具有较高的感染活性,可有效抑制人脐带间充质干细胞Mbd3的表达,为后续研究脐带间充质干细胞跨胚层分化打下前期研究基础。

关键词： Mbd3基因基因沉默慢病毒载体 RNA干扰

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硫酸软骨素B佐剂对甲型肝炎病毒疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响

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中国生物制品学杂志 2015年第4期28卷 344-347页

作者：王陈芸孙静李萍余柄廷李建芳李彦涵王海漩乌美妮胡凝珠胡云章中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所疫苗研究室云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心云南昆明650118 河北大学生命学院河北保定071000

目的探讨硫酸软骨素B(chondroitin sulfate B,CSB)佐剂对甲型肝炎病毒((hepatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其佐剂效果。方法将ICR小鼠随机分成9组:甲型肝炎减毒活疫苗Hep A-l18 EU+不同剂量CSB(5、25、45、6... 详细信息

目的探讨硫酸软骨素B(chondroitin sulfate B,CSB)佐剂对甲型肝炎病毒((hepatitis A virus,HAV)疫苗诱导小鼠体液免疫应答的影响,以评价其佐剂效果。方法将ICR小鼠随机分成9组:甲型肝炎减毒活疫苗Hep A-l18 EU+不同剂量CSB(5、25、45、65、85、105μg)组、阴性对照组(生理盐水)、抗原对照组(Hep A-l 18 EU)和铝佐剂对照组[Hep A-l 18 EU+Al(OH)3300μg],每组8只,各组均经皮下注射ICR小鼠,200μl/只。于免疫后的第4、8、12和16周,采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-HAV特异性Ig G抗体水平。在实验期间,观察小鼠的健康状况,并于免疫16周后,取CSB 65μg组及阴性对照组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏各主要器官,制备病理切片,进行对比观察。结果各组小鼠免疫后第4、8、12、16周,均产生抗-HAV Ig G抗体,除阴性对照组外,抗体水平均随时间的延长逐渐升高,于第8周达峰值,此后逐渐下降。CSB 65μg组抗体可长时间维持在高水平,至免疫后第12、16周,均高于抗原对照组(P<0.05),略高于铝佐剂对照组,最佳浓度为65μg/只。实验期间,各组小鼠均未出现异常;CSB65μg组小鼠肾脏、脾脏、肝脏、肺脏、心脏组织均未观察到病变。结论 CSB可明显增强HAV抗原诱导小鼠的体液免疫应答,具有成为新型疫苗佐剂的研发价值。

关键词：硫酸软骨素B 佐剂甲型肝炎病毒疫苗体液免疫

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病毒样颗粒呈递HPV16CTLs抗原表位对小鼠TC-1移植肿瘤韵免疫干预

病毒样颗粒呈递HPV16CTLs抗原表位对小鼠TC-1移植肿瘤韵免疫干预

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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会

作者：褚晓杰李杨龙琼夏烨姚宇峰孙文佳黄惟巍杨旭刘存宝马雁冰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南省重大传染病疫苗工程技术研究中心昆明650118

目的:人乳头瘤病毒(HPV)治疗性疫苗在治疗宫颈上皮内瘤变或癌症的临床试验尚缺乏显著疗效.提高肿瘤抗原特异的细胞免疫应答是增强疫苗效力的关键.本研究旨在探索乙肝核心抗原病毒样颗粒(VLPs)作为治疗性疫苗载体的潜能,并评价其免疫学特... 详细信息

目的:人乳头瘤病毒(HPV)治疗性疫苗在治疗宫颈上皮内瘤变或癌症的临床试验尚缺乏显著疗效.提高肿瘤抗原特异的细胞免疫应答是增强疫苗效力的关键.本研究旨在探索乙肝核心抗原病毒样颗粒(VLPs)作为治疗性疫苗载体的潜能,并评价其免疫学特性. 方法:根据文献选择有效的HPV16E7CTLs表位,经基因重组将其DNA片段克隆于乙肝核心抗原优势表位.重组蛋白诱导表达后,经硫酸铵盐析法和蔗糖密度梯度离心纯化,并经高效液相凝胶过滤色谱和电镜分析鉴定.制备的VLPs以预防性和治疗性策略分别对小鼠移植肿瘤进行免疫干预,检测小鼠肿瘤大小变化;此外,在体外以抗原肽刺激脾细胞,以ELISA检测IFN-γ表达水平,ELISPOT检测分泌IFN-γ的淋巴细胞. 结果:呈递HPV16E749-57CTLs表位的重组VLPs可通过基因重组技术有效制备;VLPs预防性免疫完全抑制了TC-1小鼠移植肿瘤生长;VLPs治疗性免疫显著抑制了2-3mm肿瘤的增长,对于5～6mm甚至更大的肿瘤(8～9mm),同样具有明显抑制作用;VLPs结构对疫苗肿瘤抑制效果非常重要;疫苗免疫小鼠脾细胞具有提高的IFN-γ、降低的IL-4与TGF-β1表达,以及增强的分泌IFN-γ的淋巴细胞水平;此外,VLPs刺激机体产生了有效的免疫记忆应答,至少可持续15周;机体预存的抗载体抗体对VLPs疫苗发挥作用未产生显著影响. 结论:本研究强烈提示VLPs可激发有效的细胞免疫应答,是有潜力的治疗性疫苗载体.

关键词：宫颈上皮内瘤人乳头瘤病毒治疗性疫苗病毒样颗粒免疫学特性

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树鼩骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导

树鼩骨髓间充质干细胞体外分离培养及成脂成骨诱导

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：陆彩霞李晓飞王文广孙晓梅仝品芬匡德宣代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的探讨树鼩骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的体外分离、传代及定向诱导为脂肪细和成骨细胞的可行性.方法通过密度梯度离心联合贴壁培养法对树鼩骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化，倒置相差显微镜进行形态学观察.用成脂诱导液(D... 详细信息

目的探讨树鼩骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的体外分离、传代及定向诱导为脂肪细和成骨细胞的可行性.方法通过密度梯度离心联合贴壁培养法对树鼩骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化，倒置相差显微镜进行形态学观察.用成脂诱导液(DMEM/F12+10％FBS+100 U/mL青霉素+100μg/mL链霉素+1.0μM地塞米松+0.2mM吲哚美辛+0.01mg/mL胰岛素+0.5mM IBMX)和成骨诱导液(高糖DMEM +10％FBS+100 U/mL青霉素+ 100tg/mL链霉素+50ng/mL BMP-2)对分离的树鼩BM-MSCs分别定向诱导为脂肪细胞和成骨细胞.结果原代和传代细胞为梭形或三角形，可增殖形成克隆.BM-MSCs成脂诱导后油红O染色细胞内出现红色脂滴，成骨诱导后茜素红染色可观察到矿化结节.结论密度梯度离心联合贴壁培养法分离培养树鼩BM-MSCs简便可行，获得的BM-MSCs可体外诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞.

关键词：树鼩骨髓间充质干细胞细胞培养成脂诱导成骨诱导

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树鼩鞭毛虫的形态学观察及其18S rRNA基因分析

树鼩鞭毛虫的形态学观察及其18S rRNA基因分析

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：陈玲霞尹博文李振宇孙晓梅代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的：对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定.方法：取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系... 详细信息

目的：对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定.方法：取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系统发育进化树.结果：形态学观察表明树鼩体内的鞭毛虫为三毛滴虫;测序分析表明树鼩鞭毛虫序列18S rRNA与已报道的胎儿三毛滴虫18S rRNA(AY754332.1)同源性高达99％.结论：树鼩体内可感染胎儿三毛滴虫,研究结果为树鼩的寄生虫学质量控制提供依据.

关键词：实验动物树鼩寄生鞭毛虫生理形态 18S核糖体核糖核酸基因鉴定

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野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

野生树鼩肠道蠕虫感染调查及分析

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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：孙晓梅仝品芬匡德宣陈玲霞王文广陆彩霞代解杰中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明 650118

目的调查野生树鼩(TupaiaBelangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据.方法采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微... 详细信息

目的调查野生树鼩(TupaiaBelangeri Chinensis)感染肠道蠕虫的主要种类并进行鉴定,为今后树鼩寄生虫检测提供形态学参考,为实验树鼩寄生虫控制提供依据.方法采集203只野外来源的树鼩新鲜粪便,虫卵采用常规粪便直接涂片以及孵化后显微镜观察;绦虫采用压片、固定染色,以及线虫经透明后体视镜观察,虫卵与成虫相对应鉴定.结果野生树鼩肠道蠕虫的总感染率为75.86％,主要感染种类有3种,经鉴定为长膜壳绦虫、奇口线虫和粪类圆线虫,感染率分别为27.67％,30.06％和51.52％.三种蠕虫的混合感染率为4.55％.两种线虫虫卵在树鼩粪便中多为含胚胎形态.结论野生树鼩肠道蠕虫的感染率较高.对野外引入的新种源必须隔离检疫,进行针对性的药物治疗,才能有效地控制肠道寄生虫病的传播.

关键词：树鼩肠道蠕虫长膜壳绦虫奇口线虫粪类圆线虫

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轮状病毒疫苗研究现状

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现代生物医学进展 2015年第22期15卷 4397-4400,4329页

作者：孙晓琴易山解裕萍米锴孙茂盛中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明医科大学云南昆明650500

轮状病毒自上世纪70年代初发现至今,仍是婴幼儿病毒性腹泻最主要的病原体。每年约60万婴幼儿因轮状病毒感染导致严重脱水死亡。轮状病毒疫苗从上世纪90年代初开始研制,至今已有三种疫苗用于预防轮状病毒感染。这三种疫苗均为减毒活疫苗... 详细信息

轮状病毒自上世纪70年代初发现至今,仍是婴幼儿病毒性腹泻最主要的病原体。每年约60万婴幼儿因轮状病毒感染导致严重脱水死亡。轮状病毒疫苗从上世纪90年代初开始研制,至今已有三种疫苗用于预防轮状病毒感染。这三种疫苗均为减毒活疫苗:其中包括单一血清型Rotarix、罗特威和重组5价疫苗RotaTeq。它们已在全球多国使用,有些国家已将其纳入免疫规划。疫苗的使用使人群轮状病毒感染下降,特别是死亡率明显减少。但也出现了一些问题,因此除了减毒活疫苗,也有一些实验室研究其他形式的疫苗,例如重组疫苗、灭活疫苗等。本文主要介绍轮状病毒疫苗的研究现状,为我国轮状病毒疫苗的研究、使用和推广提供一定理论依据。

关键词：轮状病毒疫苗婴幼儿腹泻

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