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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会

作者：匡德宣孙晓梅陆彩霞王文广仝品芬殷安国李晓飞代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的了解树鼩主要内分泌腺的组织学结构特征，建立树鼩正常的内分泌腺组织学图谱。方法选取人工饲养的健康树鼩10只，麻醉后放血处死和病理解剖，对甲状腺、甲状旁腺、肾上腺及脑垂体进行病理大体检查和取材，常规病理制片，采用常规... 详细信息

目的了解树鼩主要内分泌腺的组织学结构特征，建立树鼩正常的内分泌腺组织学图谱。方法选取人工饲养的健康树鼩10只，麻醉后放血处死和病理解剖，对甲状腺、甲状旁腺、肾上腺及脑垂体进行病理大体检查和取材，常规病理制片，采用常规组织HE染色技术，显微镜下观察组织学结构。结果 (1)甲状腺呈淡黄色，位于气管两侧，在第2～4气管软骨环之间，呈板状，表面包有薄层被膜，被膜伸人甲状腺实质内分成若干小叶。小叶内有滤泡和滤泡旁细胞，滤泡腔内可见红染胶质。(2)甲状旁腺每侧一个，位于甲状腺颅侧或中部外表面，稍被甲状腺覆盖，呈圆形或卵圆形，其实质由主细胞和嗜酸性细胞组成，并可见腺泡样结构。(3)肾上腺呈卵圆形，赭黄色，位于肾门颅侧，与肾相连。肾上腺外包被膜，实质明显区分为皮质和髓质两部分。皮质从外到内可分为球状带、束状带和网状带。球状带最厚，束状带最薄，网状带介于中间。髓质部细胞形成团块或网状，髓质中央有静脉。(4)脑垂体位于蝶鞍内，没有垂体隐窝，垂体有腺垂体和神经垂体两部组成，表面包有结缔组织被膜。腺垂体分为远侧部、中间部和结节部，神经垂体由神经部和漏洞部组成。结论基本建立了树鼩内分泌腺组织学图谱，其在组织形态学上接近于灵长类动物，可以为研究树鼩内分泌腺的功能和病变，以及建立人类相关疾病的动物模型提供组织学依据。

关键词：树鼩内分泌腺组织学

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实验树鼩的标准化及其应用的研究进展

实验树鼩的标准化及其应用的研究进展

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第七届北京实验动物科学国际论坛

作者：代解杰中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所树鼩种质资源中心.云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118

树鼩(Tupaia belangeri)作为重要的野生动物之一,因生物学特性、生理生化指标和全基因序列等与人类相似,与灵长类实验动物比较,树鼩具有体型小、繁殖周期短、饲养和实验成本低,易于操作等优势,已被广泛地用于生物医学研究.但由于其遗传... 详细信息

树鼩(Tupaia belangeri)作为重要的野生动物之一,因生物学特性、生理生化指标和全基因序列等与人类相似,与灵长类实验动物比较,树鼩具有体型小、繁殖周期短、饲养和实验成本低,易于操作等优势,已被广泛地用于生物医学研究.但由于其遗传背景不清,缺乏动物质量控制标准,实验的重复性和科学性差,因此,开展实验树鼩的标准化研究和人类疾病动物模型创建具有重要的科学意义和现实意义.

关键词：疾病模型实验树鼩标准化构建

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用无血清适应的Vero细胞培养H5N1型流感病毒条件的优化

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中国生物制品学杂志 2015年第7期28卷 741-745页

作者：马磊耿兴良苏杨起杨家方常亚军段男邹俊如刘圆圆刘婧戴宗祥李卫东廖国阳中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 南开大学生命科学学院天津300071

目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、... 详细信息

目的优化无血清适应的Vero细胞(SFM-Vero细胞)培养H5N1型流感病毒的条件。方法将H5N1型流感病毒接种于SFM-Vero细胞,于免疫荧光显微镜下观察病毒感染情况。对病毒无血清培养条件MOI(0.05、0.10、0.15、0.20)、细胞培养时间(12、24、36、48 h)、培养液基础培养基(DMEM/F12、M199、RPMI1640及MEM:DMEM/F12混合液)、培养温度(33、33.5、34、34.5、35和37℃)、收获时间(24、36、48、60和72 h)、培养液p H值(6.8、7.1、7.4、7.7、8.0和8.3)和TPCK胰酶浓度(0.5、1.0、1.5μg/ml)进行优化,并检测最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价及形态。结果 H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性。最佳无血清培养条件为:MOI=0.1和0.15,细胞培养时间36 h,以DMEM/F12为基础培养基,病毒培养温度33.5和34.5℃,病毒收获时间60 h,培养液p H 7.7,TPCK胰酶浓度为1.0μg/ml。最佳条件无血清培养的H5N1型流感病毒的血凝效价为1∶512,电镜下观察病毒形态完整。结论确定了H5N1型流感病毒对SFM-Vero细胞具有感染性,并优化了SFMVero细胞培养流感病毒的适宜条件,为更具有生物安全性流感疫苗的研发奠定了基础。

关键词：无血清培养 Vero细胞 H5N1型流感病毒

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云南汉族人群IL-10基因启动子多态性与HCV慢性感染的相关性研究

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昆明医科大学学报 2015年第1期36卷 15-18页

作者：李莹张淑琼俞建昆汪亚玲姚宇峰史荔中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 昆明市第三人民医院云南昆明650041

目的探讨IL-10基因启动子SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)位点与HCV慢性感染的相关性.方法入选云南地区汉族人群HCV慢性感染患者379例,健康对照364例.采用Taq Man探针基因分型方法对IL-10基因启动子SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)的3个位点进行基因分型,并构建单倍型,评估上述3个SNPs及单倍型与HCV慢性感染的相关性.结果在病例组和对照组中,IL-10基因启动子SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)基因型频率和等位基因频率差异没有统计学意义(P>0.05).单倍型分析结果显示,SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)和-592C/A(rs1800872)构建的单倍型频率的差异无统计学意义(P>0.05).结论在云南汉族群体中,IL-10基因启动子SNP-1082G/A(rs1800896)、-819C/T(rs1800871)、-592C/A(rs1800872)与HCV慢性感染没有相关性.

关键词： HCV 慢性感染单核苷酸多态性 IL-10

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柯萨奇病毒B3 KM06／2009株全基因组测序及其序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第4期34卷 282-288页

作者：刘建生邵聪文潘玥陈俊英吉玛朱艳菊马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的分析柯萨奇病毒B3（CVB3）KM06／2009全基因序列，并对其分子变异、进化特点和毒力特征进行分析。方法设计针对CVB3引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1等软件分析全基因序... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒B3（CVB3）KM06／2009全基因序列，并对其分子变异、进化特点和毒力特征进行分析。方法设计针对CVB3引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列。利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1等软件分析全基因序列。结果CVB3KM06／2009病毒株全基因组全长7401bp个核苷酸（nt），5’端和3’端分别为743nt和100nt的非编码区，5’和3’非编码区间为一个6558nt长的开放读码框，编码一个含2185个氨基酸的多聚蛋白，编码区内未见核苷酸的插入或缺失。与GenBank库中CVB3Nancy原型株比较，其全基因组序列核苷酸同源性为81．4％，氨基酸同源性为95．7％；与无心肌毒力的临床分离株CVB3GA比较，其全基因组序列核苷酸同源性为80．7％，氨基酸同源性为96．4％；与历史同期国内临床分离株Beijing0811、SSM、GZ0803株比较，整个基因组的核苷酸同源性分别为98．1％、89．7％和88．4％，氨基酸同源性分别为99．4％、98．1％和98．1％。基于全基因组和全长VP1核酸序列的进化树图均显示，CVB3病毒株具有明显的时空聚簇分布特征。CVB3心肌毒力相关区域5’非编码区颈环结构1／RNA二级折叠结构分析结果表明，CVB3KM06／2009病毒株具有明显的心肌毒力倾向。结论基于基因分子生物信息学分析，与CVB3临床分离株比较，KM06／2009病毒株具有明显的心肌毒力倾向。

关键词：柯萨奇病毒B3 全基因组序列分析进化树图

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2009年云南省柯萨奇病毒B5：分离株A210／KM／09全基因序列分析

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中华流行病学杂志 2014年第3期35卷 307-311页

作者：刘建生邵聪文赵卫中张云昆吉玛朱艳菊马忠飞马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

目的分析柯萨奇病毒B5（CVB5）云南分离株A210／K2~I／09全基因序列及其遗传特性。方法设计针对CVB5引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列，利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1软件分析全基因序列。结果CVB5A210／KM... 详细信息

目的分析柯萨奇病毒B5（CVB5）云南分离株A210／K2~I／09全基因序列及其遗传特性。方法设计针对CVB5引物，提取病毒RNA，RT-PCR扩增和产物直接测序获得序列，利用Mega4．1、RDP3和SimPlot3．5．1软件分析全基因序列。结果CVB5A210／KM／09全基因组核苷酸序列长度为7372bp，编码含2185个氨基酸残基的多聚蛋白；A210／KM／09全基因组核苷酸及所推导的氨基酸与CVB5／CCl0／10同源性最高，其同源性分别为92．5％和97.3％；而与其他CVB5毒株如17Y、19CSF、20CSF、1954／85／US、2000／CSF／KOR、03001N、CoxB5／Henard2010、CVB5／SD／09和Faulkner核苷酸和氨基酸同源性分别为80．1％～92．5％和95．0％～97.3％；A210／KM／09与其他CVB5毒株的各区段核苷酸和氨基酸同源性分别为75.3％～96.3％和85．3％～100．O％，其中与VP3、3D区段核苷酸的同源性最低。基于CVB5全长VPl基因序：列进行种系进化分析，可将CVB5分为A、B、C和D4个基因型，其中C基因型可再分为C1～C4基因亚型，D基因型可再分为D1～D4基因亚型。中国CVB5流行株主要聚集在C4基因亚型，国外流行株主要聚集在D1、C2亚型。结论A210／KM／09分离株为C4基因型。

关键词：柯萨奇B组5型病毒全基因组序列分析进化树图

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2009年云南省 Echo30分离株 KM／A363／09全基因组序列分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第5期34卷 388-392页

作者：白巍陈俊英潘玥朱艳菊邵聪文刘建生马绍辉中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的：对2009年从中国云南省1名脑炎患儿粪便标本中分离到的Echo30云南分离株KM／A363／09进行全基因组测序和分析，了解该株病毒的遗传特性。方法设计针对Echo30引物，提取病毒RNA、RT-PCR扩增和产物直接测序获得全基因组序列，利用Gen... 详细信息

目的：对2009年从中国云南省1名脑炎患儿粪便标本中分离到的Echo30云南分离株KM／A363／09进行全基因组测序和分析，了解该株病毒的遗传特性。方法设计针对Echo30引物，提取病毒RNA、RT-PCR扩增和产物直接测序获得全基因组序列，利用Geneious和Mega5．1软件进行核苷酸、氨基酸序列比对及其系统进化分析，应用RDP3和SimPlot3．5．1重组软件对序列进行重组分析。结果该分离株全基因组核苷酸序列长度为7425 bp，编码2194个氨基酸。其核苷酸和氨基酸序列与其原型株Bastianni的同源性分别为81．2％和95．8％；与其他Echo30型毒株的各区段核苷酸和氨基酸同源性分别为81．2％～88．6％和95．8％～97．8％；进化分析发现KM／A363／09毒株属于中国Echo30分支中的一支。而且发现KM／A363／09株基因序列在非结构区可能存在重组事件。结论云南分离株KM／A363／09属于中国Echo30分支中的一支，而中国分离株已经发生一定的进化。

关键词： Echo30 全基因序列序列分析 Echovirus 30

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2012-2013年广西桂林地区肠道病毒71型所致手足口病病例的病原学分析

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中国预防医学杂志 2015年第11期16卷 821-826页

作者：王晶晶张小龙王丽春乞素冬莫兆军姚昕刘龙丁李琦涵中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明650118 广西壮族自治区疾病预防控制中心中国药品生物制品检定所

目的对2012-2013年广西桂林地区的手足口病病例进行肠道病毒71型（EV71）相关病原学分析。方法收集手足口病病例样本737份,采用RT-PCR方法进行检测,选取EV71阳性样本分离病毒,将获取的毒株经RT-PCR方法扩增VP1基因序列并测序,对VP1基因... 详细信息

目的对2012-2013年广西桂林地区的手足口病病例进行肠道病毒71型（EV71）相关病原学分析。方法收集手足口病病例样本737份,采用RT-PCR方法进行检测,选取EV71阳性样本分离病毒,将获取的毒株经RT-PCR方法扩增VP1基因序列并测序,对VP1基因进行进化分析。结果 737份病例中,荧光PCR检测出EV71感染共169例,阳性率为22.93%,测序获得的89株EV71的VP1基因核苷酸及氨基酸序列同源性为95.01%-100.00%和98.47%-100.00%,与C4亚型代表株核苷酸同源性大于95%,氨基酸同源性大于97%,并在系统进化树中与C4a亚型代表株处于同一分支,对89份样本VP1基因编码的氨基酸序列与安徽阜阳的FY23毒株进行了比较,发现89株病毒均在791位由S（丝氨酸）变为P（脯氨酸）。结论本研究所收集的2012-2013年广西桂林地区的89例EV71所致手足口病均为C4a亚型的EV71感染。

关键词：手足口病肠道病毒71型序列分析

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植物乳杆菌YM4-3 luxS基因表达与酸和胆盐的耐受关系

植物乳杆菌YM4-3 luxS基因表达与酸和胆盐的耐受关系

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2015年中国微生物学会学术年会

作者：姜黎明罗义勇孙强明中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室云南昆明 650118 昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明 650500

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是发酵食品中一种常见的益生菌,群体感应(quorum sensing,QS)是细菌进行信号交流的一种普遍方式,***是否通过QS介导其益生特性尚不清楚.本研究首先运用实时相对半定量PCR方法,研究了YM4-3在不同生...

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是发酵食品中一种常见的益生菌,群体感应(quorum sensing,QS)是细菌进行信号交流的一种普遍方式,***是否通过QS介导其益生特性尚不清楚.本研究首先运用实时相对半定量PCR方法,研究了YM4-3在不同生长阶段luxS基因(合成QS信号分子AI-2的关键基因)的表达情况;然后进行了YM4-3在指数早期、指数中期、指数晚期和稳定期四个生长点对酸和胆盐的耐受性实验.结果发现YM4-3luxS基因的表达随着时间的增加呈递增趋势,指数早期没有表达,指数中期出现表达,指数晚期表达量明显增加,稳定期表达量达到最大值;YM4-3对酸和胆盐都有较好的耐受性,可以耐受pH为3和0.2％胆盐的培养液,并且其对酸和胆盐的耐受与群体密度相关,即群体密度越大其耐受效果越明显,说明AI-2/LuxS群体感应系统可能与植物乳杆菌对酸和胆盐的耐受相关.

关键词：

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蒲公英有机萃取物的抗甲型H1N1流感病毒作用

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中国现代应用药学 2015年第12期32卷 1423-1427页

作者：王晓丹夏晓玲赵玉娇王新华张荣平孙强明北京协和医学院/中国医学科学院医学生物学研究所、云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 昆明医科大学昆明650500 广州医科大学附属第一医院广州医科大学呼吸疾病国家重点实验室广州510230

目的通过检测蒲公英不同的萃取物体外抗甲型H1N1流感病毒作用,探讨其在甲型H1N1流感治疗上的应用。方法首先用乙醇萃取而得到蒲公英的乙醇萃取物,然后依次采用乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、水萃取蒲公英的乙醇萃取物,得到不同溶剂的萃取物... 详细信息

目的通过检测蒲公英不同的萃取物体外抗甲型H1N1流感病毒作用,探讨其在甲型H1N1流感治疗上的应用。方法首先用乙醇萃取而得到蒲公英的乙醇萃取物,然后依次采用乙酸乙酯、正丁醇、石油醚、水萃取蒲公英的乙醇萃取物,得到不同溶剂的萃取物;选用狗肾传代MDCK细胞作为病毒的宿主对病毒进行培养和扩增;通过血凝效价和Real time RT-PCR实验,间接或直接检测蒲公英不同萃取物对病毒的中和作用和增殖抑制作用。结果 4种不同溶剂的蒲公英萃取物作用病毒后,只有石油醚、乙酸乙酯组的血凝效价数值出现了一定程度的下降,其中乙酸乙酯萃取物组的值下降了2-4倍;而石油醚萃取物在96 h时,中和实验组和增殖抑制组的血凝效价值分别下降了256倍和128倍。Real time RT-PCR检测表明,石油醚和乙酸乙酯萃取物明显抑制病毒的扩增量。作用96 h时,无论是中和实验还是增殖抑制实验,石油醚萃取物的作用都是最显著的,病毒扩增率较阳性对照分别减少了92.4%和95.6%。结论蒲公英乙酸乙酯萃取物和石油醚萃取物在体外有明显的抗甲型H1N1流感病毒的作用。

关键词：蒲公英甲型流感病毒狗肾传代细胞抗病毒作用萃取物

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